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101.
利用真核表达的猪流感病毒NP蛋白制备其特异性的单克隆抗体 总被引:1,自引:0,他引:1
为制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)单克隆抗体(MAb),本研究将重组质粒pMD-NP中含有的SIVNP基因亚克隆于pCAGGS真核表达质粒中,获得重组质粒pCAGGS-NP,将其转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)和western blot检测表明NP蛋白在293T细胞中获得了表达。将pCAGGS-NP以100μg/只剂量免疫4周龄~5周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,利用杂交瘤细胞融合技术获得1株稳定分泌抗SIVNP的MAb杂交瘤细胞株(3D7);该MAb经Ig亚类鉴定为IgM,轻链为κ链,其诱导小鼠产生的腹水ELISA效价为1:105;纯化3D7腹水并对其进行亲和力及抗原结合活性的测定,ELISA曲线图显示亲和力常数为1.02×106M-1,IFA结果显示其可与H1N1、H3N2、H9N2亚型SIV发生特异性反应,具有良好的反应活性。该MAb的制备将为进一步建立猪流感的诊断方法以及分析NP蛋白抗原表位等方面的研究奠定基础。 相似文献
102.
摘 要:1999-2002年本试验室从我国南方健康鸭体内分离到21株H5N1亚型禽流感病毒,对其进行系统地生物学特性和遗传演化分析发现,其中A/Duck/FuJian/01/02(简DKFJ)和A/Duck/Guangxi/53/02(简DKGX) 属于同一基因型, 对鸡都呈高致病性,但对哺乳动物模型Balb/c小鼠的致病性明显不同: DKGX对小鼠呈低致病性(MLD50>106.5),DKGX株反向基因操作系统本试验室已经建立,而DKFJ对小鼠呈高致病性(MLD50<100.5)。为了研究这两株病毒对哺乳动物模型Balb/c小鼠致病性差异的分子机制,本研究构建了对DKFJ的8质粒反向基因操作系统,并通过细胞转染技术成功拯救了该病毒(R-DKFJ)。R-DKFJ在对哺乳动物模型Balb/c小鼠的致病性保持了与亲本野生毒(W-DKFJ, MLD50<100.5)一致的生物学特性,并且对小鼠呈全身感染,即106EID50鼻腔感染小鼠后第三天在脑、脾、肾、肺脏等脏器检测到病毒。DKFJ反向基因操作系统的成功建立为阐明H5N1亚型禽流感病毒对哺乳动物模型Balb/c小鼠的致病机制等方面奠定了基础。 相似文献
103.
禽流感HA基因疫苗脂质体的制备及其理化性质 总被引:17,自引:1,他引:16
用改良的逆相蒸发法制备了H7亚型禽流感保护性抗原血凝素(HA)基因重组质粒pSVH7脂质体。电镜观察表明,该脂质体多呈球形的单层或多层结构,脂质体粒径分布均匀,粒径范围20~700nm,平均粒径163nm,主要粒径分布位于50~200nm(84.80%)。重组质粒DNA在脂质体的制备过程中保持了稳定性,并能抵抗DNA酶的水解破坏作用。吸收光谱表明,在248nm及268nm处脂质体有2个特征吸收峰,DNA的存在不改变吸收峰的位置,但能增加吸收峰的强度。 相似文献
104.
105.
为建立H6N6亚型禽流感病-毒(AIV) A/Chicken/GuangDong/S1311/10 (W-CKGD)反向遗传操作系统,本研究构建了W-CKGD的8个重组质粒,拯救出AIV A/Chicken/GuangDong/S1311/10 (R-CKGD).全基因序列测定结果表明,救获病毒R-CKGD与野生病毒W-CKGD的核苷酸序列完全相同.R-CKGD与W-CKGD具有相同的受体结合特性和对BALB/c小鼠均呈低致病性,以106 EID50剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,病毒仅在小鼠的呼吸道复制,可以引起小鼠体重下降但均不造成死亡.实验结果表明,R-CKGD与W-CKGD保持了一致的生物学特性,从而为进一步研究H6亚型AIV的致病机理及跨宿主传播机制等提供了良好的平台. 相似文献
106.
A型流感病毒是一种重要的人畜共患病病原,严重威胁全球公共卫生安全。PB2蛋白的帽子结合结构域(CBD)在流感病毒的转录过程中发挥重要功能,是抗流感病毒药物的重要靶点之一。为获得高纯度原核表达的A型流感病毒的CBD蛋白,本研究利用同源重组策略将8×His标签与一株H5N1亚型高致病性禽流感病毒的CBD区基因序列克隆至原核表达载体pET28a中,构建重组质粒pET28a-8×His-CBD,经PCR及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经不同浓度IPTG诱导不同时间后,经SDS-PAGE检测蛋白表达后使用镍柱纯化。结果显示,菌体裂解上清中在21 ku处可见目的条带,与8×His-CBD蛋白预期大小符合,且以0.5 mmol/L IPTG于37℃诱导6 h时蛋白表达量最高,镍柱纯化后可获得纯度大于95%的8×His-CBD蛋白。为确定该蛋白是否具有生物学活性,本研究以帽子结构类似物m7GTP对其进行等温滴定量热试验,结果显示8×His-CBD蛋白和m7GTP结合时存在明显热峰,表明8×His-CBD蛋白具有生物学活性;经计算,其Kd值为1.71×10... 相似文献
107.
浅谈对荷兰等地高致病力禽流感的认识 总被引:1,自引:0,他引:1
自 2 0 0 3年 2月底 ,荷兰、比利时和德国相继爆发高致病性禽流感 (HPAI) ,不仅给本国的养禽业造成了巨大的经济损失 ,严重阻碍了本国的对外贸易 ,也给他国造成了巨大的威胁。中国是世界第一养禽大国 ,预防和控制HPAI对于促进养禽业持续、稳定、健康地发展有极为重要的意义。1 高致病性禽流感的危害巨大HPAI是能给养禽业带来毁灭性危害的I类烈性传染病。自 195 9年以来 ,全世界共爆发了 2 0次HPAI,其中 14次是在鸡群中爆发的 ,每次HPAI的爆发都造成了严重的损失。此次荷兰高致病性H7N7HPAI是危害最严重的一次禽流感大流行。这次… 相似文献
108.
对反转录-聚合酶链反应扩增克隆的H7亚型禽流感病毒(AIV)A/Afri.Star/Eng-Q/983/79/(H7N1)的血凝素(HA)基因进行了核苷酸序列分析。结果,克隆的HA基因共1707bp,包括完整的阅读框架;同源性分析表明该毒株起源于欧亚群系;HA裂解位点只有一个碱性氨基酸,显示典型的低致病力特征。H7亚型AIVHA基因的克隆成功为分子诊断和基因工程疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
110.