含CpG序列PRRSV ORF5基因真核表达质粒在小鼠的细胞免疫应答

为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5.经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSV GP5蛋白.免疫SPF小鼠,检测鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平.结果表明本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的细胞免疫.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立

研究针对美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守的N蛋白基因设计了4条LAMP的检测引物,通过优化反应条件,建立了一种检测PRRSV的LAMP诊断方法.特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测美洲型PRRSV,其最低检测限为1×101个拷贝,而常规PCR的最低检出限为1×105个拷贝.判定检测结果时不需要...     

猪生长激素基因(cDNA)的分子克隆

采用 Watson 方法由猪垂体总 mRNA 反转录合成了总 cDNA,合成产率约为12.6%。将总 cDNA 克隆到质粒 pUC19中后,转化大肠杆菌 JM107得到约2500个重组子克隆。用猪生长激素探针进行菌落原位杂交筛选得到2个阳性克隆。对这两个克隆进行多种酶切分析的结果表明,其中质粒 pWH101插入片段长度为830bp 左右,带有全长猪生长激素基因及部分5′端和3′端非编码区。用 Sanger 法分析了此基因5′端203个 bp 的序列,结果除确证己克隆了猪生长激素基因(cDNA)外,还查明了此基因5′端非编码区46bp 的序列。     

水田搅浆整地全程机械化探讨

<正>水田搅浆整地是一种复式的生产方式,可一次性完成"平地、碎土、灭茬、搅浆"等作业。随着农业机械化的大力推广与应用,水田搅浆整地全程机械化作业实施结束了以往水整地、半机械化整地的生产方式,大大缩短了整地作业时间,将高留茬以及机收留下的稻草切碎旋压泥浆下,实现秸杆根茬还田,培肥地力,促进水稻生产,达到了保护耕地和,节本增产增效的目的,同时也为水田机械化插秧提供了有力保障。09年以来,二九一农场在管局补贴政策的基础上加大     

杀鲑气单胞菌灭活疫苗的制备及其在大菱鲆体内的免疫效果

为了预防大菱鲆疥疮病,本研究将杀鲑气单胞菌菌株HHSM1905经甲醛灭活制备成灭活疫苗,通过腹腔注射途径免疫健康大菱鲆;对免疫后大菱鲆血清抗体效价、血清溶菌酶(LZM)活性、酸性磷酸酶(ACP)活性及疫苗保护率进行测定;以β-actin为内参,对免疫相关基因(IL-1β、TLR-5、MHCⅠ、MHCⅡ-α、CD4)表达情况进行定量PCR分析。结果显示,在免疫后2周时,疫苗组血清抗体效价显著高于对照组并达到最大值;疫苗组LZM活性在免疫2周时达到峰值,4周时仍与对照组保持显著差异;疫苗组ACP活性在免疫后的2周达到峰值,与对照组差异显著;灭活疫苗相对保护率(RPS)为72.72%。免疫组与对照组相比,IL-1β、TLR-5、MHCⅠ、MHCⅡ-α、CD4的表达量均呈上调趋势,与对照组差异显著。本研究成功制备了大菱鲆用杀鲑气单胞菌灭活疫苗,其对大菱鲆疥疮病能够起到一定的预防作用,可为大菱鲆养殖过程中疾病预防提供新方法。     

副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术的建立与应用

根据GenBank中的副猪嗜血杆菌(HPS)的infB基因的序列(DQ781808.1),利用分子生物学软件Premier 5.0设计一对特异性引物,建立基于SYBR Green I 荧光定量PCR检测HPS的技术.试验采用煮沸法从HPS培养物中提取DNA,进行PCR扩增.将鉴定正确的目的基因片段克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为阳性标准品.结果表明,该方法对HPS具有良好的特异性,不与其它猪源细菌发生交叉反应,其敏感性比常规PCR高100倍,而且非常稳定,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%.临床应用表明本方法的建立实现了对HPS的快速诊断和定量的检测.     

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的建立

猪圆环病毒2型(PCV2)为圆环病毒科,圆环病毒属成员,是一种单股负链环状的DNA病毒,无囊膜,病毒粒子直径为17 nm.临床上对于该病毒相关疾病的诊断主要根据其临床症状,但由于猪圆环病毒同猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒等引起的疾病临床症状相似,临床症状和病理变化只能作为初步诊断的依据,难以确诊.     

夏季农机具除锈方法

夏季雨水多,农机具的保养着重在除锈,锈如不除去就会影响农机具使用寿命。造成农机具锈蚀的原因主要有两个：一是积存在金属孔洞中的湿气,由于农机终日在地里作业,难免遇到各种路况,如雨天路湿、路面泥泞,如果不及时进行清洗或清洗不净,以至于空隙处积存污泥,导致农机具生锈。二是农机具底部和外部的油漆和保护层剥落,如果不能及时发现并修补,便容易导致农机具生锈。下面介绍几种常用的农机除锈方法。     

1804拖拉机液压故障二例

2010年10月14日,一台1804拖拉机在秋翻地作业中发生一起液压故障,具体故障现象为：大犁升起后不能降落。     

磷酸氢二铵/尿素复配体系对造纸法再造烟叶热解行为及羰基化合物的影响

为深入了解磷酸氢二铵(DAP)/尿素(UR)这种常用再造烟叶复配添加剂的作用机制,从热降解的角度研究了DAP/UR改性造纸法再造烟叶(DURTS)和未添加DAP/UR的造纸法再造烟叶(RTS)在热降解过程及热解生成羰基化合物上的差异。结果表明：（1）与RTS相比,DURTS降低了第2(142~275℃)和第5阶段(539~710℃)的热降解;同时也使得第4热降解阶段(372~539℃)的最大热降解速率由8.9 %/min下降至6.9 %/min,对应的峰值温度(T_p4)也升高了11.2℃。（2）DAP/UR使热释放的终止温度显著升高（由532℃上升至564℃）,提升了再造烟叶在高温区的热稳定性。（3）DAP/UR复配体系对羰基化合物的生成均有明显的抑制作用,羰基化合物的生成总量降低了21.6%。（4）DAP/UR复配体系在改善RTS余味、刺激性、香气质、浓度和杂气方面作用明显。