MAPK信号通路在镉致大鼠肝细胞凋亡中的作用

探讨MAPK通路在镉诱导大鼠肝细胞凋亡中的作用.采用两步灌流法获得大鼠肝细胞,经过24 h培养,用醋酸镉、醋酸镉与MAPK抑制剂(p38抑制剂SB202190、JNK抑制剂SP600125、ERK抑制剂U0126)共同处理肝细胞.用MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态和凋亡,免疫组织化学法检测p38蛋白表达.结果表明,镉可极显著提高肝细胞磷酸化p38的表达量(P＜0).01),而SB202190能极显著降低其表达(P＜0.01).SB202190可以显著或极显著提高镉处理组细胞的存活率(P＜0.05或P＜0.01),减少变形细胞和凋亡细胞数量,但SP600125和U0126作用相反.说明镉暴露导致肝细胞p38 MAPK途径激活而引起细胞凋亡.     

铜对猪原代肝细胞含铜酶活性的影响

选用新生仔猪的肝进行细胞分离培养,建立肝细胞体外培养模型,施以不同质量浓度的铜进行试验,观察记录肝细胞生长情况,检测含铜酶中的铜蓝蛋白(CP)、铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)和丙二醛(MDA)的变化.试验结果表明:在细胞培养液中添加一定质量浓度的铜,可提高CP和CuZn-SOD的活性.低质量浓度的铜对CP的影响很小；当铜质量浓度逐渐升高时,CP活性显著升高,但当铜质量浓度过高则抑制CP活性.低质量浓度铜对MDA影响不大,但随着铜质量浓度的增加MDA含量迅速升高.     

神经肽Y对犊牛肝细胞PEPCKmRNA丰度及其活性的影响

取单层培养36 h生长良好的犊牛肝细胞.采用单因素重复试验,分别添加0、50、100、200、500、1 000 ng/L的羊体外合成神经肤Y(Neuropeptide Y,NPY),每个处理3个重复(每个重复2孔),再培养12 h后分别提取RNA和制备细胞上清液.应用荧光定量PCR方法检测外源NPY对肝细胞糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)基因表达的影响,同时用比色法检测其对肝细胞PEPCK活性的影响.结果表明,一定浓度的NPY显著促进肝细胞PEPCK mRNA表达,增强了PEPCK活性.     

蛋鸡脂肪肝综合征的诊疗

鸡脂肪肝综合症又称脂肝病,是鸡体内脂肪代谢障碍,大量脂肪沉积于肝脏,导致肝脏脂肪变性的一种疾病.     

胰岛素对体外培养牛肝细胞胰岛素受体mRNA水平的影响

在新生牛单层肝细胞培养液中添加胰岛素,其浓度分别为0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L和100μmol/L,处理12h,应用半定量RT-PCR方法研究胰岛素对体外培养新生牛单层肝细胞胰岛素受体(IR)mRNA水平的影响.结果表明随胰岛素浓度的升高,肝细胞IRmRNA丰度呈下降趋势,指示肝细胞内IRrnRNA丰度下降以调节胰岛素浓度.     

以雏鸡肝细胞为靶细胞检测鸡TNFα细胞毒活性方法的建立

鸡源性肿瘤坏死因子α(TNFα)样品检测,通常使用微量细胞病变法,操作繁琐费时,尽管国外有利用生物学方法测定的报道,但因需要特定的细胞系作为靶细胞[1],使鸡TNFα检测难以开展。然而,TNFα活性检测对鸡免疫、抗感染和抗肿瘤等方面的机制研究具有重要的意义,为克服靶细胞...     

利用原位二步灌流法分离鸡肝细胞

试验选用15~18日龄的粤黄鸡苗,采用胶原酶原位二步灌流的方法分离肝细胞。对小鸡破坏大脑处死后,打开腹腔,先用PBS液对小鸡进行门静脉快速灌流,当肝脏呈现苍白略带黄色时改用Ⅳ型胶原酶溶液继续灌流,直至肝包膜与肝组织出现裂隙,即可分离出肝细胞。结果表明:用原位二步灌流法可得到大量活性高且分离较纯的鸡肝细胞。     

禽肝泰疗效与机理的流式细胞学研究

肉鸡脂肪肝综合征（fatty liver syndrome，FLS）是一种因饲料营养物质不平衡，造成鸡体内代谢机能紊乱而引起的以肝脏发生脂肪变性为特征的疾病。随着养禽业的发展，肉鸡发生FLS变得相当常见，给养禽业造成了巨大的经济损失。本研究旨在试验条件下，观察“禽肝泰”对FLS病理模型的治疗效果，并探讨其治疗机理，为FLS的诊断和中药治疗提供理论依据，更好地为养鸡业服务。     

鸭ChREBP基因表达载体构建及其对原代肝细胞和PC3细胞脂质性状的影响

[目的]探究鸭原代肝细胞脂质含量与碳水化合物反应元件结合蛋白基因(ChREBP)表达的关联性,为深入研究ChREBP基因对畜禽脂质代谢的遗传调控机制提供参考依据.[方法]采用Ⅳ型胶原酶消化法分离孵化21 d的鸭胚原代肝细胞,以DMEM高糖培养基进行培养.利用RT-PCR扩增鸭ChREBP基因编码区(CDS)序列,构建携带His标签的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His,通过脂质体法分别转染鸭胚原代肝细胞和人前列腺癌细胞(PC3);采用His标签检测试剂盒检测ChREBP基因的表达量,以脂质指标测定试剂盒测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量,并分析鸭胚原代肝细胞和PC3细胞中ChREBP基因表达与脂质指标含量的相关性.[结果]以构建的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His转染鸭原代肝细胞和PC3细胞均能发出绿色荧光,表明携带His标签的ChREBP基因能在鸭原代肝细胞和PC3细胞中表达.ChREBP基因表达量与鸭原代肝细胞和PC3细胞中的TG、TC和HDL含量均呈极显著正相关(P<0.01,下同),与LDL含量呈极显著负相关.[结论]以构建的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His转染鸭原代肝细胞和PC3细胞后均能发出绿色荧光,说明ChREBP基因表达对鸭原代肝细胞和PC3细胞中的脂质代谢作用机理相似,可促进细胞脂质累积.     

玉米赤霉烯酮对人正常肝细胞(LO_2)和人胚肾细胞(HEK293)的毒性作用研究

以体外培养的人正常肝细胞(LO2)和人胚肾细胞(HEK293)为模板,用MTT比色法研究了玉米赤霉烯酮对以上两种细胞株的毒性作用,结果表明,在所测浓度范围内,玉米赤霉烯酮对这两种细胞的抑制率随其作用浓度的增加而增强,而其作用浓度到达一定程度时,玉米赤霉烯酮对这两种细胞的抑制率保持在一定的范围内不再增加。实验结果证明在2.50μg/mL和1.25μg/mL的最高浓度下,玉米赤霉烯酮对人正常肝细胞(LO2)和人胚肾细胞(HEK293)的抑制率分别为86.61%和67.06%,可见其肝毒性和肾毒性明显。