T.Spelta 1Bs染色体育性基因Rf3和rfk1的分子标记

为了建立T.Spelta1Bs染色体育性基因Rf3和rfk1的分子标记辅助选育技术体系,提高选育效率,对T.Spelta1Bs染色体上育性基因Rf3和rfk1进行AFLP分子标记研究。结果表明,利用AFLP技术对小麦进行分子标记研究可获得50～100条清晰、稳定的带纹,多态性较高,重复性好。根据T型细胞质的育性,对TSP3314/绵阳26的F2群体采用集群分类的方法构建等基因池,利用AFLP技术筛选16个Pst /Taq 引物组合,然后对F2群体进行AFLP分析,获得2个引物组合P3-T2,P4-T3,其与T.Spelta1Bs染色体有关育性片段Rf3基因和rfk1基因连锁。然后结合TSP3314/绵阳26的F2群体在T型细胞质下的育性结果,和可育株与K3315A测交后代的育性分离所得的K型细胞质下的育性结果,运用Mapmaker软件进行分析,找到了与T.Spelta1Bs染色体育性基因Rf3和rfk1连锁的分子标记。     

sdIBM用1／N展开技术的高阶修正项（Ⅱ）：在铀同位素上的应用

用１／Ｎ展开技术结合自洽Ｑ框架推导出的能谱展开式，应用于计算铀的三个同位素的核谱。理论能谱公式中只需调整一个形状参数ｘＱ，即可得出和实验符合的相当满意的结果，而且总的趋势是玻色子数Ｎ越大，理论计算的结果越好。     

维生素B1和B2的萤光光度同时测定法

探讨了用同步荧光法测定维生素Ｂ１和Ｂ２的操作步骤和条件。维生素Ｂ１和Ｂ２的测定范围分别为质量浓度０．００１￣４．０００ｍｇ／Ｌ，０．０００５￣５．０００ｍｇ／Ｌ。该方法维生素Ｂ１的回收率在１０２％￣１０６％之间，维生素Ｂ２在８５．５％￣１０３．１％之间。     

甘蓝型油菜隐性核不育杂交种沪油杂1号丰产性与适应性分析

沪油杂1号是利用隐性核雄性不育三系育成的甘蓝型双低杂交油菜新品种,含油量41.57%,芥酸含量0.32%,硫苷含量23.96μmol/g。在长江中、下游地区表现丰产性好、稳产性高、适应性强和增产潜力大。     

牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株gD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu／67株的MDBK细胞中扩增gD基因，将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析，设计合成3对引物，以获得的克隆质粒为模板，PCR扩增gD胞外域基因，将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载体中构建成表达质粒pGEX-4T—gDQ、pGEX-4T—gDQB、pGEX-4T—gDHB和pET—gDQ、pET—gDQB、pET—gDHB，利用上述质粒分别转化大肠杆菌BL21和BL21（DE3），IPTG诱导后SDS—PAGE检测，结果pGEX-4T—gDQ、pGEX-4T—gDQB、pGEX-4T—gDHB和pET—gDQ四个表达质粒出现表达且符合预期大小，Western blot表明表达产物均有抗原性。     

敌敌畏、敌百虫高效降解菌株DDB-1的分离鉴定及降解特性研究

从长期受有机磷农药污染的土壤中分离到一株能同时高效降解敌敌畏、敌百虫的菌株DDB-1，经过一系列生理生化实验和16SrDNA序列同源性分析，将该菌株鉴定为鞘氨醇单胞菌属（Sphingobiumsp．）。降解特性试验结果表明，菌株DDB-1能以敌敌畏和敌百虫为惟一碳源生长，初步推断菌株对敌百虫的降解有一条异于敌敌畏的降解途径；在25～42℃，pH6．5～8．5时降解性能良好，pH的变化对敌百虫降解效果的影响要小于敌敌畏，对敌敌畏、敌百虫的降解有着较广的pH范围和温度范围，在较高浓度的污染环境下同样能进行降解；在pH7、37℃时，100mg·L^-1敌敌畏和敌百虫分别经过15和30h降解至检测不出，降解率达100％。在灭菌土壤的农药降解试验中，100mg·L^-1敌敌畏和敌百虫分别经过5和7d降解至检测不出，降解速率远远超过不接菌土壤的敌敌畏、敌百虫降解速率，降解率达100%。该菌株在实际应用中有着很好的应用价值。     

猪泛素C端水解酶L1基因的克隆与序列分析

从人泛素C端水解酶L1(UCH_L1)基因出发,在dbEST数据库中同源搜索,找到1条与人UCH_L1基因编码氨基酸同源性较高且在香猪背最长肌中表达的EST(BM194679).通过电子克隆和进一步RT-PCR试验验证,获得猪UCH_L1基因全长cDNA序列,其全长 1 105 bp,开放阅读框(ORF)位于60～728 bp,编码223个氨基酸.同源性分析结果表明,与人、鼠UCH_L1基因cDNA编码区(CDS)同源性分别为91.2%和86.5%,蛋白质序列同源性均为96.6%.对该基因编码蛋白的结构和功能预测显示含有2个典型的疏水性区域,不含有信号肽,存在1个UCH_L1(pfam01088)保守结构域和多个磷酸化位点,属UCH_L1蛋白家族,故将该基因命名为猪泛素C端水解酶L1基因(登录号AY495532).     

H1亚型猪流感病毒广东株HA基因的原核表达

为了研制猪流感检测试剂和流感亚型特异性单抗筛选所需的重组抗原,本研究克隆和原核表达了H1N1亚型猪流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因.首先采用RT-PCR方法扩增了H1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的HA基因.测序结果表明,扩增的SIV HA基因cDNA长度为 1 701 个核苷酸,共编码566个氨基酸.BLAST分析表明,H1N1亚型SIV广东株HA基因核苷酸序列与GenBank中已发表的中国香港特别行政区、中国大陆、美国分离的经典H1亚型毒株相近,核苷酸序列同源性在89%以上.然后将HA基因的cDNA片段亚克隆至pET32a( )表达载体中,构建重组质粒pET32a-H1,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达.SDS-PAGE和凝胶扫描分析表明,HA基因在大肠杆菌中获得了高效表达,重组融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的25.2%.经免疫印迹证实重组蛋白可以被SIV特异性抗体所识别.     

耐盐性Imt1基因表达载体的构建及其在酵母中的高效表达

 将Imt1（Inositol O-methyltransferase，肌醇甲基转移酶）构建成酵母表达载体pBD#-3，在酵母双突变体gpd#+（-）(glycerol 3-phosphate-dehydrogenase,3-磷酸甘油脱氢酶)中高效表达，使gpd#+（-）突变株对氯化钠的耐性由2.5%提高到5.0%。生化分析表明，在每mg干酵母细胞内积累高达2.2nmol的Ononitol(芒柄醇)含量。Western blot分析证明了Imt1基因的表达。这一研究为植物耐盐基因工程开辟了一条新途径。     

3个籼粳杂交F1的花药培养初探

选用以IRBB60为父本的3个水稻籼粳杂交F1为试验材料,研究不同基本培养基与不同激素配比使用对其花药培养的影响。结果表明:(1)M8基本培养基适合于T475/IRBB60和Hu7/IRBB60的花药培养,而沈农15/IRBB60更适合在SK3基本培养基上培养;(2)添加有2 mg/L 2,4-D、4 mg/L NAA和0.5 mg/L KT的诱导培养基的出愈率比添加2 mg/L 2,4-D和2 mg/L NAA的培养基高0.09～2.68个百分点,并且其对进一步诱导芽的再分化有较好的影响;(3)添加激素组合为1 mg/L 6-BA、1 mg/L NAA和2 mg/L KT的MS-2分化培养基对沈农15/IRBB60的绿芽分化率最高,可达31.34%。