侵染蚕豆ClYVV的鉴定及其衍生的小干扰RNA的深度测序鉴定研究

对安徽省合肥市采集到的具有明显典型花叶症状的蚕豆叶片进行深度测序,鉴定到样品中存在三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus, ClYVV),并获得了ClYVV的完整基因组序列,随后通过直接测序扩增基因组区域获得完整的基因组ClYVV-HF。获得的ClYVV-HF基因组由9 585个核苷酸组成,不包括poly(A)尾巴。ClYVV-HF的全部核苷酸序列与之前报道的来自日本的分离株(AB011819、NC_003536)和来自韩国的分离株(KF975894)分别具有95.45%和95.10%的核苷酸同源性。进一步分析了ClYVV-HF衍生的小干扰RNA的表征。vsiRNAs的大小为21~22 nt,vsiRNAs的5' 末端碱基偏向于A / U。ClYVV-HF来源的小干扰RNA大多来源于其基因组链中的7个热点,其中5个热点以21 nt vsiRNAs为主。生物学实验表明,ClYVV可通过汁液摩擦接种多种豆科作物。这是有关中国ClYVV分离株全部核苷酸序列的首次报道。     

黑曲霉YF1菌株对烟嘧磺隆的降解条件研究

黑曲霉(Aspergillus niger)YF1菌株是本实验室筛选得到的对烟嘧磺隆具有较强降解能力的菌株。为优化YF1菌株的降解条件,本试验分别对葡萄糖浓度、培养温度、初始pH和转速进行单因素试验,结果表明,YF1菌株降解烟嘧磺隆的最适条件为:葡萄糖浓度5g/L、培养温度30℃、初始pH值6.50和转速50r/min。本试验在研究其降解条件的同时,发现溶液的pH均出现下降,随后采用高效液相色谱检测草酸、L-苹果酸、α-酮戊二酸、乙酸、柠檬酸、D-苹果酸、琥珀酸的标准品,通过保留时间确定样品中的有机酸为草酸,但未检测出其它6种有机酸,因此,可以确定YF1菌株可以代谢葡萄糖产生草酸。本试验初步明确了黑曲霉YF1菌株对烟嘧磺隆的降解特性,为该菌株的应用奠定了基础。     

拟南芥开花抑制基因TFL1多克隆抗体的纯化与特异性检测

为了获得敏感性和特异性高的TFL1多克隆抗体,本研究构建了GST-TFL1和His-TFL1原核表达载体并转入大肠杆菌表达菌株BL21中。经IPTG诱导和蛋白纯化,成功获得了分子量约为46kD的GST-TFL1和22kD的His-TFL1融合蛋白。利用纯化的融合蛋白His-TFL1作为抗原免疫,获得了TFL1的多克隆抗体血清。抗体血清经偶联了GST-TFL1融合蛋白的纯化基质进行免疫亲和纯化获得了纯化的TFL1多克隆抗体。免疫印迹检测抗体敏感性和特异性发现,纯化后的抗体不仅能特异地识别细菌内纯化的GST-TFL1和His-TFL1融合蛋白,也能与拟南芥中TFL1蛋白发生特异性反应。该研究结果为深入研究TFL1抑制植物开花的分子机制提供了有力的工具。     

微生物肥料宁盾与农药的兼容性

为了使宁盾能够更好的得到示范推广,对当前农民常用的47种农药与微生物肥料宁盾的兼容性进行了评估。结果表明:嘧霉胺、氟啶胺、氟菌肟菌酯、咪鲜胺、病毒K、多抗菌素和病毒立克在某一浓度内与宁盾兼容性较好,但随着浓度的改变会抑制宁盾的活菌数;艾敌达和吗胍乙酸铜在任何浓度下都与宁盾的兼容性一般;甲霜灵锰锌、腐霉利、甲霜霜霉威、醚菌酯、井冈霉素、生石灰、氟乐灵、印楝素、霉止在任何浓度下与宁盾的兼容性都较差;建议甲霜霜霉威、井冈霉素、印楝素、咪鲜胺、嘧霉胺、吗胍乙酸铜可以在其使用10d后使用宁盾;氟啶胺可以在其使用15d后对作物使用宁盾;甲霜灵锰锌、醚菌酯可以在其使用30d后对作物使用宁盾,腐霉利、氟乐灵、氟菌肟菌酯不建议将其与宁盾复配使用。生石灰可以在与土壤混拌后再使用宁盾,艾敌达和吗胍乙酸铜可以与宁盾进行复配使用。由此说明多种农药都可与宁盾配合使用,而且使农药的使用效率提高。     

食用酱油中曲霉的检测方法

为了快速检测酱油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素产生菌的污染,利用现代分子技术并结合曲霉菌的一些菌落与孢子特征差异,建立了曲霉菌快速检测方法。结果表明,使用黑曲霉钙调蛋白基因所设计的黑曲霉特异性引物,能够将黑曲霉与其他曲霉分离,黑曲霉中可以扩增出钙调蛋白基因特异性片段,而在米曲霉和黄曲霉中不能扩增到该基因片段。利用aflR等多个已知基因设计特异性引物,扩增结果表明,米曲霉和黄曲霉的菌株并无特异性条带差异。但是,黄曲霉与米曲霉的菌落特征及孢子特征差异显著。由此建立的以PCR检测结合菌株培养特征区分多种曲霉的方法,可以用于检测酱油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素产生菌的污染。     

利用PCR技术专化性检测瓜类细菌性果斑病菌

将hrpB2基因作为检测靶标,根据hrpB2基因设计了1对特异性引物HB2F2/HB2R2,用此特异引物从瓜类细菌性果斑病菌菌株中扩增出290 bp的特异性片段,而其余参试菌株和甜瓜组织的PCR反应结果为阴性,灵敏度试验证明可以检测到103CFU/ml靶标菌体。对市售的17个品种的甜瓜种子进行PCR检测,其中4个品种检测出携带有瓜类细菌性果斑病菌。将hrp基因作为靶标,为快速检测瓜类细菌性果斑病菌提供了新的方法。     

丙草胺防治直播稻田杂草稻的技术研究

为了探寻对栽培稻安全的杂草稻防除技术,采用整株测定法研究了丙草胺对杂草稻的毒力及解草啶减轻丙草胺对栽培稻药害的应用技术,并通过田间试验检验了这一技术的安全性。结果表明:丙草胺在450g/hm2时,可显著抑制杂草稻和栽培稻的生长;采用30mg/L解草啶浸种48h,可显著减轻丙草胺对栽培稻的药害,随着丙草胺施药量的增加,解草啶的保护作用逐渐减弱。田间试验结果说明:用30mg/L解草啶浸种栽培稻48h,丙草胺的施药剂量在450~675g/hm2时对栽培稻安全;当丙草胺剂量为900g/hm2时,栽培稻产量显著下降。     

小麦纹枯病菌中的dsRNA及其与菌株生物学特性的相关性

对采集自我国山东、河南、江苏、安徽4省的21株小麦纹枯病菌菌丝中的dsRNA进行了检测,研究了dsRNA条带与菌株菌落形态、生长速度、对小麦的致病力等生物学特性之间的相关性。结果表明,从16个菌株中检测到dsRNA条带,dsRNA的大小和数量存在丰富的多样性。致病力测定结果表明这21个小麦纹枯病菌菌株的致病力差异显著。目前暂未发现小麦纹枯病菌中dsRNA的类型和数量与菌株的菌落形态、生长速度及致病力等性状存在明显的相关性,但是致病力较弱的菌株中dsRNA条带的多样性更丰富。本研究为今后发掘小麦纹枯病菌中的低毒真菌病毒作了初步的探索。     

转座子随机突变芽孢杆菌的研究进展

近年来,随着功能基因组学的发展,转座子随机突变技术因操作简便易行而被广泛应用.某些具有随机转座特性的转座子及其衍生物,已成为发现新基因、克隆功能基因、发掘已知基因的新功能以及研究蛋白功能的有效工具,其中转座子Tn917、Tn10及mariner类家族转座元件已被改造并成功应用于芽孢杆菌突变体库的构建及基因功能的研究中.本文介绍上述3种转座子的结构、转座特点及在芽孢杆菌中的应用,并分析了mariner类家族转座元件的优势及应用前景.     

浅黄恩蚜小蜂寄生对烟粉虱海藻糖含量、酶活和热激蛋白表达水平的影响

本文以烟粉虱Bemisia tabaci Gennadius及其优势寄生蜂浅黄恩蚜小蜂Encarsia sophia (Girault & Dodd)为研究对象,测定了浅黄恩蚜小蜂寄生烟粉虱若虫后6、12、24、48和72 h,寄主体内海藻糖含量、海藻糖酶活性变化以及3种热激蛋白基因的即时表达情况.结果表明,自寄生蜂寄生后烟粉虱体内海藻糖含量先升高后降低,而海藻糖酶活性则先降低后升高,二者的变化拐点均表现在寄生后24 h.此外,寄生能够诱导烟粉虱hsp90过量表达,但同时抑制hsp70的表达.热激蛋白hsp20的表达量先升高后降低,且3种基因均在寄生后12h开始出现表达差异.本研究证明海藻糖和热激蛋白参与了寄生蜂与寄主互作体系,同时探讨了二者在寄生蜂与寄主互作过程中的具体作用,对于揭示寄生蜂-寄主互作机制有一定的参考价值.