不同酶解条件对普通红豆草子叶原生质体分离的影响

以普通红豆草子叶为材料,研究了预处理、酶液组合和渗透压浓度等因子对其原生质体分离效果的影响。结果表明,子叶在含有0．70mol／L甘露醇的CPW溶液中预处理60min,获得的原生质体产量、存活率均高于其他预处理;酶液组合为1．0％纤维素酶＋0．8％果胶酶＋0．5％离析酶,25℃黑暗条件下酶解6h可获得大量有较高活力的原生质体;酶解液中添加浓度为0．55mol／L的甘露醇较适合原生质体分离。     

猪瘟病毒四川分离株E2基因的分子克隆、原核表达及免疫学活性分析

分子克隆猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)四川分离株E2基因,并对其进行原核表达及免疫学活性分析。PK-15细胞培养增殖CSFV四川分离株提取总RNA,运用RT-PCR扩增E2基因,定向克隆构建原核重组表达载体,转化E.coli Rosetta-gami-TM(DE3)plysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达,Western blotting分析表达蛋白的免疫学活性。试验结果表明,成功克隆了E2基因,共1119 bp,包含有编码E2蛋白的完整序列,编码373个氨基酸;成功构建了CS-FVE2基因完整阅读框、主要抗原区原核表达载体pET-E2(pe)、pET-mE2(pe);蛋白质电泳结果显示,成功表达出约45.32、28.49 ku两目的蛋白,而且表达的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白均能被CSFV阳性血清所识别,具有良好的免疫学反应活性。因此,本试验成功获得CSFV四川分离株E2基因,表达出具有生物学活性的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白。     

我国农村信息化建设现状及对策建议

随着我国经济社会发展水平的日益提高,农村与城市差距越来越大,而加快推进农村信息化建设对于推动农村经济社会发展具有巨大的促进作用,有助于从根本上解决“三农”问题。农村信息化是社会主义新农村建设的重要内容。对我国农村信息化的现状做了总体分析,阐释了农村信息化面临的问题和困难,提出了加快推进农村信息化建设的措施。     

天津大神堂人工鱼礁区生态养护效果的初步评估

根据天津海域活牡蛎礁区人工鱼礁区2012年5月份的本底调查和2012年8月份、2013年5月份和8月份3个航次的渔业资源跟踪调查数据,采用生物多样性指数分析了投礁前后渔业资源种类组成和物种多样性的时空分布特征。海域游泳动物群落的健康状况指标(Exergy值)投礁后高于投礁前,但差异不明显(P0.05)。聚类分析表明,本底调查和跟踪调查样方分区明显,表明鱼礁投放后,鱼礁区群落结构明显改善。投礁后物种种类数和总生产效益的增加说明人工鱼礁建设取得了明显的生态效益和经济效益。     

PEDV流行株重组截短N蛋白间接ELISA检测方法的建立

为了建立猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)抗体检测的间接ELISA方法,本研究以纯化的原核表达的PEDV截短N蛋白作为包被抗原,建立了PEDV抗体检测的间接ELISA方法,将该方法命名为rnPED-ELISA。该抗原不与其他常见的7种猪病的阳性血清发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于13%;rnPED-ELISA相对于血清中和试验(SN)试验的敏感性为93.33%,特异性为90.00%;rnPED-ELISA与TSZ全病毒抗体检测试剂盒的符合率达91.67%。采用rnPED-ELISA方法检测200份临床样品,PEDV抗体阳性检出率为69.5%。本试验建立的rnPED-ELISA方法具有良好的敏感性和特异性,可为免疫猪群抗体监测和猪流行性腹泻流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法。     

密度和播期对甘蓝型油菜角果抗裂性的影响

为研究密度和播期对甘蓝型油菜角果抗裂能力的影响,以6个甘蓝型油菜品种为材料,设置30万、45万、60万hm^-2 3种密度和9月25日及10月1日2个播期,分析角果抗裂能力的影响因素。结果发现,密度对角果抗裂能力存在显著影响,这种影响主要因不同密度下品种植株性状和角果特性发生了变化;播期对油菜角果抗裂能力的影响不显著。     

山东莘县甜瓜细菌性软腐病病原研究

在山东省聊城市莘县采集的甜瓜病果上分离获得7个细菌菌株,接种甜瓜48 h果实发生明显腐烂,症状同田间发病果。经室内对菌体形态、染色反应、培养性状、生理生化特性以及致病性测定等项目鉴定,确认该病菌为胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜软腐致病亚种[Erwinia carotovora subsp.carotovora（Jones）Bergey et al.]。     

利用风洞实验研究~7Be示踪估算土壤风蚀速率的可行性

以黄土高原水蚀风蚀交错带沙黄土为研究对象,利用室内风洞模拟实验对7Be示踪估算土壤风蚀速率的可行性进行探讨。由于风蚀过程易带走土壤细颗粒,且7Be在土壤细颗粒中含量较高,所以利用7Be水蚀模型计算的土壤风蚀速率高于实测值。实验中发现样点风蚀后和风蚀前土壤颗粒比表面积之比与样点风蚀后7Be含量之间存在幂函数关系,基于此,提出颗粒校正系数(P)的计算式,并将P引入到7Be水蚀模型对其进行修正。计算分析发现,和实测值相比,利用修正模型计算的土壤风蚀速率误差均不超过5%,这说明经过修正的7Be水蚀模型能较准确地估算土壤风蚀速率,利用7Be示踪技术估算土壤风蚀速率是可行的。研究为进一步利用7Be示踪技术调查黄土高原水蚀风蚀交错带土壤风蚀问题奠定了基础。     

H3N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立

采用RT-PCR方法成功扩增了H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)四川分离株(A/Swine/Sichuan/01/2006)的NS1基因,将其克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET32-NS1.将该质粒转化进大肠杆菌RosettaTM,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE电泳表明融合的NS1蛋白得到了大量的表达,该融合蛋白的相对分子质量约为43 500.Western-blotting结果显示该蛋白能与阳性血清发生特异性反应具有很好的免疫反应原性.结果表明,所建立的ELISA方法与几种常见猪群传染病病原无交叉反应,具有较好的特异性、敏感性和重复性,可进一步优化应用于临床SIV的检测.     

GDF9对绵羊卵丘细胞增殖的影响

本试验旨在探究生长分化因子9（GDF9）对卵丘细胞扩展相关基因和激素受体基因表达量及激素分泌的影响,为GDF9在绵羊卵泡发育中的作用提供依据。以绵羊卵丘细胞为研究对象,通过在低血清细胞培养液中添加不同浓度（0、50、100、200、400 ng/mL）的GDF9,培养绵羊卵丘细胞48 h后,提取细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR技术,以β-actin为内参基因,检测卵丘细胞扩展相关基因透明质酸合酶2（HAS2）、前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）、穿透素3（PTX3）及激素受体相关基因卵泡刺激素受体（FSHR）、促黄体生成素受体（LHR）和雌激素受体（E₂R）的mRNA相对表达量;利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇（E₂）和孕酮（P₄）含量。结果显示：在细胞培养液中添加200 ng/mL GDF9时,HAS2、PTX3、FSHR、E₂R和LHR的mRNA相对表达量极显著高于对照组与其他处理组（P<0.01）;PTGS2 mRNA相对表达量极显著高于对照组、50和400 ng/mL GDF9组（P<0.01）,显著高于100 ng/mL GDF9组（P<0.05）。当添加400 ng/mL GDF9时,各基因mRNA相对表达量均极显著低于200 ng/mL GDF9组（P<0.01）;E₂分泌量极显著高于对照组与50 ng/mL GDF9组（P<0.01）,显著高于100 ng/mL GDF9组,与200 ng/mL GDF9组差异不显著（P>0.05）。100、200和400 ng/mL GDF9组P₄分泌量显著高于对照组（P<0.05）,与50 ng/mL GDF9组没有显著差异（P>0.05）,且3组之间差异不显著（P>0.05）。综上所述,GDF9能够促进绵羊卵丘细胞扩展,并参与绵羊卵丘细胞激素分泌的调控。