单宁酸对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力的影响

研究旨在探讨单宁酸对猪卵母细胞体外成熟质量及其胚胎发育能力的影响。在猪卵丘卵母细胞复合体（COCs）体外成熟培养液中添加不同浓度（0、1、10、100 μg/mL）单宁酸培养42 h后,检测COCs的扩散程度和卵丘细胞扩散指数,统计COCs的体外成熟率,检测成熟卵母细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）和生长分化因子9（growth differentiation factor 9,GDF9）的水平,并统计孤雌激活及体外受精胚胎48和168 h的卵裂率、囊胚率及囊胚总细胞数。结果显示,与对照组相比,10 μg/mL单宁酸组卵丘细胞扩散指数显著提高（P<0.05）,100 μg/mL单宁酸组显著降低（P<0.05）;1和10 μg/mL单宁酸组卵母细胞成熟率差异不显著（P>0.05）,100 μg/mL单宁酸组卵母细胞成熟率显著降低（P<0.05）;1和10 μg/mL单宁酸组GSH和GDF9水平显著提高（P<0.05）,ROS水平显著降低（P<0.05）。孤雌胚胎和体外受精胚胎发育能力结果显示,与对照组相比,各单宁酸组卵裂率差异不显著（P>0.05）,10 μg/mL单宁酸组孤雌胚胎囊胚率及体外受精胚胎囊胚率显著提高（P<0.05）,100 μg/mL单宁酸组孤雌胚胎囊胚细胞数及体外受精胚胎囊胚细胞数均显著低于其他各组（P<0.05）。以上结果表明,10 μg/mL单宁酸可通过提高卵丘细胞扩散能力及GSH和GDF9水平、降低卵母细胞内ROS水平,改善猪卵母细胞成熟质量,提高孤雌胚胎及体外受精胚胎的发育能力。     

白藜芦醇对体外培养的水牛卵丘细胞增殖活力及其相关基因mRNA表达的影响

[目的] 研究白藜芦醇（resveratrol,RES）对水牛卵丘细胞体外培养过程中细胞增殖活力、激素分泌、卵丘扩展及抗凋亡和抗氧化能力的影响。[方法] 用不同浓度（0（对照组）、1、10、20、30、40、50和60 μmol/L）RES培养卵丘细胞,用CCK-8试剂盒测定细胞增殖活力,筛选最佳RES处理浓度及时间用于后续试验。用ELISA法测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇（estradiol,E₂）和孕酮（progesterone,P₄）的含量,实时荧光定量PCR法测定卵丘细胞扩展、凋亡和抗氧化相关基因的相对表达量。[结果] 与对照组相比,在体外培养24~36 h内,1、10和20 μmol/L RES组水牛卵丘细胞的增殖活力均有升高趋势,10 μmol/L RES处理36 h细胞活力最强,因此用于后续试验中细胞的处理。体外培养36 h时,10 μmol/L RES组细胞增殖能力和E₂、P₄的分泌显著增加（P<0.05）;10 μmol/L RES组卵丘细胞扩展相关基因穿透素3（PTX3）、前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）、抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和超氧化物歧化酶1（SOD1）基因mRNA相对表达量显著或极显著增加（P<0.05;P<0.01）,而促凋亡基因Bcl-2相关蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和p21的表达量显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）,透明质酸合酶2（HAS2）和过氧化氢酶（CAT）的表达量无显著差异（P>0.05）。[结论] 培养液中添加10 μmol/L RES能够提高水牛卵丘细胞体外培养的增殖活力,促进卵丘细胞激素分泌和卵丘细胞扩展,并增强卵丘细胞抗氧化能力并减少细胞凋亡。     

雌激素调控奶牛乳腺上皮细胞凋亡及生长周期作用机制的研究

试验旨在研究雌激素对奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）凋亡及生长周期的影响。通过添加MAPK/ERK信号通路阻断剂探索雌激素调控BMECs凋亡及生长周期具体的作用机制,采用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化情况,实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Caspase3及CyclinD1基因mRNA的表达丰度。结果显示,对照组BMECs凋亡率极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA表达丰度显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）;对照组细胞比例在G1期显著高于BMECs+E₂组（P<0.05）,极显著低于BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,S期细胞比例极显著高于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,G2期细胞比例极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）;对照组CyclinD1 mRNA的表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）;BMECs+E₂+PD98059组的Bcl-2 mRNA的表达量极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA的表达量显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）。结果表明,MAPK/ERK信号通路参与BMECs的增殖及细胞生长周期调节的过程,且雌激素可通过MAPK/ERK信号通路抑制BMECs的凋亡,MAPK/ERK信号通路可能参与由雌激素调控的细胞生长周期的进程。     

白藜芦醇对绵羊卵母细胞体外受精的影响

本试验旨在研究不同浓度（0、0.5、2.0、5.0 μmol/L）白藜芦醇（resveratrol,RES）对绵羊卵母细胞体外受精（in vitro fertilization,IVF）、卵母细胞抗氧化能力及卵丘细胞分泌类固醇激素的影响。绵羊卵母细胞在含不同浓度RES的体外成熟（in vitro maturation,IVM）液中培养24 h以后进行体外受精,并收集IVM液,测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）的活性及脂质过氧化产物丙二醛（monochrome display adapter,MDA）的含量;用酶联免疫法测定雌二醇（estradiol,E₂）和孕酮（progesterone,P₄）的浓度。研究结果表明,与对照组相比,在IVM液中添加0.5 μmol/L RES显著提高卵裂率（P<0.05）,但对受精率和囊胚率没有显著影响（P>0.05）;5.0 μmol/L RES显著降低受精率、卵裂率和囊胚率（P<0.05）,对胚胎发育有抑制作用;在IVM和体外培养（in vitro culture,IVC）液中分别添加0.5 μmol/L RES均显著提高受精率、卵裂率和囊胚率（P<0.05）。与对照组相比,在IVM液中添加RES对卵丘细胞分泌E₂有一定的抑制作用,5.0 μmol/L RES显著降低E₂浓度（P<0.05）;0.5 μmol/L RES显著提高卵丘细胞P₄分泌量（P<0.05）。0.5和2.0 μmol/L RES增加SOD和GSH-Px等酶的活性,但与对照组相比无显著差异（P>0.05）,却显著降低MDA含量（P<0.05）;而5.0 μmol/L RES显著降低抗氧化酶活性并增加MDA含量（P<0.05）。综上所述,在IVM和IVC液中同时添加0.5 μmol/L RES,通过增强卵母细胞抗氧化能力和P₄的浓度,并降低MDA含量,从而提高胚胎卵裂率和囊胚率。     

前列腺素D2与F2α对绵羊黄体退化的影响及其机理研究

旨在研究前列腺素（prostaglandins,PGs）D₂与F_2α对绵羊黄体（corpus luteum,CL）组织形态、生殖激素及其关键基因与受体表达的影响,并解析其在黄体退化中的相互关系及机理,为保证母畜连续性繁育提供新的理论依据。将16只哈萨克绵羊随机分成4组,在发情周期的黄体期分别子宫肌内注射PGD₂、PGF_2α、PGD₂+PGF_2α及等量生理盐水（对照组）,采用HE染色结合物理拍照对比处理前后黄体组织形态变化,ELISA法检测外周血清中P₄、E₂、PGD₂和PGF_2α浓度变化;并利用qRT-PCR和Western blot检测关键合成酶基因HPGDS、PGFS及其受体DP1、CRTH2、FP的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,与对照组相比,发现PGD₂+PGF_2α组中黄体退化效果最明显,随后依次是PGF_2α组明显大于PGD₂组。ELISA结果显示,随着处理后时间的推移,不同试验处理组中,P₄浓度均呈显著下降趋势（P<0.05）,其中在PGD₂+PGF_2α组中该变化趋势最显著（P<0.05）;但E₂、PGD₂和PGF_2α浓度均呈现不同差异性变化,其中,PGD₂+PGF_2α组中PGD₂和PGF_2α浓度呈显著下降（P<0.05）,PGF_2α组中E₂浓度呈显著升高（P<0.05）、PGD₂浓度呈显著下降（P<0.05）,PGD₂组中E₂浓度呈显著下降趋势（P<0.05）、PGD₂浓度呈显著升高趋势（P<0.05）。qRT-PCR和Western blot结果显示,与对照组相比,PGD₂+PGF_2α组中HPGDS mRNA和蛋白表达量显著下调（P<0.05）,PGFS、CRTH2及FP mRNA和蛋白表达量显著上调（P<0.05）;PGF_2α组中HPGDS mRNA和蛋白表达量呈显著下调（P<0.05）,其它基因mRNA和蛋白表达量呈显著上调（P<0.05）;PGD₂组中HPGDS、DP1、PGFS及FP mRNA和蛋白表达量呈显著上调（P<0.05）。同时,在不同受体基因表达量检测时,发现PGD₂组中DP1受体表达量显著高于CRTH2受体（P<0.05）,而PGF_2α组中CRTH2表达量则显著高于DP1（P<0.05）。综上,PGD₂无论单独使用还是结合PGF_2α使用,均能够促进CL的退化,尤其是二者结合时有明显的协同促溶效应,其作用机制可能与其体内激素水平、关键合成酶及受体类型的表达有关,这为全面认识哺乳动物CL退化的调控机制奠定了基础,也为进一步优化高效繁殖技术（尤其是PGs方案）提供了新的思路。     

双氢睾酮通过调控孕酮、雌二醇和细胞凋亡参与绵羊子宫功能

旨在探究双氢睾酮（dihydrotestosterone,DHT）是否通过调节孕酮（progesterone,P₄）、雌二醇（oestrogen,E₂）和细胞凋亡参与影响绵羊子宫功能,以揭示其在绵羊生殖生理中的潜在作用。本试验以1.5岁左右的雌性小尾寒羊为试验动物,检测卵泡期、黄体期和妊娠期子宫中DHT合成酶和雄激素受体（androgen receptor,AR）的表达变化。随后,体外培养绵羊子宫内膜上皮细胞,并用DHT （10^-10~10^-7 mol·L^-1）和AR拮抗剂氟他胺（Flu,10^-8 mol·L^-1）处理（n=3）。通过酶联免疫吸附试验、细胞免疫荧光、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测P₄和E₂水平、合成酶和受体表达。此外,还检测经DHT和Flu处理后,绵羊子宫内膜上皮细胞中凋亡因子Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、B细胞淋巴瘤蛋白2（B cell lymphoma protein 2,Bcl-2）、半胱天冬酶3（caspase 3,CASP3）和活化半胱天冬酶3（active-caspase 3,Act-CASP3）的表达变化。结果表明,绵羊子宫不同时期DHT的合成和AR的表达存在差异,妊娠期子宫DHT合成及AR表达显著低于卵泡期和黄体期（P<0.05）。10^-10~10^-7 mol·L^-1DHT处理后,P₄合成酶表达显著上调（P<0.05）,在10^-8~10^-7 mol·L^-1 DHT时P₄合成显著增加（P<0.05）,在10^-10~10^-8 mol·L^-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著增加（P<0.05）,但10^-7mol·L^-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著下降（P<0.05）;在10^-8~10^-7 mol·L^-1 DHT时E₂相关合成酶显著减少,并且E₂水平显著下降（P<0.05）,在10^-9和10^-7 mol L^-1 DHT时E₂受体ERα蛋白显著下调（P<0.05）,在10^-10~10^-7 mol·L^-1 DHT时ERβ和GPER显著增加（P<0.05）。经Flu处理后部分解除DHT对P₄和E₂的调控。此外,10^-10~10^-7 mol·L^-1 DHT显著促进子宫内膜上皮细胞凋亡（P<0.05）。本研究证实DHT至少部分通过AR调节P₄和E₂合成及受体表达,影响细胞凋亡,参与调节子宫功能,这为进一步阐明雄激素参与调节子宫功能提供了新的基础和相关数据。     

AREG对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响

旨在研究双调蛋白（AREG）对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟（IVM）的影响。本研究从屠宰场绵羊卵巢上采集小腔和中腔卵泡的卵母细胞进行试验，利用自发荧光检测卵母细胞的NAD （P） H和FAD⁺⁺水平，利用JC-1检测卵母细胞的线粒体膜电位；两种来源的卵母细胞经体外成熟后，比较其卵丘扩展指数（CEI）、第一极体排出率（MII%）；比较AREG、AREG+GDF9、AREG+BMP15、AREG+GDF9+BMP15、GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%及卵母细胞线粒体膜电位的影响；检测了AREG+GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD （P） H和FAD⁺⁺水平及其受精后发育能力的影响。结果表明，成熟前，小腔卵泡卵母细胞的线粒体膜电位和FAD⁺⁺水平均显著低于中腔卵泡卵母细胞（P<0.05）；体外成熟培养后，小腔卵泡卵母细胞的CEI和MII%均显著低于中腔卵泡卵母细胞（P<0.05）。与对照组相比，AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%和线粒体膜电位（P<0.05），且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著（P>0.05）；另外，AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD （P） H和FAD⁺⁺水平（P<0.05），且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著（P>0.05）。与对照组相比，在成熟液中添加AREG+GDF9+BMP15可以明显提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的卵裂率和囊胚率（分别为（43.79±3.69）%、（28.54±4.31）%和（78.99±1.12）%、（47.46±2.50）%，P<0.05），而且与中腔卵泡卵母细胞组无显著差异（P>0.05）。综上表明，绵羊小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量较低， AREG在GDF9和BMP15的协同作用下可以显著提高小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量，并进一步提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的发育能力。     

烟碱对LPS诱导的兔子宫内膜上皮细胞炎症因子及前列腺素分泌的影响

试验旨在探索α7烟碱乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR）的高亲和力激动剂烟碱对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的兔子宫内膜上皮炎症的作用机制。分离发情后期兔的子宫内膜上皮细胞,用100 ng/mL LPS对细胞进行炎性刺激12 h。用CCK8法检测不同浓度烟碱（5、10和20 μg/mL）对细胞存活率的影响,筛选合适浓度的烟碱进行后续试验。将细胞分为对照组（CON）、LPS、LPS+烟碱、LPS+烟碱+甲基牛扁碱（MLA）（α7nAChR的特异性颉颃剂）组,通过ELISA法检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β（interleukin 1β,IL-1β）、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）、前列腺素E₂（prostaglandin E₂,PGE₂）和前列腺素F_2α（PGF_2α）的含量。试验成功分离兔子宫内膜上皮细胞,且传至第5代仍保持良好的生长状态。CCK8检测结果显示,20 μg/mL烟碱组细胞存活率显著降低（P<0.05）,10 μg/mL烟碱对细胞存活率无显著影响（P>0.05）,所以选择10 μg/mL烟碱进行后续试验。ELISA结果显示,与对照组相比,LPS组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE₂和PGF_2α的含量显著增加（P<0.05）;与LPS组相比,LPS+烟碱组显著降低IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE₂和PGF_2α的含量（P<0.05）,LPS+烟碱+MLA组炎性因子和前列腺素的含量差异不显著（P<0.05）。以上结果表明,烟碱对LPS诱导的兔子宫内膜上皮细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE₂和PGF_2α具有下调作用,推测烟碱通过α7nAChR介导炎性因子和前列腺素分泌下调而发挥抗炎作用,该结果可为研究α7nAChR作为子宫内膜炎治疗靶点的药物选择提供参考。     

FSH与GDF9对绵羊卵泡颗粒细胞中C型钠肽及其受体表达的影响

为了阐明绵羊卵泡颗粒细胞功能调控机制，试验选取不同条件培养的绵羊卵泡壁层颗粒细胞(MGCs)和卵丘颗粒细胞(CCs),分别设置对照组、FSH组和GDF9+FSH组，利用qPCR、Western blot和免疫荧光法分别检测MGCs和CCs中NPPC和NPR2的mRNA和蛋白表达量。结果表明：对于壁层颗粒细胞，FSH组NPPC 12 h mRNA及12,24 h蛋白水平显著高于对照组(P<0.05),极显著低于GDF9+FSH组(P<0.01);体外培养16 h后，与对照组相比，FSH组NPR2 mRNA及蛋白表达水平显著提高(P<0.05),但与GDF9+FSH组差异不显著(P>0.05)。对于卵丘颗粒细胞，FSH组NPPC mRNA及蛋白水平极显著高于对照组和GDF9+FSH组(P<0.01);FSH组NPR2 mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组和GDF9+FSH组(P<0.05)。说明FSH可以显著提高体外培养的绵羊卵泡颗粒细胞中NPPC、NPR2的表达；GDF9可以促进FSH诱导的壁层颗粒细胞中NPPC的表达，但抑制了FSH诱导的卵丘细胞颗粒...     

Effect of GDF9 on Sheep Cumulus Cell Proliferation

The purpose of this study was to investigate the effect of growth differentiation factor 9 (GDF9) on the gene expression of cumulus cells expansion and hormone receptors as well as hormone secretion,in order to provide evidence for the role of GDF9 in the development of sheep cumulus cells.Sheep cumulus cells were used as the research object in this study,and were cultured for 48 h by adding different concentrations (0,50,100,200,400 ng/mL) GDF9 to low serum cell culture medium.Total RNA were extracted from the cells,using β-actin as the reference gene,Real-time quantitative PCR technology were used to detect the cumulus cells expansion related genes hyaluronic acid synthase gene 2 (HAS2),prostaglandin lead oxide synthase 2 (PTGS2),pentraxin 3 (PTX3) and hormone receptor genes follicle-stimulating hormone receptor (FSHR),luteinizing hormone receptor (LHR) and estrogen receptors (E₂R).Using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method to test the content of E₂ and P₄.The results showed that HAS2,PTX3,FSHR,E₂R and LHR mRNA relative expression of 200 ng/mL GDF9 group was extremely significantly higher than the control group and other GDF9 groups (P<0.01),PTGS2 mRNA relative expression was extremely significantly higher than the control group and 50,400 ng/mL GDF9 groups (P<0.01),and significantly higher than 100 ng/mL GDF9 group (P<0.05).When added 400 ng/mL GDF9,the relative mRNA expression of all the mentioned-above genes were all extremely significantly lower than that of the 200 ng/mL GDF9 group.Moreover,the E₂ secretion level was extremely significantly higher than that of the control group and 50 ng/mL GDF9 group (P<0.01),significantly higher than that of the 100 ng/mL GDF9 group(P<0.05),while had no significant difference from the 200 ng/mL GDF9 group (P>0.05).When added 100,200 and 400 ng/mL GDF9,the concentration of P₄ was significantly higher than the control group (P<0.05),and there was no significant difference from the 50 ng/mL group (P>0.05),and there was no significant difference between 100,200 and 400 ng/mL GDF9 groups (P>0.05).To sum up,GDF9 could promote the expansion of sheep cumulus cells and participated in the regulation of hormone secretion of sheep cumulus cells.     

Effects of Resveratrol on in vitro Fertilization of Sheep Oocytes

The purpose of this study was to investigate the effects of resveratrol (RES) at different concentrations (0,0.5,2.0,5.0 μmol/L) on in vitro fertilization (IVF) and antioxidant capacity of ovine oocytes and the secretion of steroid hormones by cumulus cells.Sheep oocytes were fertilized in vitro after maturated in different concentrations of RES for 24 h,and the in vitro maturation (IVM) medium was collected for detecting the enzyme activity of superoxide dismutase (SOD),glutathione peroxidase (GSH-Px) and the content of monochrome display adapter (MDA).The ELISA method was used to detect the concentration of estradiol (E₂) and progesterone (P₄).The results showed that when compared to the control group,adding 0.5 μmol/L RES to the IVM medium significantly increased the cleavage rate (P<0.05),but had no significant effect on the fertilization rate and blastocyst rate (P>0.05);5.0 μmol/L RES significantly reduced the fertilization rate,cleavage rate and blastocyst rate (P<0.05),which had an inhibitory effect on embryonic development.Adding 0.5 μmol/L RES to IVM and IVC (in vitro culture,IVC) medium significantly increased the fertilization rate,cleavage rate and blastocyst rate (P<0.05).Compared to the control group,the addition of RES to IVM solution had a certain inhibitory effect on the secretion of E₂ by cumulus cells,5.0 μmol/L RES significantly reduced E₂ concentration (P<0.05);0.5 μmol/L RES significantly increased the P₄ secretion of cumulus cells (P<0.05).0.5 and 2.0 μmol/L RES increased the activity of SOD,GSH-Px and other enzymes,but there was no significant difference when compared with the control group (P>0.05),but significantly reduced MDA content (P<0.05),while 5.0 μmol/L RES significantly reduced the activity of antioxidant enzymes and increased the content of MDA (P>0.05).In conclusion,0.5 μmol/L RES simultaneously added to IVM and IVC medium could enhance the antioxidant capacity of oocytes and concentration of P₄,and reduced the content of MDA,thus improved the cleavage rate and blastocyst rate.     

CYP19A1调控内源性雌激素合成促进牦牛COCs细胞自噬和早期发育能力

旨在探索牦牛卵母细胞成熟过程中细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450arom,CYP19A1)对内源性雌激素(17β-estradiol,E₂)分泌、卵母细胞自噬和后续胚胎发育能力的影响。本研究在牦牛卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)体外成熟过程中，分别用等体积生理盐水、最佳浓度E₂(10^-7 mol·L^-1)、CYP19A1诱导剂黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)、CYP19A1抑制剂双酚A (bisphenol A,BPA)处理，实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,qRT-PCR)、Western blot和免疫荧光技术检测各组成熟COCs中CYP19A1表达水平，酶联免疫吸附方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测诱导和抑制CYP19A1处理组牦牛成熟COCs培养液中E₂水平；分析不同处理组COCs细胞自噬调控关键因子:自噬相关基因5(autophagy related gene 5,ATG5)、微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein light chain 3,LC3)和Bcl-2同源结构域蛋白(Bcl-2 homologous domain protein,BECLIN1)表达，比较不同处理组卵母细胞成熟率、孤雌激活胚胎卵裂率、以卵裂胚胎数为基数的囊胚率。结果显示，AFB1处理组COCs中CYP19A1的表达水平上调，内源性E₂分泌增加，自噬相关因子ATG5、BECLIN1和LC3表达水平增加，且与对照组差异均显著(P<0.05)；E₂处理组CYP19A1水平显著降低，但COCs细胞自噬相关因子表达水平显著升高(P<0.05)；BPA处理组CYP19A1的表达显著下调，内源性E₂和COCs细胞自噬相关因子均显著降低(P<0.05)；与对照组相比，卵母细胞成熟率与胚胎卵裂率在E₂和AFB1处理组显著增加(P<0.05)，而在BPA处理组显著降低(P<0.05)，以卵裂胚胎数为基数的囊胚率在各组间差异不显著(P>0.05)。研究表明，牦牛COCs成熟过程中CYP19A1上调内源性E₂水平，其上调的E₂与外源性E₂生理功能具有相似性，均可诱导细胞自噬发生，提升早期卵母细胞发育能力，结果为深入探索生殖激素调控哺乳动物卵母细胞成熟的分子机制提供了理论依据。     

褪黑素对荷斯坦奶牛妊娠率及生殖激素的影响

试验旨在探明皮下注射褪黑素（MT）对荷斯坦奶牛配种妊娠率及血清生殖激素的影响。用计步器法确定自然发情的首次配种荷斯坦奶牛150头，对其中70头进行颈部皮下肌内注射褪黑素30 mg，12 h后进行人工输精；选择170头产后首次配种的荷斯坦奶牛进行同期排卵-定时输精处理，其中90头荷斯坦奶牛最后一次注射促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone，GnRH）的同时进行颈部皮下肌内注射褪黑素30 mg，16 h后进行人工输精。在进行二次配种的荷斯坦奶牛中选择153只进行皮下注射褪黑素。荷斯坦奶牛输精后20~35 d进行妊娠检查，详细记录首次配种妊娠母牛头数、二次配种妊娠母牛头数、产犊数。选取同期排卵-定时输精的荷斯坦奶牛25头，皮下注射褪黑素8 h后用放射免疫法检测其血清中褪黑素、促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、雌二醇（E₂）的含量及35 d妊检时妊娠母牛血清中孕酮（P₄）含量。结果显示，与自然发情和同期排卵对照组相比，其对应的皮下注射褪黑素组荷斯坦奶牛的妊娠率及产犊率均显著提高（P<0.05）；皮下注射褪黑素组的双犊率显著提高（P<0.05），首次配种妊娠率和产犊率均显著提高（P<0.05），二次配种妊娠率和产犊率均差异不显著（P>0.05）。血清激素检测结果表明，与对照组相比，皮下注射褪黑素组血清中褪黑素、LH、E₂含量均显著增加（P<0.05）；35 d妊检时，皮下注射褪黑素的妊娠母牛P₄含量显著增加（P<0.05）。本试验结果表明，皮下注射褪黑素能够提高荷斯坦奶牛的妊娠率、产犊率及血清中LH、E₂和P₄含量，说明皮下注射褪黑素能够促进卵母细胞成熟和排卵，并提高配种妊娠率。