展青霉素人工抗原的制备与鉴定

为探讨展青霉素（patulin,PAT）不同抗原合成方法对完全抗原制备及抗体产生的影响,本试验利用琥珀酸酐联合活泼酯法,分别制备免疫原PAT-BSA和包被原PAT-OVA。为提高PAT与偶联蛋白的结合率,尝试将BSA修饰为EDA-BSA后与PAT进行偶联,并对比2种偶联方法制备的完全抗原免疫动物后抗血清的效价水平。同时利用琼脂糖凝胶电泳、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、凝胶渗透色谱多种方法分析鉴定偶联结果,为PAT单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

镉、汞、铅污染及其微生物修复研究进展

随着人类活动的增强,重金属的应用越来越广,同时造成的环境污染问题愈发严重,特别是重金属镉、汞、铅。利用微生物技术修复环境污染中的重金属,以其成本低、效率高等特点,已经成为环境污染修复领域的研究热点。作者综述镉、汞、铅污染及其微生物修复的研究进展,并提出利用微生物细胞表面展示技术构建高效吸附重金属的基因工程菌,在微生物修复方面应用的重要价值。     

化学药物治疗寄生虫疾病的研究现状

近些年来,治疗和预防人畜寄生虫疾病的药物层出不穷,而且功效显著。例如上个世纪60年代,甲硝基羟乙唑(灭滴灵)和磺甲硝咪唑等5-硝基咪唑类药物已经被广泛使用在阿米巴病、贾第虫病和毛滴虫病的治疗方面：70年代,一类多烯抗生素如莫能菌素、拉沙里菌素、奈良菌素和盐霉素,也成为预防禽球虫病的重要药物：吡喹酮和除虫菌素、密比霉素、特别是伊维菌素等抗蠕虫药,已经显著地改进了血吸虫及其他吸虫传染病的治疗效果。     

猪圆环病毒2型Cap蛋白杆状病毒载体表达及免疫保护性分析

为了获得低成本高产量的抗原表达,开发新型、有效防控猪圆环病毒的亚单位疫苗,根据猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白序列,通过软件设计优化了密码子并合成cap基因,利用多角体病毒作为载体,构建了表达PCV2 Cap蛋白的重组病毒,命名为flashBAC-PCV2-ORF2株.经过鉴定,证明该病毒株表达Cap蛋白的抗原量在...     

兽医公共卫生发展趋势

1兽医公共卫生的政策要求2012年5月2日,国务院常务会议讨论通过了《国家中长期动物疫病防治规划(2012~2020年)》。规划指出,动物疫病防治工作关系国家食物安全和公共卫生安全。要坚持预防为主方针,按照政府主导、社会参与的原则,实施分病种、分     

灭菌乳中活阪崎肠杆菌PMA-PCR检测方法的建立

In order to detect viable Enterobacter sakazakii in pasteurized milk，a new method was established by combination of propidium monoazide （PMA） and polymerase chain reaction （PCR）.PMA concentration and exposure time were optimized to find optimal conditions for distinguishing between dead and viable E.sakazakii. The results showed that to kill the viable E.sakazakii must be exposed to 100 ℃ for 20 min in water bath. The optimum light exposure time to intercalate the DNA of dead E.sakazakii and to photolyze the free PMA in solution was 15 min. The minimum concentration of PMA to completely inhibit the PCR amplication of dead bacterium was 5 μg/mL. The maximum concentration of PMA did not inhibit the PCR amplification of viable bacterium was 15 μg/mL. After PMA treatment，viable E.sakazakii in a mixture containing different proportions of dead and viable bacterium could be selectively detected by PCR，and the determination limit was 40 CFU/mL. In the pasteurized milk，the determination limit was 100 CFU/mL. This study laid a foundation for use of PMA-PCR to detect the E.sakazakii in the food.     

金黄色葡萄球菌融合肠毒素的构建及高效表达

以食物中毒性金黄色葡萄球菌毒素为研究对象,利用PCR方法分别扩增出金黄色葡萄球菌肠毒素SEB1、SEB2、SED1、SED2、SEE基因片段。将克隆得到的5个毒素基因片段采用柔性的Linker序列(Gly4Ser)3进行串联(SEB1-SEB2-SED1-SED2-SEE),通过重叠延伸PCR法扩增出了融合毒素T,目的基因全长1 835 bp,测序结果同源性达99%。将融合基因克隆到pET-28a( )原核表达载体,转化大肠杆菌后成功表达了融合蛋白,蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的29.6%。     

肠炎沙门菌avrA蛋白的原核表达及其生物信息学分析

【目的】 表达具有生物学活性的肠炎沙门菌（Salmonella Enteritidis） avrA蛋白,并对其进行生物信息学分析,为研究肠炎沙门菌avrA蛋白对猪肠道细胞免疫功能的影响提供参考。【方法】 根据GenBank中肠炎沙门菌avrA蛋白全基因序列（基因ID：1254388）设计引物扩增avrA基因,回收的目的片段与表达载体pGEX-4T-1进行重组、克隆,用限制性内切酶和基因测序验证重组表达质粒的正确性。将验证后的重组表达质粒转化大肠杆菌Rosetta 2（DE3）感受态细胞,并在不同条件下对重组表达菌进行诱导表达。应用SDS-PAGE和Western blotting检测avrA蛋白的表达情况。将酶切测序后目的基因序列进行BLAST比对分析,并用ExPASy-Translate Tool软件预测avrA蛋白的氨基酸组成。应用生物信息学软件预测avrA蛋白的跨膜结构域、二级结构、三级结构及抗原性。【结果】 肠炎沙门菌avrA基因CDS序列全长为909 bp,编码302个氨基酸。限制性内切酶及基因测序分析结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-avrA构建成功。SDS-PAGE和Western-blotting结果表明,重组菌所表达的avrA蛋白为可溶性蛋白。重组菌在15 ℃诱导16 h表达的蛋白量为10 mg/L,蛋白溶解度为40%。生物信息学分析表明,avrA蛋白为膜外蛋白,该蛋白的16―301位氨基酸具有来自超家族YopJ丝氨酸/苏氨酸乙酰转移酶的保守结构域;avrA蛋白二级结构中无规则卷曲、α-螺旋、延伸链分别占43.71%、39.40%和16.89%;avrA蛋白三级结构预测结果与二级结构一致;avrA蛋白有9个与B细胞结合的抗原表位,分别在第5―40、51―68、80―92、94、101―109、146―157、160―168、199―231和236―298位氨基酸处。【结论】 试验成功克隆出肠炎沙门菌avrA基因,并成功构建重组表达质粒和表达菌,诱导表达的avrA蛋白为可溶性表达;avrA蛋白为膜外蛋白,有9个能与B细胞结合的抗原表位。本研究结果为进一步制备检测肠炎沙门菌感染的抗体提供参考。     

大田软海绵酸单克隆抗体ELISA检测方法的建立

利用BALB／c小鼠腹水大量制备抗大田软海绵酸（okadaic acid，OA）的单克隆抗体，并以此抗体为探针建立了0A的快速、灵敏、简便的ELISA检测方法——直接和间接竞争抑制性ELISA方法，2种检测方法的回归方程和相关系数分别为：y=-38．678χ＋130．01，R^2=0．9886和y=-34．212x＋83．49，R^2=0．9784，线性范围为1.56～75μg／L和0.4425μg／L，对OA的最低检出质量浓度为0．6μg／L和0．18μg／L。并利用所建立的2种ELISA方法对贝类模拟样品及实际样品进行了检测，样品回收率分别为84．72％和98．38％。结果表明，此方法可满足海产品中贝类样品0A限量标准检测。     

动物微生态制剂的研究进展

动物微生态制剂是指应用于动物体内及外界环境中正常的有益生物,经特殊处理和加工工艺制成的活菌制剂,又称益生素.它通过在饲料中添加无病源性、无毒副作用、无耐药性和无药物残留的一些微生物来促进肠道内有益微生物的生长,抑制有害微生物的生长繁殖,从而调整维持胃肠道内的微生态平衡,达到预防疾病和促进生长的目的.