抢救新疆黑蜂纪行（三）——进阿尔泰山寻觅黑蜂

(接上期)抢救新疆黑蜂的前期工作安排就绪之后,我们就将赴新疆寻找黑蜂的方案,用电话报给农业部畜牧兽医总站品种资源管理处,徐处长马上安排杨红杰副处长给新疆畜牧厅打电话,安排落实我们赴新疆的工作。2002年9月8日从吉林出发,9月9日19:00我们一行二人从北京登上了飞往乌鲁木齐的XO9106次班机,开始了新疆之行的旅途。22:10到达乌鲁木齐机场,按预定计划乘车来到汇源酒店,自治区畜牧厅畜牧处处长田烽和副处级调研员巩巴正在等候我们。当时,田处长就把根据农业部畜牧兽医总站的电话通知所做的安排告诉我们,9月10日畜牧厅将派一辆尼桑越野吉普…     

细菌CpG DNA对鸡球虫弱毒苗Immucox的免疫增强效应

采用细菌CpG DNA作鸡球虫弱毒苗Immucox佐剂以探索其应用的可行性。将制备的细菌CpG DNA和球虫疫苗Immuncox单独或联合免疫接种肉鸡,第2次免疫后7d进行攻虫,口服接种柔嫩艾美儿球虫孢子化卵囊105个/只。感染后第7天,对试验动物进行称重并屠杀,分别观察盲肠病变积分、每克粪便卵囊排出数和体增重情况。结果:在相对增重方面,细菌CpG DNA+疫苗组高于感染非免疫组、疫苗组和CpG组,且与它们均差异显著(P<0.05);在卵囊排出总数和盲肠病变平均记分方面,细菌CpG DNA+疫苗组低于感染非免疫组、疫苗组和CpG组,且与之比较差异显著(P<0.05);在抗球虫综合指数方面,疫苗+细菌CpGDNA组达到172。结果表明用细菌CpG作鸡球虫弱毒苗Immucox的佐剂可提高该疫苗免疫保护效果。     

规模化猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查

脑心肌炎病毒(EMCV)可引起猪的脑炎、心肌炎和母猪繁殖障碍,该病已在世界上多个国家暴发和流行。我国对EMCV及其所致疾病的研究工作还处于起步阶段,为了揭示EMCV在我国规模化猪场的感染情况,我们应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对2005-2006年间采集自全国13个省市46个规模化猪场的3250份血清样本进行了EMCV抗体检测,结果显示,各省阳性率在39.64%~90%之间,平均抗体阳性率为72%,监测的46个猪场都存在EMCV感染,猪场感染阳性率为100%;对不同生长阶段猪群检测结果表明,EMCV抗体阳性率随猪龄的增长而升高,且不同生长阶段猪抗体阳性率差异极显著;成年公猪的抗体阳性率高于成年母猪。本项调查表明,我国规模化猪场已经普遍感染EMCV,这应引起我国养猪业警惕,并做好该病的综合防控。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型基因重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的构建

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7和猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR/PCR扩增,分别扩增出大小为308 bp和417 bp的部分基因片段。用T4连接酶将目的片段与pGEM-Teasy载体系统连接,并转化到大肠杆菌DH-5α株感受态细胞。提取的质粒经PCR、酶切和测序鉴定,证实为PRRSV和PCV2的阳性重组质粒。将重组标准质粒10倍系列稀释后作为模板,通过实时荧光定量PCR方法(Real-time PCR),建立了PRRSV、PCV2的标准曲线及其直线回归方程,并确定其最佳读板温度。该方法具有线性关系好、特异性强、敏感性高、重复性好等特点,为分析PRRSV和PCV2共感染猪体内病毒的绝对含量提供了必要的技术平台。     

猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定

从规模化猪场疑似病例组织病料中分离到5株脑心肌炎病毒（EMCV），对其中的2株（EMCV BJC3和EMCV HB1）进行了系统鉴定。结果表明，病毒粒子大小约为27nm，呈圆形；2株病毒均不耐酸，对氯仿不敏感，对胰蛋白酶敏感性有所不同，60℃加热1h可被灭活，二价阳离子对病毒没有明显的保护作用。用EMCV多克隆抗体作间接免疫荧光，分离毒株感染的BHK-21细胞的胞浆中可见特异性荧光。对分离毒株进行了VP1和3D基因的扩增和序列测定，结果表明，2个毒株VP1基因的核苷酸序列同源性为99．49％，氨基酸序列的同源性为98．46％，与GenBank中EMCV毒株的核苷酸序列同源性介于81．61％～99．59％，氨基酸序列同源性在95．5％以上；3D基因扩增片段序列与其它毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100％。基于VP1基因的系统进化树表明，2株分离毒均位于进化树的主干上，变异度不大。由此表明，EMCV感染已在我国猪场存在。     

地下长廊蜜蜂越冬技术的研究

依据蜜蜂室内外越冬原理和蜜蜂生物学特性,按养蜂生产的需要,研究设计了一种蜜蜂越冬的地下长廊,两侧放置1～3层蜂箱,中间为通道,上部封闭,留有进出气孔调节温度,人可以进入长廊管理越冬蜂群.挖建长廊的成本低,越冬期温度稳定,越冬蜂群势削弱率降低20.1%～24.3%,饲料消耗量降低10.5%～16.2%.     

鸡胚原始生殖细胞定向诱导分化成骨细胞的研究

探讨体外培养的鸡胚胎原始生殖细胞(EPGCs)的多向分化潜能。分别从发育至19期和28期的鸡胚胎性腺中获取EPGCs,体外培养传代。通过地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C诱导EPGCs向成骨细胞分化,分别进行碱性磷酸酶改良钙钴法染色鉴定、钙结节Von Kossa's染色鉴定和免疫组化鉴定。结果表明:EPGCs被诱导21 d后,定向分化成成骨细胞,诱导率达到80%,碱性磷酸酶改良钙钴法染色、钙结节Von Kossa's染色和免疫组化鉴定均呈阳性,阳性率为75%-85%。由此可得出在诱导条件下,EPGCs体外可定向诱导分化为成骨细胞。     

丹棱脐橙留树保鲜技术

四川省丹棱县地处川西平原西南端，平均海拔480m，年均气温17℃，常年最低气温1℃～-2℃，近35年最低气温-4℃，年均总积温6100℃，年均降雨量1250．3mm，年均日照时数1140．3h，属亚热带湿润季风气候，为柑桔适宜种植区。全县现有柑桔面积近6000hm^2，其中脐橙面积近4670hm^2，年产脐橙鲜果近6万t。品种以罗伯逊脐橙和眉山9号脐橙为主，集中在每年11下旬～12月上旬成熟上市。由于近年水果产品相对过剩，造成了丹棱脐橙鲜果销售压力大，价格偏低，效益下降的局面。为了延长丹棱脐橙鲜果的供应期，提高丹棱脐橙的种植效益，该县多经站大力示范推广“脐橙留树保鲜技术”，效益提高一倍以上，每667m^2增收3000-4000元。经过5a多的试验示范，已累计推广脐橙留树保鲜面积1667hm^2以上，果农增收7500万元以上。现将该县脐橙留树保鲜技术介绍如下：     

河北太行山区土地资源生态安全研究

本文在PSR模型的基础上,从土地自然资源现状、土地社会经济环境压力、人文响应三方面出发,选取与山区土地资源密切相关的27项因素构建指标体系,对河北太行山区土地资源生态安全进行评价。采用ArcView、ArcGis软件对河北太行山遥感图像进行处理,获取土地方面数据并结合其他统计数据,运用相关数学方法,计算研究区1987、2000年各县综合生态安全值,对生态安全状况进行安全度分区分析,研究认为,该区域土地资源生态安全状况处于较差状态,且局部有恶化趋势,进而剖析其主要制约因素,提出相应改善安全状况的建议。     

靶向S基因外源性microRNA抑制TGEV增殖效果的研究

应用生物信息学软件对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因进行分析,筛选出可能与S基因有相互作用的外源miRNA:amiRNA-S-28035,amiRNA-S-28038,amiRNA-S-28165。之后,利用脂质体将构建好的相应的表达载体瞬时转染至PK-15细胞;通过Q-PCR和间接免疫荧光方法检测其对S基因的抑制作用;CPE分析和TCID50测定检测其对TGEV增殖的抑制效果。结果发现,3个外源性miRNA均降低了S基因mRNA的转录和蛋白的表达,其中amiRNA-S-28038对TGEV mRNA的平均抑制率可达64.6%,最高可达69.9%,表明外源性microRNA可以通过靶向TGEV基因组来抑制TGEV的复制。研究结果为猪传染性胃肠炎的预防和治疗提供了新的思路。