脂源蛋白提取物对大鼠胰腺和小肠消化酶活性的影响

采用随机区组法将60只成年雌性SD大鼠分为3组,即对照组、低浓度灌胃组和高浓度灌胃组.对照组大鼠每只每天灌胃生理盐水2 mL,低浓度灌胃组和高浓度灌胃组大鼠分别灌胃脂源蛋白提取物各2 mL(浓度0.3 mg/mL和0.6 mg/mL).在灌胃7 d和14 d后分别处死各组大鼠10只,观察胰腺和小肠脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶活性的变化.灌胃7 d后,脂源蛋白提取物对照组与试验组胰腺脂肪酶活性[对照组(152±53.8) U/g,高浓度组(231.3±42.1) U/g]和小肠脂肪酶活性[对照组(73.2±6.5) U/g,高浓度组(90.5±5.2) U/g]均有显著提高,差异显著(P<0.05),而对胰腺和小肠的蛋白酶及淀粉酶活性无影响(P>0.05);灌胃14 d后,脂源蛋白提取物对照组与高浓度组大鼠胰腺脂肪酶活性[对照组(155.9±48.9) U/g,高浓度组(248.0±24.6) U/g]和小肠脂肪酶活性[对照组(74.6±12.8) U/g,高浓度组(99.4±4.1) U/g]均有显著提高,差异极显著(P<0.01);同时,脂源蛋白提取物对小肠蛋白酶活性[对照组(1.85±0.59) U/g,高浓度组(3.86±0.75) U/g]也有提高作用(P<0.01);小肠和胰腺淀粉酶活性在灌胃7 d和14 d后均有所上升,但各组间差异均不显著.以上结果表明,脂源蛋白提取物主要增强胰腺和小肠脂肪酶活性,而且高剂量长时间给予脂源蛋白提取物也可使试验动物小肠蛋白酶活性增加,但对胰腺和小肠淀粉酶活力影响不大.     

hLF转基因羊繁殖、遗传与表达稳定性

【目的】分析转基因对人乳铁蛋白（human Lactoferrin,hLF）转基因羊繁殖性能的影响,及转基因在不同世代中的遗传与表达稳定性。【方法】应用自主研发的原代hLF转基因山羊（G0代公羊）建系,与普通奶山羊常规交配获得F1代;F1代公羊与F1、F2代母羊或普通奶山羊（N）交配获得F2代;F2代公羊与F2代母羊交配获得F3代。分别采用PCR和ELISA方法对其后代个体进行整合与表达鉴定;统计各世代不同配种方式所获得的后代数量、转基因整合率、母羊受胎率、羔羊异常率等繁殖性能数据。【结果】经过多个繁殖周期,各世代转基因羊受胎率、产羔率等繁殖性状均正常。获得F1代hLF羊19只,转基因整合率为24.7%（19/77）;F2代hLF羊86只,其中通过（F1♂×N♀）交配方式获得的是62只,转基因整合率为33.2%（62/187）;通过（F1♂×F1♀）交配方式获得hLF羊16只,转基因整合率为76.2%（16/21）;通过（F1♂×F2♀）交配方式获得hLF羊8只,转基因整合率为34.8%（8/23）;获得F3代hLF羊9只,转基因整合率为52.9%（9/17）。ELISA方法测定F1、F2、F3代羊泌乳20周乳汁中hLF的表达发现,hLF在转基因羊乳汁中稳定表达,3个世代hLF羊乳中的平均表达量分别为351.75、340.00和326.25 μg•mL-1。【结论】hLF基因的转入未对转基因羊群的繁殖性能产生显著影响,hLF基因能在山羊群体世代间稳定遗传和表达。     

谷氨酰胺对模拟运输应激大鼠体内氨基酸的影响

以大鼠为试验对象,设阴性对照(A)组和模拟低频与高频2种运输应激组.模拟应激组分别设为阳性对照(B)组、苯巴比妥(P)组和谷氨酰胺(Gln)组.A和B组每天灌胃生理盐水1mL·只-1,P组和Gln组每天分别灌胃苯巴比妥15mg·(kg·只)-1和Gin 500mg·(kg·只)-1,10d后,除A组外,其他6组分别模拟低频和高频运输应激2h,然后测定所有试验鼠血清、组织中氨基酸含量的变化,探讨Gln对运输应激中大鼠的保护作用.结果表明:与A组相比,补充Gln后,低频或高频应激大鼠的血清、组织中与应激密切相关的氨基酸含量均无显著差异(P＞0.05),而与B组相比,所测氨基酸差异显著(P＜0.05)或差异极显著(P＜0.01);镇静药物苯巴比妥对抗运输应激则没有效果.证明Gln具有保护大鼠抵抗运输应激的作用.     

同源臂长度对CRISPR/Cas9介导hLF基因打靶山羊β-乳球蛋白位点效率的影响

【目的】探究同源臂长度对CRISPR/Cas9系统介导人乳铁蛋白基因（hLF）打靶山羊β-乳球蛋白基因（BLG）座位点效率的影响,为今后体细胞核移植制备BLG -/hLF +基因打靶山羊提供科学依据,也为CRISPR/Cas9基因编辑系统介导BLG基因或其他基因座位点定向精准分子修饰的遗传育种提供借鉴。【方法】针对山羊BLG基因第一外显子区域设计构建sgBLG/Cas9载体,电转染山羊胎儿成纤维细胞,PCR验证BLG基因座位点致突变活性;以BLC14乳腺特异性表达载体为基础构建3种同源臂长度（6.0、3.5和1.2 kb）的hLF基因打靶载体,分别与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经500 μg/mL G418筛选后,采用PCR检测基因打靶情况。【结果】sgBLG/Cas9载体在山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座附近切割DNA双链的致突变活性效率在30%~35%。构建获得3种同源臂长度的hLF基因打靶载体（BLC14-1、BLC14-2和BLC14-3）,对应的同源臂长度分别为6.0、3.5和1.2 kb;将3种hLF基因打靶载体与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经5次电转染和G418筛选,分别获得83、77和86株药物抗性细胞,经PCR同源重组检测最终获得42、38和44株BLG -/hLF +基因打靶细胞株,即hLF基因在山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座的平均打靶效率分别为50.6%（42/83）、49.4%（38/77）和51.2%（44/86）。3种不同长度同源臂构建的hLF基因打靶载体在山羊BLG基因座位点的打靶效率在统计学上无显著差异（P>0.05）,表明同源臂长度对CRISPR/Cas9介导hLF基因打靶山羊BLG基因座位点无显著影响。【结论】利用CRISPR/Cas9系统介导hLF基因打靶山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座位点能成功获得多株hLF +/BLG -基因打靶细胞株（BLG基因座定点打靶hLF基因）,但打靶载体同源臂长度对CRISPR/Cas9系统介导BLG位点定向整合hLF基因的打靶效率无明显影响。     

颗粒TMR与精粗分饲对不同品种山羊育肥期生产性能的影响

采用颗粒全混合日粮(TMR)与精粗分饲两种饲养方式进行山羊育肥试验。结果表明,颗粒TMR饲养波尔山羊与地方马头山羊,平均日增重均达到120 g/只以上,精粗分饲平均日增重为58.5 g/只,颗粒TMR较精粗分饲试验期增重收益高57.8元/只以上,使用颗粒TMR饲养方式优势明显。不同精粗比颗粒TMR对马头山羊和波尔山羊育肥试验结果表明,高精粗比(5∶5)波尔山羊组日增重为(152±21.94)g,料重比为6.24∶1,其日增重显著高于其他各试验组(P0.05),试验期增重收益较其他组高24.3~31.6元/只;高精粗比(5∶5)马头山羊组与低精粗比(4∶6)波尔山羊组和马头山羊组之间日增重差异不显著(P0.05),增重期收益无明显差异。     

转hLF基因山羊血液生理生化指标检测分析

[目的]本试验旨在研究人乳铁蛋白(human lactoferrin,h LF)基因的整合对转基因山羊代谢和血液学指标的影响。[方法]选择出生日期相近,饲养条件相同,健康、无病的转h LF基因山羊(试验组)30只,非转基因山羊(对照组)20只,公、母各半,分别在不同时期检测血液常规指标白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)等,血液生化指标直接胆红素(DBIL)、肌酐(CREA)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)、尿素等,并对指标进行品种(转h LF基因羊和非转基因羊)和性别间的比较分析。[结果]各时期转h LF基因羊与正常非转基因羊的白细胞数、红细胞数、血红蛋白含量和红细胞压积差异均不显著(P0.05),18月龄雄性转h LF基因羊总蛋白水平显著高于非转基因羊(P0.05)。各时期性别间的比较结果显示:直接胆红素、甘油三酯、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶和尿素等指标在不同性别之间存在显著差异(P0.05),其他各项生化指标在各时期的转基因羊和非转基因羊之间、性别之间差异均不显著(P0.05)。[结论]h LF基因对山羊的代谢和血液学指标无显著影响。     

亚麻籽木脂素在山羊瘤胃中的转化及其对瘤胃代谢的影响

选用6只(4♂、2♀)装有永久性瘤胃瘘管及临时性颈静脉插管的淮南山羊,进行交叉试验.试验期按体重灌胃50 mg·kg-1质量分数为20%亚麻籽木脂素提取物,分别用高效液相色谱法测定木脂素和挥发性脂肪酸含量,研究亚麻籽木脂素在山羊瘤胃中的转化及其对瘤胃代谢的影响.结果表明,在对照期瘤胃液中存在较低质量浓度的亚麻籽木脂素(0.003 mg·mL-1)、肠内酯(0.007 mg·mL-1)及肠二醇(0.017 mg·mL-1),但血清中未检测出木脂素成分.灌胃木脂素提取物能显著提高瘤胃液及血清中上述3种动、植物木脂素含量;同时,木脂素化合物使总脱氢酶活性升高25.5%(P>0.05),并使瘤胃液pH值和氨氮含量分别降低1.1%(P<0.05)和36.3%(P<0.01),微生物蛋白及总挥发性脂肪酸含量分别升高70.1%(P<0.01)和37.4%(P<0.01).结论:在饲喂青干草及豆粕型精料日粮条件下,瘤胃液中存在植物木脂素和2种最主要的动物木脂素.灌胃亚麻籽木脂素提取物后能显著提高3种木脂素含量,且均能被吸收进入血液.木脂素可以直接或间接影响瘤胃内微生物活性,从而改善瘤胃代谢水平.     

仿刺参新型免疫增强剂的应用

以初始体重为(30±2)g的仿刺参为研究对象,分别注射500μL 1.0 mg·mL-1黄柏提取物、苦参提取物、枸杞多糖提取物、黄芪多糖提取物、菊粉和天蚕素等6种免疫增强剂,对照组注射相同体积的无菌生理盐水,研究免疫增强剂对仿刺参免疫功能的影响.结果表明:注射后第3天,黄柏提取物和菊粉组仿刺参体腔细胞总数量(TCC)显著增加,最高达15×106个·mL-1(P<0.05);菊粉组TCC达到106个·mL-1时的呼吸爆发活性为0.35(P<0.05);黄芪多糖提取物、菊粉和苦参提取物组TCC达到106个·mL-1时的吞噬活性为0.42,与对照组的差异显著(P<0.05);免疫试验组的酚氧化酶(PO)和酸性磷酸酶(ACP)活性在注射后的第3天达到最大值,黄柏提取物组的PO和ACP活性分别达83和0.065 U·mL-1(P<0.05);免疫试验组的超氧化物歧化酶(SOD)活性在注射后的第1天出现最大值,其中以菊粉组的变化最显著(P<0.05),SOD活性达到97 U·mL-1;PO、ACP和SOD活性随着注射时间的延长呈下降趋势,活性与注射时间之间无正比关系,不同免疫增强剂产生的效果不同.     

毛酸浆果醇提物对大鼠的利尿和抗肾盂肾炎作用的研究

目的研究毛酸浆果醇提物(AEFPP)对大鼠的利尿作用和抗肾盂肾炎作用。方法对生理盐水负荷的正常大鼠灌胃给予AEFPP(0.60 g/kg、0.30 g/kg、0.15g/kg)以观察AEFPP对大鼠的利尿作用;另向大鼠膀胱内注入大肠埃希菌O111B4,建立急性肾盂肾炎模型,再灌胃给予AEFPP(0.60 g/kg、0.30g/kg)每日1次,连续给药8d。第8d给药1h后,抽取膀胱尿液,处死,取肾脏,称重。膀胱尿液及部分左肾组织匀浆作细菌学检查,部分左肾进行病理组织学检查。结果AEFPP(0.60g/kg、0.30g/kg、0.15g/kg)组排尿量增加,与生理盐水组比较均有显著差异(P<0.01);AEFPP组(0.30g/kg)大鼠尿液和肾匀浆的CFU值减少,与模型组比较有显著差异(P<0.01)。结论AEFPP能显著增强肾脏的排尿功能,具有明显的利尿和较好的抗肾盂肾炎的作用。     

罗伊氏乳杆菌对大鼠不同类型腹泻的影响

为研究罗伊氏乳杆菌的益生作用,本试验研究了蓝狐源罗伊氏乳杆菌ZJF036对葡聚糖硫酸钠(DSS)、沙门氏菌、庆大霉素(GEN)+头孢拉定(CE)诱导的腹泻的预防及治疗作用。本试验选取了80只2～4周龄SD大鼠,随机分为10组每组8只。整个试验周期21 d,正常对照组灌胃无菌生理盐水,DSS对照组只饮用2%DSS溶液(62.5 g/L),沙门氏菌对照组只灌胃沙门氏菌菌悬液(1×10⁸ CFU/mL),GEN+CE对照组只饮用GEN+CE溶液,DSS预防组、沙门氏菌预防组和GEN+CE预防组先灌胃罗伊氏乳杆菌后分别饮用DSS溶液、沙门氏菌菌悬液和GEN+CE溶液,DSS治疗组、沙门氏菌治疗组和GEN+CE治疗组分别先饮用DSS溶液、沙门氏菌菌悬液和GEN+CE溶液后灌胃罗伊氏乳杆菌菌悬液。试验结束计算大鼠体重总增重,测定各组大鼠血清中白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4 (IL-4)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。试验结果显示:与DSS对照组相比,DSS预防组大鼠总增重显著增加(P<0.05);...