陆川猪ANKRD1基因克隆及其表达差异分析

[目的]克隆陆川猪心肌锚蛋白重复域1基因(ANKRD1),并进行生物信息学及组织表达谱分析,为研究ANKRD1在陆川猪机体内的功能作用提供参考依据.[方法]根据NCBI已公布的野猪ANKRD1基因序列(NM_213922.1)设计特异性引物,采用TRIzol法提取陆川猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌和皮下脂肪的总RNA,反转录合成cDNA,并以此为模板进行ANKRD1基因克隆,通过MegAlign、Protaram、Protscale、MHMM Server和Sig-nalP等在线分析软件进行生物信息学分析,最后以实时荧光定量PCR检测ANKRD1基因在陆川猪各组织中的表达情况.[结果]陆川猪ANKRD1基因蛋白编码区(CDS)序列全长960 bp,编码319个氨基酸残基,与NCBI已公布野猪ANKRD1基因(NM_213922.1)的CDS序列存在4处碱基突变,但均为同义突变,二者的ANKRD1氨基酸序列同源性为99.6%.陆川猪ANKRD1基因编码蛋白分子量为36125.70 Da,理论等电点(pI)为7.09,属于稳定蛋白,其二级结构中α-螺旋占46.39%、无规则卷曲占39.81%、β-转角占9.09%、延伸链占4.70%;陆川猪ANKRD1蛋白不存在跨膜结构,也无信号肽,有多个磷酸化位点.陆川猪ANKRD1基因在其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌和皮下脂肪等7个组织中均有表达,其中以心脏中的相对表达量最高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05,下同),在脾脏中的相对表达量最低,显著低于在心脏、肝脏、肺脏和背最长肌中的相对表达量.[结论]ANKRD1基因在陆川猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌和皮下脂肪等组织中均有表达,且存在明显差异,故推测ANKRD1基因在不同组织中发挥不同作用.     

不同月龄广西富凤麻公鸡的繁殖性能比较

[目的]明确不同月龄广西富凤麻公鸡间的繁殖性能差异和相关性,为其种质资源保护提供更好的配种条件,同时为种鸡生产提供参考依据.[方法]以广西富凤麻公鸡为研究对象,从精液品质、睾丸发育状况及血清激素等角度系统研究不同月龄公鸡间的繁殖性能差异和相关性,并使用不同月龄公鸡的精液对母鸡进行人工授精,孵化第9 d照蛋并统计受精率.[结果]5、8和18月龄广西富凤麻公鸡的精液体积和精子密度无显著差异(P>0.05,下同),18月龄广西富凤麻公鸡的精子活力较5和8月龄公鸡的精子活力极显著降低(P<0.01,下同),在精子畸形率方面则表现为18月龄广西富凤麻公鸡较5和8月龄公鸡极显著升高.广西富凤麻公鸡在5~8月龄期间,随着月龄的增长公鸡睾丸的体积和重量均呈上升趋势,睾丸曲细精管直径呈增粗趋势,血清睾酮含量呈上升趋势;但在8~18月龄期间,整体上表现为随着月龄的增长公鸡睾丸的体积和重量呈下降趋势,睾丸曲细精管直径逐渐变细,且血清睾酮含量急剧下降.广西富凤麻公鸡各繁殖性能指标间的相关性分析发现,血清睾酮含量与两侧睾丸总重量、精液体积与精子活力呈中等强度正相关,精子畸形率与血清睾酮含量、精子活力与精子畸形率呈强负相关.不同月龄广西富凤麻公鸡精液的受精率无显著差异.[结论]广西富凤麻公鸡在5~8月龄期间其繁殖性能随着月龄的增长而提高,但在8~18月龄期间整体上表现为繁殖性能随月龄的增长而下降.即8月龄广西富凤麻公鸡睾丸发育状况最佳,生产上可适当提高8月龄公鸡的利用率.     

对猪小腔卵泡孤雌激活胚胎发育力的初步探索

为探讨直径为2 mm以下和2～6 mm猪卵泡卵母细胞的体外培养分裂率与囊胚率差异,采用相同体外成熟培养条件,来培养从不同直径的2种卵泡中所抽出的卵母细胞,在卵母细胞成熟培养后44～48 h,对卵母细胞进行化学激活和体外培养,观察胚胎体外发育能力;在培养48 h时进行分裂数据统计,培养168 h时统计囊胚个数。结果发现,2 mm以下猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均分裂率与2～6 mm猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均分裂率差异显著,分别为62.46%、81.76%(P0.05);2 mm以下猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均囊胚率与2～6 mm猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均囊胚率差异不显著,分别为11.71%、15.30%。说明正常卵泡、小腔卵泡的卵母细胞在体外成熟后,孤雌激活胚分裂率依次降低,孤雌胚胎的分裂能力随卵泡直径的增大而增强;正常卵泡、小腔卵泡的卵母细胞体外成熟后,孤雌激活胚囊胚率随卵泡直径的增大有一定增高,但变化不显著。     

用免疫抑制素提高水牛超排效果的初步研究

为了探讨免疫抑制素对水牛超排的作用,进一步揭示水牛超排机理,选取17头具有正常发情周期的母水牛,随机分为试验组(10头),对照组(7头),试验组首次免疫重组猪抑制素亚基融合蛋白1 mg/头,首免后第28和第56天分别进行加强免疫,剂量为0.5 mg/头,对照组牛同期注射矿物油与生理盐水混合佐剂。试验组牛在首免、二免和三免当天分别用B超仪进行卵泡大小监测和计数,在超排后第6天用B超仪进行卵泡和黄体数进行统计。用免疫抑制素组水牛平均卵泡数在加强免疫后,卵泡数量从8.8增加到15.0个,但与对照组相比差异不显著(P>0.05)。超排后,试验组的平均成熟卵泡数、黄体数和排卵率分别是12.2±0.79,9.0±1.06和73.77%,与对照组相比差异显著。胚胎回收总数和可用胚胎数差异不显著。结果表明,利用免疫抑制素免疫水牛,可提高水牛的超排效果。     

夏季日粮中主要营养水平对肉种母鸡生产性能的影响

为研究夏季日粮中粗脂肪、粗蛋白、赖氨酸和蛋氨酸水平对肉种鸡生产性能的影响,27周龄良凤肉用种母鸡随机分为4个处理,每个处理3个重复,每个重复为490只,处理一饲喂对照日粮(CF2.7%,CP16.5%,Lys0.83%,Met0.40%),处理二饲喂高脂肪日粮(CF5.43%),处理三饲喂高蛋白日粮(CP18.2%),处理四饲喂高赖氨酸和蛋氨酸日粮(Lys0.91%,Met0.44%),试验期共112天。结果表明,对照日粮的营养水平是适合的,在此基础上分别增加日粮的粗脂肪水平、粗蛋白水平、蛋氨酸和赖氨酸水平,都不能提高肉种母鸡的生产性能,也不能减轻夏季炎热带来的影响。     

山羊对不同饲草瘤胃干物质降解率的研究

选择装有永久性瘘管的雄性黑山羊3只(25±0.5)kg,采用尼龙袋法研究不同牧草的干物质瘤胃降解率。结果显示,新鲜菠萝皮、青贮菠萝皮、荆树叶、苦楝、早稻在瘤胃内都有较好的降解率;青贮对菠萝皮在瘤胃内的降解率有显著提高(P<0.05)。该试验得出了全株象草的降解曲线,以期为生产实践提供理论指导。     

牛乳中酶活性与体细胞数的相关性分析

对155份牛乳样品中的谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)和体细胞数(SCC)分别进行了测定。结果表明:牛乳中GPx与SCC之间呈强正相关关系(r=0.972,P<0.001),但SCC低于20万个/mL的样品中检测不到GPx活性;牛乳中LDH与SCC之间呈强正相关关系(r=0.969,P<0.001),SCC介于30~80万个/mL的样品的LDH活性与SCC之间存在直线相关关系,而SCC大于80万个/mL的样品,LDH活性与SCC之间存在曲线相关关系;牛乳中ALP与SCC之间不存在相关关系(r=0.116,P=0.152)。     

管角螺对几种环境因子的耐受性试验

试验结果表明,管角螺幼螺生存温度为6～32 ℃,适宜温度20～30 ℃.管角螺对低盐具有较强的耐受力,适应盐度为13.0～39.0;生存pH为6.2～10.4,并具有较强的耐干露能力.气温28～30 ℃,壳高10.0 mm的幼螺干露12 h无死亡,干露24 h和36 h的死亡率分别为75%和100%.幼螺营底栖生活,底质条件对管角螺的个体成活率无明显影响.饵料以双壳贝类为主,对贝肉、鱼虾肉糜具明显的趋食性.     

卵形鲳鲹 JAK3 蛋白的原核表达与纯化

【目的】纯化获取卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)JAK3(TroJAK3)重组蛋白,为了解TroJAK3蛋白功能、相互作用及抗体制备奠定基础。【方法】应用分子生物学技术构建重组质粒pET-32a-TroJAK3,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测TroJAK3重组蛋白表达情况。【结果】PCR扩增片段长度为3 333 bp,经双酶切鉴定、测序确认序列和开放阅读框正确,结果显示成功构建重组质粒pET-32a-TroJAK3。经终浓度为1 mmol/L IPTG 37℃诱导4 h后进行SDS-PAGE检测,结果表明TroJAK3重组蛋白以包涵体形式大量表达,分子量约为140 ku。经Ni-IDA树脂柱纯化,获得纯化的重组蛋白。Western blot检测结果显示有140 ku的条带,表明TroJAK3重组蛋白能被抗His抗体识别。【结论】成功构建了重组质粒pET-32a-TroJAK3,纯化得到高纯度的TroJAK3融合蛋白。     

PTD-FNK蛋白对雄性小鼠生理功能的影响

[目的] 探究PTD-FNK蛋白对雄性小鼠生理功能的影响。[方法] 将16只8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组（n=8）和PTD-FNK蛋白组（n=8）,对照组腹腔注射生理盐水,PTD-FNK蛋白组腹腔注射300 μg/（kg·BW）PTD-FNK蛋白,每天腹腔注射给药1次,连续给药7 d;给药期间每天记录小鼠的体重、体温、血糖、采食量、饮水量,计算试验期间总采食量、总饮水量、体增重;于试验第1天和最后1天测量鼻肛距,计算试验前后Lee's指数;试验结束立即处死小鼠,称量心脏、肾脏、肝脏、脾脏和睾丸重量,计算脏器指数;分离小鼠附睾,制备精子悬液,测定精子活力和质膜完整率;利用qPCR法检测睾丸组织中细胞凋亡相关基因Bax和Caspase-3、氧化应激相关基因SOD和GPX1、内分泌相关基因STAR、17β-HSD的mRNA相对表达量。[结果] 与对照组相比,PTD-FNK蛋白组小鼠总采食量极显著（P<0.001）下降,总饮水量显著（P<0.05）下降;Lee's指数、体温、体重、血糖无显著（P>0.05）变化。肝脏指数显著（P<0.05）下降,其他脏器指数无显著（P>0.05）变化。精子活力极显著（P<0.01）升高,精子质膜完整率无显著（P>0.05）变化。睾丸组织中Bax基因mRNA相对表达量极显著（P<0.01）升高,Caspase-3基因mRNA相对表达量无显著（P>0.05）变化,SOD基因mRNA相对表达量极显著（P<0.01）升高,GPX1基因mRNA相对表达量无显著（P>0.05）变化,17β-HSD、STAR基因的mRNA相对表达量无显著（P>0.05）变化。[结论] PTD-FNK蛋白可以抑制雄性小鼠的采食、饮水及肝脏的生长发育,提高小鼠的精子质量。