转基因小鼠乳汁中重组人乳铁蛋白的提取与抗菌活性分析

从人乳铁蛋白cDNA转基因小鼠(Mus musculus)中收集2个品系(PCL25和AP)的乳汁.采用凝胶过滤层析法提取重组人乳铁蛋白(rhLF).通过SDS-PAGE电泳.Western blot和ELISA鉴定并检测提取物中rhLF含量,按不同浓度rhLF作琼脂扩散抑制大肠杆菌(Eschenchia coil)和沙门氏菌(Salmonella)试验.结果表明,PCL25和AP转基因小鼠乳汁提取物中的rhLF含量为7-8 mg/mL;rhLF分子量为78 kD,与天然人乳铁蛋白分子量一致;对大肠杆菌和沙门氏菌均具有明显的抑菌作用.     

科学家正培育转基因羊可产“人奶”

俄罗斯和白俄罗斯科学家正在培育转基因山羊,其所产羊奶含有在人奶中发现的成分——乳铁蛋白,这是普通羊奶没有的成分。对于无法喂奶的母亲来说,这项突破可以帮助宝宝享受母乳的全部益处。     

乳铁蛋白及其在养猪生产上的应用研究进展

乳铁蛋白是能与铁结合的糖蛋白,它广泛分布于动物的外分泌物中,由一条多肽链组成(氨基酸组成见表1),分子量大概为80000Da。有研究表明,乳铁蛋白有三种异构形式:即α型、β     

酪蛋白和巨细胞病毒复合启动子激活人乳铁蛋白cDNA基因在转基因小鼠乳腺中的表达

为了提高转基因动物乳腺特异性表达水平,构建了两种不同启动子的乳腺特异性表达载体,以比较其乳腺特异性表达效果.应用山羊β-酪蛋白或牛αs1-酪蛋白调控序列、鸡β-球蛋白隔离元件、巨细胞病毒(CMV) 基因表达涮控元件构建了,乳腺特异性表达复合启动/增强子(Pcmv) ,以单一的酪蛋白启动子作为对照,与人乳铁蛋白cDNA组成乳腺特异性表达载体,并制备了转基因小鼠.经ELISA检测,复合启动/增强子构件指导人乳铁蛋白cDNA在原代转基因小鼠乳腺中重组人乳铁蛋白(rhLF) 表达水平(2.0～8.1 g·L-1) 明显高于单一酪蛋白启动子构件(0～12 mg·L-1) ,而在所有转基因小鼠的血清和唾液中未检测到rhLF.结果提示:酪蛋白-Pemv复合启动/增强子不仅可提高转基因小鼠乳腺特异性表达水平,而且具有良好的乳腺表达特异性.     

转外源Trxs基因大麦耐盐性有关生理生化特性分析

以过量表达硫氧还蛋白s基因(Trxs)的转基因大麦株系(LSY-11-1-1)及其非转基因对照(CK)为试验材料,研究了50mmol/L盐胁迫条件下,Trxs过量表达对大麦幼苗耐盐性有关生理生化特性的影响.结果显示:盐胁迫下转基因大麦的鲜重与干重高于对照,而丙二醛(MDA)与羰基含量低于对照.盐胁迫下转基因大麦幼苗叶片的过氧化物歧化酶(SOD)活性与过氧化氢酶(CAT)活性普遍高于对照.转基因大麦类囊体中铁蛋白大量积累的持续时间比对照长.由此可以推测,Trxs至少可以通过两条途径缓解盐胁迫对大麦幼苗生长的抑制作用:一方面增强抗氧化酶活性、有效清除过量产生的活性氧;另一方面能促进铁蛋白含量的增加、抑制Fenton反应来减少活性氧的过量产生,从而赋予转基因大麦幼苗更强的抗盐胁迫能力.     

常乳中牛乳铁蛋白的纯化及抗菌活性研究

[目的]研究从常乳中纯化牛乳铁蛋白的工艺条件,探讨牛乳铁蛋白的抗菌活性。[方法]选用SP sepharose HP作为强阳离子交换介质,利用AKTApurifier10高效液相色谱仪纯化牛乳铁蛋白。[结果]结果表明,牛乳铁蛋白在pH值7.5、浓度0.85 mol/L的NaCl洗脱液中可以被洗脱下来,且产品纯度为90%以上。牛乳铁蛋白浓度为5 mg/ml时对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用。[结论]该研究建立了从常乳中纯化牛乳铁蛋白的方法,为大规模生产具有活性的牛乳铁蛋白奠定了基础。     

大豆铁蛋白（Ferritin）基因家族的克隆与表达特性分析

本研究从大豆中克隆到铁蛋白基因家族的13个成员,分别命名为GmFer1;1、GmFer2;1、GmFer2;2、GmFer3;1、GmFer3;2、GmFer7;1、GmFer10;1、GmFer11;1、GmFer14;1、GmFer14;2、GmFer18;1、GmFer18;2和GmFer18;3,它们之间序列相似性介于37.2%~99.1%,并且具有保守Ferritin-like domain,被聚为3个亚家族（GroupI、II和III）。大豆铁蛋白基因在根、茎、叶和种子中均表达,100μmol/L的柠檬酸铁处理后,大豆铁蛋白基因在根、茎和叶中的表达均受到强烈诱导,表达量显著增强。随着大豆种子的不断发育,大豆铁蛋白基因的表达量呈现出早期积累,后期下降的变化趋势。本研究为深入研究大豆铁蛋白基因的生物学功能和调控机制提供依据。     

转人乳铁蛋白基因山羊乳对大鼠生长及代谢机能的影响

选用30只100 g左右清洁级SD大鼠,雌雄各半,随机均分为3组,转基因乳组每天2次灌胃转人乳铁蛋白基因(hLF)波尔山羊乳1 mL(蛋白含量0.93 g·mL-1),普通乳组灌胃未经任何处理的普通波尔山羊乳1 mL(蛋白浓度0.93 g·mL-1),生理盐水组灌胃等量灭菌生理盐水;自由采食、饮水,连续15 d;颈部静脉采血致死,收集血清.结果显示:灌胃转hLF基因山羊乳显著提高了雌、雄大鼠的日增重,与生理盐水组相比差异极显著(P<0.01),与普通乳组相比差异显著(P<0.05),而普通乳组与生理盐水组相比差异不显著;灌胃转基因和普通山羊乳对其他表观及生化指标均无显著影响(P>0.05).试验结果表明:短期灌胃转hLF基因山羊乳能够促进大鼠的生长,但对大鼠的代谢机能没有显著影响.     

猪乳铁蛋白N叶(PLF-N)在毕赤酵母中的表达及抑菌活性鉴定

根据猪乳铁蛋白N叶(PLF-N)的蛋白序列和毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过全基因合成法合成改造后的PLF-N基因片段,将其克隆到pGAPZα-A质粒中构建分泌型重组酵母表达载体 pGAPZα-A- PLF。pGAPZα-A- PLF 通过限制性内切酶Avr Ⅱ酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168内。PCR检测结果发现,PLF-N基因与毕赤酵母染色体稳定结合,Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子。在GAP启动子调控下,PLF-N重组蛋白获得分泌表达,其分子质量约为38 ku,上清表达量约为364 μg/mL。琼脂糖孔穴扩散法检测结果显示,该表达产物对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有较好的抑菌活性,且对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度(MIC)分别为12.5、25.0 μg/mL。     

重组人乳铁蛋白对原代肝、肾细胞的毒性研究

[目的]通过模拟肝、肾毒性的体外细胞试验,研究重组人乳铁蛋白是否对小鼠原代肝肾细胞具有毒性作用,为其进一步的安全性评价提供依据。[方法]采用模拟体外消化试验所得的重组人乳铁蛋白消化产物及重组人乳铁蛋白为受试物,牛乳铁蛋白为对照,以小鼠原代肝、肾细胞为平台,用MTT法检测受试物对细胞活性的半数抑制浓度（IC50）,研究细胞毒性剂量-反应关系。[结果]在设定的试验条件下,未发现重组人乳铁蛋白对肝肾细胞存在靶毒性,结果能与已进行的亚慢性毒性试验相互印证。[结论]为对重组人乳铁蛋白的进一步安全性评价及其他转基因食品的安全性评价方法提供了参考。