家畜主要组织相容性复合体的分型方法研究

生物体免疫应答的遗传学基础及其基因调控主要涉及免疫球蛋白、T细胞抗原受体和主要组织相容性复合体(maljor histocompatibility，MHC)3个基因系统。前两者是在个体内的细胞和分子水平呈现其多样性，而MHC则是在群体内的个体水平显示其多态性，在区别同一种群内不同个体免疫应答能力和疾病易感性等差异方面，3个基因系统中的MHC起主导作用，因而MHC是近年来免疫遗传学中最为活跃的领域。     

狂犬病病毒糖蛋白抗原性状的分子生物学研究进展

编者按罗廷荣先生１９９２年公派赴日本留学，在岐阜大学从事狂犬病病毒核酸的研究。１９９４年进入岐阜大学大学院（研究生院）攻读博士学位，进行狂犬病病毒糖蛋白的抗原性状的分子生物学研究，取得了重要的成果。１９９８年获兽医科学哲学博士学位并于同年回国，在广西...     

狂犬病病毒糖蛋白生物学功能研究进展

狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus,RABV）感染中枢神经系统引起的致死性人畜共患传染病。RABV糖蛋白存在于病毒表面,它既是病毒的主要保护性抗原,诱导体液免疫产生中和抗体和刺激T细胞产生细胞免疫,又是病毒与细胞受体结合的结构,在病毒致病性和嗜神经性中发挥重要作用,与病毒毒力直接相关。作者归纳总结国内外RABV糖蛋白结构与功能研究进展,并对糖蛋白中和抗体的检测与评价进行阐述。将为进一步揭示RABV糖蛋白生物学功能奠定基础,为糖蛋白中和抗体的诊断提供理论参考,为控制和消灭狂犬病做出相应贡献。     

益生乳酸菌Lactobacillus plantarum P-8在规模化养殖中对肉鸡生产性能和鸡肉中盐酸林可霉素残留的影响

以益生乳酸菌植物乳杆菌P-8饲喂肉鸡,研究其在规模化养殖中对肉鸡生产性能、粪便p H及吲哚和粪臭素含量、抗生素盐酸林可霉素残留的影响。选择18万只1日龄AA肉鸡为研究对象,随机平均分为3组,对照组为基础日粮+盐酸林可霉素(3 g/t);试验组1为基础日粮+植物乳杆菌P-8+盐酸林可霉素(3 g/t);试验组2为基础日粮+植物乳杆菌P-8+盐酸林可霉素(1.5 g/t)。试验结果表明:试验组肉鸡成活率、出栏重和饮水量显著高于对照组(P0.05),料重比显著低于对照组(P0.05),试验组间无显著差异(P0.05);试验组肉鸡粪便p H、吲哚和粪臭素含量显著低于对照组(P0.05),试验组间无显著差异(P0.05);试验组鸡肉中的盐酸林可霉素含量显著低于对照组(P0.01),试验组间无显著差异(P0.05)。由此表明,植物乳杆菌P-8在大规模肉鸡养殖过程中具有减少抗生素用量、改善肉鸡生长性能和养殖环境等特点,有利于肉鸡养殖业的持续健康发展,在健康养殖领域具有广阔的应用前景。     

CRISPR/Cas9介导的ASGR1基因敲除猪制备

猪(Sus scrofa)内皮细胞的去唾液酸糖蛋白受体1(asialoglycoprotein receptor 1,ASGR1)是诱发异种肝移植后受体发生血小板减少症的主要诱因之一.本研究在α-1,3-半乳糖基转移酶基因(α-1,3-galactosyltransferase,GGTA1)敲除的五指山小型猪基础上,利用规律成簇间隔短回文重复(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9,CRISPR/Cas9)结合体细胞核移植技术制备ASGR1基因敲除猪,针对猪ASGR1基因设计并构建了靶向表达载体单链导向RNAl (single guide RNA1,sgRNA1),将sgRNA1与增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)质粒共同电转染GGTA1基因敲除猪耳成纤维细胞,流式细胞仪富集筛选带绿色荧光的细胞后培养单细胞克隆.实验结果表明,PCR测序检测培养获得的41个单细胞克隆,37个克隆发生基因突变,ASGR1基因突变效率为90％,其中双等位基因敲除的细胞克隆30个,效率高达73％.选择4个ASGR1基因敲除类型不同的细胞为核供体进行核移植,将早期重构胚移植到4头受体猪,2头妊娠至终期,产仔猪6头,Western blot显示ASGR1基因敲除仔猪的肝脏中没有ASGR1的表达.对sgRNA1的13个潜在脱靶位点,分别设计引物进行PCR扩增和测序,结果显示没有脱靶现象.总之,本研究利用CRISPR/Cas9结合体细胞核移植技术快速高效地制备了GGTA1/ASGR1基因敲除五指山小型猪模型,有望解决异种肝移植后出现的血小板减少症,为临床过渡肝的应用研究提供了良好的研究材料.     

菲律宾蛤仔糖蛋白提取及体外抗肿瘤活性研究

以菲律宾蛤仔肉为研究对象,水提醇沉,Sevag法除蛋白,DEAE—SepharoseFF阴离子交换层析柱分离纯化,SephadexG-25凝胶柱除盐,得到1种白色组分,红外显示该组分具有糖蛋白的一般吸收特征。将该糖蛋白作用于前列腺癌细胞DU-145进行体外药物敏感性实验,结果显示,0．1moFL氯化钠溶液的洗脱峰组分对DU-145细胞具有明显增殖抑制作用。最适作用浓度约为25mg／mL,表明菲律宾蛤仔具有潜在的抗肿瘤作用。     

狂犬病病毒8202株糖蛋白膜外区真核表达载体的构建及其在DK细胞中的表达

为了研究狂犬病病毒(rabies virus,RV)糖蛋白(rgp)膜外区在以糖蛋白为免疫原的免疫应答中的作用,提取RV的RNA,通过RT-PCR扩增RV糖蛋白膜外区1375 bp的序列,将其克隆入pMD18-T载体中,经测序比对正确后,通过酶切将其亚克隆入pVAX1表达载体的多克隆酶切位点处,将酶切鉴定正确的阳性重组子命名为pVAX-rgp,构建表达狂犬病病毒糖蛋白膜外区的真核表达载体,在质脂体介导下转染DK细胞观察其表达情况。研究结果表明,经免疫荧光和Western blotting鉴定,有特异性荧光和60 ku条带产生,证明pVAX-rgp载体中的rgp可在DK细胞中表达。本研究通过成功构建狂犬病病毒8202株糖蛋白膜外区的真核表达载体,为下一步有关功能基因组的研究和基因疫苗的研制奠定了基础。     

水稻TRAP-PCR反应体系优化与P-糖蛋白基因片段的分析

对影响TRAP-PCR反应体系的各参数,包括模板DNA、dNTP、Taq DNA聚合酶和引物浓度进行了优化,建立了适合水稻的稳定,可重复的TRAP-PCR反应体系.在20μL PCR反应体系中,含80 ng模板DNA,0.25 mmol/L dNTP,0.75 U Taq DNA聚合酶,5 ng/μL随机引物和7.5 ng/μL特异引物.本研究对P-糖蛋白基因片段进行了克隆并序列分析,为深一步研究奠定了基础.     

缺氧诱导因子调节的靶基因在宫颈癌组织中的表达

目的：探讨缺氧诱导因子在宫颈癌发生发展过程中的作用。方法：应用免疫组织化学SP染色法观察正常宫颈28例、宫颈上皮内瘤样变（CIN）32例、浸润性宫颈鳞癌98例中缺氧诱导因子-1a（hypoxia inducible factor-1a,HIF-1a）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、P糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）的表达。结果：HIF-1a在正常宫颈、宫颈上皮不典型增生和浸润性宫颈癌组织中的表达分别为10.71%、37.50%、76.53%;VEGF的表达分别14.29%、46.88%、70.41%;P-gp的表达分别为21.43%、37.50%、54.08%。HIF-1a和VEGF随着宫颈病变的发展表达逐渐升高（从正常宫颈到宫颈上皮非典型增生再到浸润性宫颈鳞状上皮癌）,且各组间差异有显著性（P〈0.05）;P-gp的表达也逐渐升高,其在正常宫颈上皮的表达与浸润性宫颈癌组织中的表达差异有显著性（P〈0.05）,但其在正常组和CIN组以及CIN组和浸润性宫颈癌组中的表达差异较小,无显著性意义（P〉0.05）。相关分析表明,VEGF的表达与HIF-1a的表达显著相关（r=0.585,P〈0.01）,而P-gp的表达与HIF-1a的表达无相关性（P〉0.05）。结论：HIF-1a在宫颈癌组织中过度表达与宫颈癌的发生发展相关,这可能是通过调控VEGF的表达实现的。     

鲤春病毒血症病毒糖蛋白的高效表达和纯化

本研究从鲤春病毒血症病毒（Spring viremia of carp virus,SVCV）SVCV-741毒株克隆鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因（sue—g）,将svc-g亚克隆到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌E．coli BL-21（DE3）后,用IPTG诱导培养,获得菌体总蛋白。用SVCV毒株免疫山羊所得到的抗血清作为一抗进行免疫印迹实验,结果在硝酸纤维素滤膜上检测到50～71 kDa之间的特异性免疫条带,与SVCV糖蛋白预测分子量一致,研究证明了工程茵表达获得的重组蛋白具有与SVCV毒株相同的免疫原性,也证明了该蛋白的糖基化对其免疫表位是非必需的。本研究进一步通过发酵基因工程菌和蛋白质纯化过程,获得大量的鲤春病毒血症病毒糖蛋白,为后期免疫动物获得抗血清储备了原料,也为SVCV的免疫学检测方法的建立奠定了物质基础。