以LacZ为报告基因探讨促进基因表达及基因免疫应答物质的筛选

应用分子生物学技术构建了LacZ报告基因的pcDLacZ真核表达载体 ,并对多种促进基因表达的物质进行了筛选。应用筛选的促进基因表达物质对pcDST基因疫苗的免疫增强效果进行了观察。结果 :构建的LacZ报告基因的pcDLacZ真核表达载体 ,肌注后 1天就有表达 ,到第 7天达到高峰。通过对多种促进基因表达的物质进行筛选证明 ,4.5 %斯苯、1 %甘油、2 5 %蔗糖有明显促进基因的表达作用。 4.5 %斯苯、1 %甘油能促进pcDST猪瘟基因疫苗的免疫效果。表明 :4.5 %斯苯、1 %甘油可做为基因疫苗的免疫佐剂使用     

转变兽医卫生观念更好地为规模化畜禽养殖业服务

我国改革开放20多年来，畜牧业得到了空前的发展，畜牧生产值达到农业总产值的30％以上，畜禽产品的数量已经步入世界发达国家的先进行列。畜牧业正在或已经向规模化、集约化和现代化的方向发展。为畜牧业服务的兽医卫生行业也相应地得到了发展，取得了有目共睹的成就。《中华人民共和国动物防疫法》1998年1月1日起执行。从此我国兽医卫生已步人法制化轨道，为我国规模化畜禽养殖业的大发展提供了法律的保证。但也必须看到，有一部分人对兽医卫生的理论和实践尚存在观念上的认识差异，束缚了人们的思想，制约了兽医卫生行业的发展，因此只有转变观念，才能更好地为规模化畜禽养殖业服务。本仅就兽医卫生中几个观念性问题作一些粗浅探讨。     

二狼山白山羊遗传性甲状腺肿发病机理及诊断研究——Ⅱ.甲状腺组织中TG分布、TG带谱分析及血清TG含量检测

应用BA-免疫组化结合图像分析测定了遗传性甲状腺肿病山羊(以下简称IHO)甲状腺组织中甲状腺球蛋白(TG)的含量和分布,用梯度-PAGE结合免疫印迹法分析了甲状腺组织中异常TG相关抗原蛋白的带谱及分子量;用BA-ELISA法测定了血清中TG含量.结果表明:(1)IHG纯合子病山羊甲状腺组织中TG含量明显低于对照组山羊(P<0.01),且TG在胶质中多为弱阳性,在增生上皮细胞内几乎为阴性;(2)IHO纯合子病山羊甲状腺组织中异常TG相关抗原蛋白为331000、110000,而IHG杂合子病山羊异常TG相关抗原蛋白为110000;(3)IHG杂合子病山羊血清中TG含量明显低于对照组(P<0.05).提示:IHG病山羊甲状腺激素合成不足是由于TG合成障碍,且其具体发病环节可能是TG亚单位(110000、331000相关TG抗原蛋白)进一步聚合为1200000的TG过程缺陷的结果;异常TG相关抗原蛋白110000,可作为净化IHG杂合子病山羊的特异性生化指标,其血清中TG含量降低,亦可作为剔除IHG杂合子山羊的生化指标之一.     

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应子VceC功能的初步研究

为研究布鲁氏菌(Brucella)Ⅳ型分泌系统效应子VceC的功能,本研究从羊种布鲁氏菌16M株基因组中克隆vceC基因片段,插入pEGFP-N1中,构建真核表达重组pEGFP-vceC。经脂质体转染HPT-8细胞,荧光显微镜观察、western blot鉴定目的蛋白在HPT-8细胞中表达情况,检测细胞凋亡、NO释放量及LDH活力。Western blot检测显示VceC在细胞中表达,转染pEGFP-vceC后的细胞凋亡、细胞上清液中NO释放量及LDH活力比对照组显著增加(p<0.05)。本研究初步表明VceC蛋白具有细胞毒性作用,为进一步研究VceC的功能奠定了基础。     

少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶基因的克隆及生物信息学分析

为研究捕食线虫性真菌几丁质酶的功能,在国内首次对少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-801和AO-483基因进行扩增、克隆及测序,并对其编码蛋白信号肽、疏水性与亲水性、高级结构、功能域进行预测和分析。结果显示,2个不同蛋白均具有典型的几丁质酶催化区保守序列SXGGW和DGXDXDWE,属于糖苷水解酶18家族几丁质酶,无信号肽序列,表明这2个蛋白为非分泌型蛋白,二级结构以无规则卷曲、α-螺旋和β-折叠为蛋白的主要结构元件,三级结构中有(α/β)8的圆桶形结构。系统发育分析表明,几丁质酶AO-801和AO-483与昆虫病原真菌几丁质酶的亲缘关系更为接近,说明它们所产生的几丁质酶在侵染宿主的过程中发挥着类似的功能,并且不同来源真菌几丁质酶根据分子质量的差异形成3个不同的进化分枝。     

GFP-ESAT6融合蛋白表达载体的构建及表达纯化

根据GenBank中发表的结核杆菌H37RV的ESAT6基因序列设计1对引物,以热灭活的结核杆菌H37Rv菌悬液为模板,用PCR方法扩增得到EsAT6基因DNA片段.将扩增片段克隆于pGM-T载体中,成功构建克隆载体pGM-T-ESAT6.分别将pET28a-GFP质粒和pGM-T-ESAT6质粒用限制性内切酶EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切,并将纯化的ESAT6基因亚克隆至pET28a-GFP中,构建原核表达载体pET28a-GFP-ESAT6.将pET28a-GFP-ESAT6转化E.coli BL 21(DE3),经IPTG诱导、SDS-PAGE和Western-blot分析,可见相对分子质量约37 200的外源蛋白带,表明GFP-ESAT6融合基因在大肠杆菌中得到了表达.用Ni-NT、A Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的GFP-ESAT6融合蛋白.     

新疆塔城地区绵羊细粒棘球蚴流行株基因分型研究

为了探明新疆塔城地区绵羊细粒棘球蚴流行株基因型,根据GenBank公布的12S rRNA基因和CO1基因分别设计特异性引物,对58个绵羊细粒棘球蚴包囊进行PCR检测,再通过CO1特异性引物对检测阳性病料进行PCR扩增、测序及基因分型。通过12SrRNA基因检测发现58份样品均为阳性;对所测得的58条CO1基因序列分析,发现新疆塔城地区绵羊细粒棘球蚴流行株基因型均为G1型,且CO1基因序列存在多态性,为塔城地区绵羊细粒棘球蚴病的防控提供了科学依据。