威海市种禽场主要疫病监测情况的分析

为了掌握威海市种禽场主要疫病免疫抗体水平及病毒感染情况,2015-2017年对威海市全部25个种禽场分别进行了新城疫、禽白血病、鸡白痢疫病监测,监测结果显示全市新城疫免疫抗体水平均在90%以上,整体免疫效果良好,暴露风险较低;新城疫病原阳性率0.28%,禽白血病阳性率1.02%,鸡白痢感染抗体阳性率为0.52%。群体健康状况良好,禽白血病和鸡白痢接近国家净化标准。     

仔猪多发性关节炎病原菌的分离鉴定及耐药性研究

从山东地区32个猪场发生多发性关节炎的仔猪体内分离到15株病原菌。通过对分离菌株的形态染色、分离培养、生化试验及种特异性基因的PCR扩增等方法鉴定菌株,结果显示4株分离菌株为副猪嗜血杆菌,7株为猪链球菌,2株为化脓隐秘杆菌,1株为猪胸膜肺炎放线杆菌,1株为猪丹毒杆菌。15株分离菌均对昆明小鼠有较强的致病力,且对先锋霉素类抗生素高度敏感,大多数菌株还对青霉素类、头孢菌素Ⅲ类、氟喹诺酮类、万古霉素、壮观霉素等抗生素高度敏感。该试验表明山东地区猪场仔猪多发性关节炎的病原菌主要是副猪嗜血杆菌和猪链球菌,可交替使用上述敏感抗生素防治该病。     

生物发酵法处理病死猪后肺炎克雷伯菌效果的监测

本试验利用细菌分离、培养、生化鉴定方法对临沂沂水县某猪场的病死猪生物发酵无害化处理堆的肺炎克雷伯菌进行了追踪监测,结果表明,在21d的追踪监测后,2组试验中的肺炎克雷伯菌均已在7d后被杀灭,之后直至第21d均未再检测到肺炎克雷伯菌。表明临沂沂水县某猪场采取的生物发酵法无害化处理病死猪对肺炎克雷伯菌的杀灭效果显著。     

生物发酵法处理病死鸡微生物含量变化的追踪监测

本试验旨在研究利用生物发酵技术对病死鸡进行无害化处理后对发酵堆中微生物含量变化的影响。利用细菌学计数和荧光RT-PCR/RT-PCR检测方法对烟台莱山区某鸡场的病死鸡生物发酵无害化处理技术进行了效果追踪监测和评估。结果在28d的追踪监测后，发现3组试验中病毒均已被杀灭，细菌含量（CFU/g）在发酵21d后达到最低值，分别由A组的5.34×1008下降为3.66×1006、B组的4.26×1010下降为2.44×1006、C组的3.57×1011下降为2.48×1006。结果表明，烟台莱山区某种鸡场采取的生物发酵法无害化处理病死鸡的对微生物含量影响明显，杀灭效果显著。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒SX-1株N蛋白单克隆抗体的制备

用纯化的重组HIS标签N蛋白免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSVN蛋白的单克隆抗体（McAb）,经细胞融合获得5株可分泌特异性McAb的抗PRRSVN蛋白的杂交瘤细胞1A12,3F11,5A3,5F9,4E4。其中1A12,3F11,5A3,4E4杂交瘤上清与HIS-蛋白与GST—N蛋白两种抗原包被的ELIA反应均为阳性。5F9与HIS—N蛋白包被的ELISA反应为阳性,而与GST—N蛋白包被的ELISA反应呈阴性。单抗1A12,3F11,4E4,5A3与HIS-N与GST—N蛋白的Western blotting反应均为阳性,而5F9只与HIS-N反应。IFA检测显示1A12,3F11,5A3,4E4株单抗都有明显的荧光,说明其与PRRSV呈阳性反应。同时,ELISA检测又有很好的特异性。     

2017年山东省威海市牛羊布鲁氏菌病基线调查

[目的] 掌握山东省威海市牛羊布鲁氏菌病的基线,分析人畜间布鲁氏菌病感染情况,查找布鲁氏菌病的传播风险因素,为该地区布鲁氏菌病防控决策提供数据支撑。[方法] 采用两级采样策略,选择牛羊群和选定群体中的个体,采集血清进行布鲁氏菌病检测。同时,通过问卷调查、档案查阅等方式,分析人畜布鲁氏菌病感染和传播的风险因素。[结果] 在牛群中未检出布鲁氏菌病阳性;羊群布鲁氏菌病表观群体流行率为0.48%（95%CI：0.10%~0.86%）,个体表观流行率为0.41%（95%CI：0.33%~0.49%）。[结论] 威海市家畜布鲁氏菌病净化效果较好,疫情处于稳定控制状态;羊饲养户跨地区调入活羊时不申报落地检疫,未隔离就混群饲养,是导致布鲁氏菌病传入的主要风险因素;多途径接触发病动物、产品及污染物是人感染布鲁氏菌病的主要原因。需持续通过定期监测、禁止免疫、控制流通、强化监督等综合防控策略来净化和根除该病;应继续加强有关布鲁氏菌病的宣传教育,提高养殖户、牛羊屠宰加工人员等风险人群的风险防患和自我保护意识,降低布鲁氏菌病传入以及感染人的风险。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立

研究针对美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守的N蛋白基因设计了4条LAMP的检测引物,通过优化反应条件,建立了一种检测PRRSV的LAMP诊断方法.特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测美洲型PRRSV,其最低检测限为1×101个拷贝,而常规PCR的最低检出限为1×105个拷贝.判定检测结果时不需要...     

水貂中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌三重荧光PCR方法的建立

依据Gen Bank中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的部分已知序列,选取大肠杆菌的uid A基因、肺炎克雷伯氏菌的khe基因和不动杆菌的sec E基因,利用Primer Premier 5设计引物,选出扩增序列的3对引物及相应的Taqman探针,uidA、khe、secE探针5'端分别标记FAM、HEX、CY5荧光发射基因,3'端标记BHQ1淬灭荧光基因。通过优化反应条件,建立一种同时检测大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的诊断方法。特异性和敏感性试验显示,该方法能特异地检测大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌,其最低检测限分别为2×10~(-1) CFU/μL、9.2×10~(-1) CFU/μL和4.3×10~(-1) CFU/μL。整个检测扩增在2小时内完成。该结果表明本试验所建立的三重荧光定量PCR方法的灵敏度、重复性及特异性均较好,可用于同时快速检测三种病原菌。     

犬瘟热与犬副流感病毒双重一步法RT-PCR检测方法的建立

为建立可以同时检测犬瘟热病毒(CDV)和犬副流感病毒(CPIV)的检测方法,依据GenBank中登录的CDV的H基因和CPIV的NP基因保守序列,设计合成扩增序列分别为593 bp (CDV H基因)、1 530 bp (CPIV NP基因)的2对引物,通过优化反应条件,建立一种能够同时检测CDV和CPIV的双重一步法RT-PCR检测方法。特异性和敏感性试验显示,该方法能特异地检测CDV和CPIV,其最低检测限分别为3.58×10~6拷贝/μL和1.74×10~6拷贝/μL。对51份临床疑似病料样品进行检测,同时分别采用商品化的CDV和CPIV抗原检测试剂盒进行检测,结果二者符合率为100%。该结果表明本实验所建立的双重一步法RT-PCR方法的灵敏度及特异性均较好,可用于临床相关疫病的诊断。     

生物发酵法处理病死猪后堆体温度及微生物含量的跟踪监测

[目的]研究利用生物发酵技术对病死猪进行无害化处理后发酵堆体的温度及其微生物含量的变化情况。[方法]本试验利用温度探头分层埋堆全程记录、细菌学计数和荧光RT-PCR/RT-PCR检测等方法对临沂市沂水县某猪场的病死猪生物发酵无害化处理技术效果进行跟踪监测和评估。[结果]经21天监测发现,发酵温度最高达70℃;试验病毒均已被杀灭;细菌含量（CFU）也分别由A组的1.33×108下降至1.37×103、B组的3.26×107下降至1.62×103。[结论]研究结果表明,此场生物发酵堆体上、中、下三层中层的温度最高,最高温度出现在第3天~9天之间,达到70℃左右,堆体发酵温度受环境温度的影响较大;发酵法对病毒和细菌的杀灭效果显著。