空化射流条件下大豆分离蛋白糖基化产物乳液特性研究

为探究空化射流对大豆分离蛋白糖基化产物乳液特性的影响,以大豆分离蛋白、葡萄糖、葡聚糖为原料,通过空化射流处理辅助糖基化制备大豆分离蛋白-葡萄糖共价复合物乳液、大豆分离蛋白-葡聚糖共价复合物乳液,探究空化射流技术对大豆分离蛋白糖基化产物乳液的粒径、ζ-电位、微观结构、蛋白吸附率、乳析指数及抗氧化性的影响。结果表明：经过一定时间的空化射流处理后的糖基化产物乳液平均粒径显著降低、ζ-电位增大、微观结构液滴逐渐变得均匀,蛋白吸附率升高、乳析指数降低、还原力和DPPH自由基清除能力均升高,并在空化射流处理80 min时,乳液特性达到最佳,且相比大豆分离蛋白-葡萄糖共价复合物乳液,大豆分离蛋白-葡聚糖共价复合物呈现出更好的乳液特性;但随着空化射流处理时间的进一步增加,糖基化产物乳液的平均粒径升高、ζ-电位减小、微观结构开始出现聚集情况,蛋白吸附率呈降低趋势,乳析指数逐渐升高。适当时间下的空化射流辅助处理可以改善糖基化产物的乳液特性,提高乳液的储藏特性和抗氧化特性。     

国际科技资讯

中国研究乳糖糖基化酪蛋白水解物的糖基化位点及其生物活性在牛乳的热加工过程中,蛋白质和乳糖发生美拉德反应,生成糖基化蛋白质。中国研究人员制备乳糖糖基化酪蛋白化合物,用胰蛋白酶水解,得到的糖基化酪蛋白酸盐(glycated caseinate,GCN)水解物的乳糖含量为10.8 g/kg蛋白质。     

猴头菌转化EGB发酵液提取物抗氧化及抑制非酶糖基化活性研究

猴头菌转化银杏叶粗提物发酵液具有清除体外自由基及抑制体外非酶糖基化反应的作用，对四氧嘧啶诱导的糖尿病模型小鼠具有显著的降血糖效果。但由于发酵液成分复杂，有效成分含量低，不便于直接服用，因而有必要对发酵液功能成分进行提取。笔者以抗氧化活性、体外非酶糖基化反应为指标，比较了、猴头菌转化EGB发酵液经AB-8吸附前后活性物质的活性变化，以期为发酵液的分离提取及提取产物的利用提供参考。     

猪瘟病毒E2蛋白靶向化树突状细胞疫苗的制备及对家兔的免疫效果

猪瘟病毒E2蛋白不但具有很强的保护性,而且与病毒毒力密切相关。本研究旨在利用基因工程技术,原核表达纯化猪瘟病毒E2蛋白并对其进行N-糖基化修饰,以使其靶向树突状细胞,从而增加其免疫效力。结果表明,经间苯二酚硫酸法及质谱分析鉴定,猪瘟病毒E2蛋白质ε-赖氨酸成功进行了体外糖基化修饰。进而将糖基化E2蛋白质免疫家兔,首免后14d进行第二次免疫,分别在不同时间采血制备血清,经ELISA检测,免疫7d,糖基化E2蛋白质组抗体水平显著高于猪瘟病毒组与E2蛋白质组(P<0.01);至14d时,糖基化E2蛋白质组抗体水平开始下降,与疫苗组、E2蛋白质组相比差异不显著(P>0.05);在二免后14d,糖基化E2蛋白质组抗体水平上升至最高水平,显著高于猪瘟疫苗组和E2蛋白质组(P<0.01);至二免后21d,糖基化E2蛋白质组抗体水平略高于猪瘟疫苗组(P>0.05),显著高于E2蛋白质组(P<0.05);至二免后28d,糖基化E2蛋白质组抗体水平达到稳定值,显著高于另2组(P<0.05)。结果说明,糖基化E2蛋白质免疫后有效诱导了机体的抗体反应,抗体产生快而持久,具有良好的免疫记忆,免疫效果显著优于常规疫苗,是新型疫苗开发的优选抗原,具有很深的开发潜力。     

N-糖基化猪瘟病毒E2蛋白不同接种剂量对BALB/c小鼠的免疫效果分析

E2蛋白（E2 protein,E2-Pro）为猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）的主要结构蛋白之一,是CSFV最主要的保护性抗原,因此应用体外糖基化技术获得的N-糖基化E2蛋白（glycosylated E2 protein,Gly-E2-Pro）理论上可进一步增强机体的免疫应答。为了验证这一设想以及获得最佳的免疫效果,本研究分别将Gly-E2-Pro按20,50,100μg/只,接种BALB/c小鼠,同时设E2-Pro与CSFV对照,于不同时间采血制备血清,通过血清中IgG、IL-4及INF-γ水平的测定,评价Gly-E2-Pro的免疫效果及确定最佳免疫剂量。结果显示,免疫Ⅰ组（20μg/只）Gly-E2-Pro虽刺激机体产生了IgG免疫应答,但水平较低,与E2-Pro、CSFV组差异不显著;免疫Ⅲ组（100μg/只）Gly-E2-Pro免疫后,前期出现免疫抑制,至28d抗体水平急剧上升,达到极高值;免疫Ⅱ组（50μg/只）Gly-E2-Pro免疫后,血清IgG水平显著高于E2-Pro与CSFV组,同时显著高于免疫Ⅰ组与Ⅲ组。以上结果说明,Gly-E2-Pro可有效增强机体的体液免疫应答,50μg/只为最佳接种剂量。     

1株H7N9亚型禽流感病毒的遗传进化和分子特征分析

对1株H7N9亚型禽流感毒株A/environment/Hebei/621/2017(H7N9)简称EN621进行基因测序和序列分析,研究其遗传进化趋势和分子生物学特征。结果显示,该毒株血凝素(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)分别与人源流感毒株的HA和NA属于同一进化支进化而来,EN621毒株HA蛋白的裂解位点存在多个连续碱性氨基酸,符合典型高致病性AIV特征;HA蛋白上有4个糖基化位点与人源流感毒株HA蛋白糖基化位点一致,且第226位氨基酸为Q,优先与禽类α-2,3唾液酸受体结合;NA蛋白上有6个潜在糖基化位点与人源流感毒株NA蛋白糖基化位点一致;NP蛋白第184氨基酸位点由A突变为K,对于AIV的复制和致病性有着密切联系。本研究提示EN621毒株存在感染人的潜在可能性,应加强H7N9亚型禽流感病毒的监测,建立相应的防范机制,保障公共安全。     

N-糖基化对植酸酶phy(Q_F)酶学性质的影响

为探讨N-糖基化对植酸酶phy(QF)酶学性质的影响,将植酸酶基因phy(QF)在毕赤酵母中进行了表达,利用脱糖基化酶Endo Hf去除重组植酸酶phy(QF)的糖链,对去除糖链前后的植酸酶phy(QF)进行了纯化和酶学性质研究与比较。结果表明,糖基化的植酸酶phy(QF)分子量约为53 k Da,酶活为3 201 U/mg,Km=392μmol/L,Vmax=3 267 U/mg;糖基化的植酸酶phy(QF)最适p H值为4.5,最适反应温度为55℃,与去糖基化的植酸酶phy(QF)的最适p H值无明显区别,比去糖基化的植酸酶phy(QF)最适温度提高了5℃,Tm值提高约2℃。经70℃孵育10 min后,去糖基化的植酸酶phy(QF)完全失活,而糖基化的植酸酶phy(QF)仍残留13%的活性,说明N-糖基化作为一种重要的翻译后修饰,对植酸酶phy(QF)的稳定性有促进作用。     

苏云金芽孢杆菌vip2A(c)基因在昆虫细胞中的表达

利用苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographacalifornicamulticapsidnucleopolyhedrovirus,AcMNPV)Bac-to-Bac表达系统在粉蚊夜蛾(Trichoplusiani)TnHi5细胞中表达了GFP与Vip2A(c)酶活成分区域的融合蛋白(GV2融合蛋白),研究了该蛋白对昆虫细胞和病毒产生的影响。Bac-gfpDNA转染48h后部分TnHi5细胞已经检测到荧光,48￣120h出现荧光的细胞数目增加,最后70%左右的细胞都有较强的荧光。而Bac-gv2DNA转染后2￣5d仅有极少TnHi5细胞出现荧光且多呈零散分布,推测这可能是由于杆状病毒极晚期表达的GV2融合蛋白中的Vip2A对细胞骨架成分肌动蛋白进行ADP-核糖基化,从而影响了芽生型病毒粒子(BV)的正常产生或限制了BV在其它细胞间的传播。     

用尿嘧啶糖基化酶预防PCR污染的研究

利用尿嘧啶糖基化酶能特异性地降解ＤＮＡ双链中尿嘧啶核苷的作用，在ＰＣＲ体系中以ｄＵＴＰ代替ｄＴＴＰ使产物中掺入ｄＵＴＰ，在ＰＣＲ扩增前用ＵＤＧ水解，即可特异性地预防ＰＣＲ产物的污染。引用该酶消化建立的防污染ＰＣＲ体系，０．１Ｕ的ＵＤＧ即可预防１０＾３－１０＾１０产物分子污染，并用于动物标本中土拉热弗朗西丝氏菌的检测，证明ＵＤＧ－ＰＣＲ可以特异性地检出标本中的靶细菌。     

鱿鱼肌原纤维蛋白糖基化产物凝胶性研究

[目的]利用糖基化改性提高鱿鱼肌原纤维蛋白的凝胶性.[方法]将葡萄糖、乳糖、壳聚糖、麦芽糖、果糖及淀粉分别与鱿鱼肌原纤维蛋白混合,经二段加热方式制备凝胶,筛选合适用糖后进一步研究加糖量、二段式加热温度和加热时间对鱿鱼肌原纤维蛋白凝胶性影响.[结果]在鱿鱼肌原纤雏蛋白中添加糖有助于提高凝胶性,其中鱿鱼肌原纤维蛋白（以10 g湿重计）与2.0g果糖和1.5g淀粉混合,经50℃加热1h和90℃加热30 min二段式加热所得蛋白凝胶质量好,质构分析得出凝胶咀嚼性、弹性和破裂力分别是糖基化改性前（鱿鱼肌原纤维蛋白自身）的4.7、2.6和1.5倍.[结论]鱿鱼肌原纤维蛋白中添加果糖和淀粉发生糖基化改性有助于提高鱿鱼肌原纤维蛋白的凝胶性.