猪流感的综合防制

猪流感（swine influenza,SI）是由猪流感病毒（swine influenza virus,SIV）引起的一种急性高度传染性呼吸道疾病。临床以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭、高发病率、低死亡率为特征。     

猪流感病毒NP基因重组复制缺陷型腺病毒的构建与表达

以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆至质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-NP-EGFP。利用脂质体转染法将穿梭质粒pDC315-NP-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选到重组腺病毒rAd-NP-EGFP。经PCR和Western blotting鉴定,结果表明NP基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物学活性。重组腺病毒rAd-NP-EGFP经增殖、纯化后其TCID50可达1.26×1010/mL,为进一步研究该重组病毒的免疫原性奠定了基础。     

H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白225位氨基酸对病毒致病性的影响

【目的】流感病毒的致病性是由多个基因共同决定的,笔者之前的研究结果发现当两株具有相似基因特征的H1N1亚型猪流感病毒进行HA基因替换以后,病毒对小鼠的致病性发生了改变。通过确定影响病毒致病性的关键氨基酸位点,为进一步揭示流感病毒致病力差异奠定了基础。【方法】 对ZD71和SY130的HA蛋白氨基酸序列进行比对,确认氨基酸差异位点并设计定点突变引物,构建单点突变的重组病毒并测定其鸡胚半数感染量（EID₅₀）。将拯救的亲本病毒、HA单基因替换重组病毒及单点突变重组病毒以感染复数（MOI）为0.001和0.1的病毒量分别接种于MDCK和A549细胞,测定病毒的体外复制能力;将上述各株病毒以50 μL含10⁶EID₅₀的剂量经滴鼻途径接种BALB/c小鼠,分别采集小鼠的脑、鼻甲、肺、脾、肾等脏器,匀浆处理后接种鸡胚分析病毒在小鼠体内各脏器的复制情况;将病毒分别以50 μL含10¹-10⁶EID₅₀的剂量经鼻腔感染BALB/c小鼠,感染后每天称量小鼠体重,当小鼠体重下降比率超过25% 时判定为死亡,统计死亡情况,测定病毒的小鼠半数致死量（MLD₅₀）,评估各突变病毒对小鼠的致病性,与亲本病毒进行分析比较后,获知决定病毒致病性的关键氨基酸位点。【结果】ZD71和SY130病毒HA蛋白共存在4个氨基酸差异位点,分别为4、138、144和225位（H3 Numbering）。经过定点突变、病毒拯救及序列测定确认,分别获得含有单个位点突变的重组病毒。通过测定病毒在MDCK和A549细胞上的复制情况,结果发现与亲本病毒rZD71相比较,突变病毒rZD71-HA/G225E在感染MDCK细胞的各检测时间点、及感染A549细胞24—48 h后,复制滴度均显著提高;与rSY130相比较,突变病毒rSY130-HA/E225G在感染MDCK细胞12—36 h后、及感染A549细胞36—72 h后,复制滴度均显著降低。而4、138、144位点的突变对病毒的复制影响较小。进一步的小鼠感染试验发现HA 225位氨基酸的改变显著影响了病毒对小鼠的致病性,与亲本病毒rZD71相比,225位氨基酸由G突变为E后,病毒rZD71-HA/G225E的MLD₅₀由4.32 log₁₀EID₅₀降低至3.0 log₁₀EID₅₀;病毒不仅在小鼠鼻甲和肺脏内检测到,而且在脾脏和肾脏中也均有一定水平的复制。【结论】 HA蛋白225位氨基酸对两株H1N1 SIV对小鼠的致病性具有重要决定作用,提示在后续开展的病原学监测中要密切关注该位点氨基酸的变异情况,为更好地防控动物流感乃至人流感的大流行提供科学依据。     

重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP对小鼠免疫保护性的研究

将重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP以不同免疫剂量接种BALB/c小鼠,通过检测小鼠免疫后的抗体以及抵抗H5N1亚型流感病毒攻击的保护对rAd-H5HA-EGFP的免疫保护性进行了评估。分别以108 TCID50、107 TCID50的rAd5-H5HA-EGFP免疫小鼠,初次免疫后3周进行加强,剂量为2×108 TCID50和2×107 TCID50,同时以接种rAd5-EGFP和PBS的小鼠作为对照。二免后3周,将各组试验小鼠随机分为2组,分别应用106 EID50的SW/FJ/1/01株和CK/HuN/77/05两株H5N1亚型流感病毒进行攻击。结果显示,重组病毒108 TCID50和107 TCID50的免疫剂量均能够诱导高水平的HI抗体生成,rAd-H5HA-EGFP免疫小鼠在受到病毒SW/FJ/1/01和CK/HuN/77/05攻击后,与接种腺病毒rAd-EGFP和PBS的对照组小鼠相比,没有出现明显的体质量减轻,攻毒后病毒在免疫小鼠体内的复制被完全或部分抑制,脏器内检测到的病毒含量明显低于对照组小鼠;免疫小鼠在受到CK/HuN/77/05毒株攻击时,没有出现死亡(0/5),而接种rAd-EGF...     

猪2型圆环病毒病的防控

猪圆环病毒病是断奶仔猪及架子猪一种新的传染病。病猪表现为进行性消瘦,皮肤苍白或黄疸,呼吸急促、震颤、皮炎、母猪繁殖障碍等。猪2型圆环病毒病具有免疫抑制作用,致病机理以破坏猪免疫系统为主,造成免疫功能下降或丧失,进而继发感染其他疾病,极难控制。同时猪2型圆环病毒感染会导致猪B淋巴细胞耗损,引起免疫抑制,使多种疫苗丧失免疫效力,降低猪群免疫力和腱康水平     

2010年上半年辽宁省禽病发病特点与防控措施

辽宁省动物疫病预防控制中心针对辽宁省动物疫病监测建立了以传统季度监测为主导、与门诊监测相结合的动物疫病主动监测系统,中心动物门诊作为动物疫病监测哨点,在完成诊疗工作的同时,定期收集门诊病例信息,并对病例相关信息进行汇总与分析,对重大动物疫病的发病态势进行预警分析,为辽宁省动物疫病的防控提供支撑.     

流感研究数据库(IRD)在病毒研究中的应用

流感研究数据库(The Influenza Research Database,IRD)由美国过敏症和传染病研究所(National Institute of Allergy and Infectious Diseases,N IAID)建立的,是为流感病毒研究提供信息支持的一个生物信息学资源中心。IR D综合了流感病毒的各种数据,提供了持续改进的分析可视化工具,用于流感病毒数据挖掘和假设生成,提供了用于数据存储、分享的个人工作空间,促进了流感诊断、治疗及疫苗研制与研究。IRD可对用户提供的序列及其它相关数据进行分析和可视化,具有预测新变异蛋白、注释相关表型序列标记及表型效应、血凝素(hemagglutinin,HA)分支的分类、自动转换HA亚型编号等功能。本文旨在介绍IRD数据库(https://www.fludb.org)的相关功能,促进流感研究工作的开展。     

表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及其免疫原性

RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)株的HA基因,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-H5HA-EGFP.采用Ad-Max同源重组系统和共转染技术,构建了表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-H5HA-EGFP).经目的基因PCR检测及序列测定,结果表明:HA基因已经正确地插入到腺病毒的基因组中;通过RT-PCR检测与Western blot分析,结果表明:HA基因能够进行正确转录,并且所表达的蛋白具有相应的生物学活性.子代重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP经增殖、纯化后感染性滴度可达2.26×1010 TCID50 mL-1.rAd-H5HA-EGFP免疫BALB/c小鼠能够诱导特异性的HI抗体产生,有效阻止病毒在体内的复制.     

禽流感与鸡新城疫免疫距离测定技术的初步研究

鸡禽流感与新城疫免疫评价指标对科学指导家禽疫苗免疫工作意义重大，不仅关系到家禽免疫程序制定与免疫时机把握，更直接关系到家禽的健康生产与经济效益。本文根据近几年鸡禽流感与新城疫免疫抗体监测数据，结合当前禽病的流行情况、病原变异情况、免疫情况、饲养环境变化情况等，通过测定家禽免疫HI距离，研究建立了界差率（Q）指标，同现行的抗体合格率等免疫评价指标相比，通过本指标可以对家禽免疫水平和健康状态作出科学分析和评估，对适时掌握禽流感、新城疫免疫状态和免疫时机做好二者的免疫预防工作意义重大。