北京油鸡喙畸形性状候选基因GLA多态性的研究

本实验旨在研究α-半乳糖苷酶(GLA)基因的多态性及其与北京油鸡喙畸形性状之间的关系。用直接测序的方法检测GLA基因的单核苷酸多态性。结果表明:该基因启动子的-524、-389、-242、-212 bp处,内含子6的4 494、4 505、4 552、4 691 bp处以及外显子7的4 815 bp处共发现9个突变位点。卡方检验显示,所有位点均符合Hardy-Weinberg平衡(P0.05)。群体遗传多态性结果显示,正常鸡所有位点为中度多态(0.25PIC0.5);喙畸形鸡中,C4494T、G4505A、C4691T 3个位点为低度多态(PIC0.25),其余位点为中度多态(0.25PIC0.5)。基因型差异比较发现,在外显子7的C4815T位点处,喙畸形鸡未发生突变,与正常鸡基因型差异显著(P0.05);在内含子6的A4552C位点处,正常鸡AA型频率较高,喙畸形鸡CC型频率较高,两者基因型差异极显著(P0.01),其余位点差异不显著(P0.05)。结果提示,GLA基因的多态性与喙畸形存在一定关联,C4815T和A4552C 2个位点的SNPs有望成为剔除喙畸形性状的潜在遗传标记。     

复方磷霉素钙水溶性粉处方优化实验

为了优选磷霉素钙复方制剂,采用体外药物最小抑菌浓度测定法,测定了磷霉素钙与甲氧啶(TMP)、丁胺卡那霉素、恩诺沙星、庆大霉素、头孢噻肟钠、多西环素、氟甲砜霉素联合使用对大肠杆菌作用的协同指数.结果表明磷霉素钙与TMP的协同关系最好,协同指数为0.281,制剂中磷霉素钙与TMP的含量分别为5%和1%为最佳.     

不同时期使用农抗120控制花生网斑病侵染源的试验研究

用农抗120防治花生网斑病,不同使用方法效果不一。用常规喷洒叶面方法控制再侵染源,防效为21.4％,相当于多菌灵(29.4％);用农抗120和杀菌剂(抗枯灵或多菌灵等)混合,在花生播种时喷洒地面一次,控制初侵染源,防效为48.6％,用农抗120同杀菌剂混合,播种时喷洒地面,以控制初侵染源,7月上旬再喷洒叶面,控制再侵染源,效果最佳,防效高达70％以上。     

鸡缩胆囊素(CCK)在T4噬菌体表面的展示及免疫原性研究

采用T4噬菌体表面展示系统，将CCK-33肽四多串联体及八多串联体展示在T4噬菌体表面，并研究其免疫原性。将CCK四串联体和八串联体与SOC基因缺失的、依赖溶菌酶的噬菌体ФT4-Z1重组，获得重组噬菌体CT-4CCK和西T-8CCK。SDS-PAGE和Western Blot检测结果表明，CCK多串联体蛋白已经成功展示在T4噬菌体表面，其融合蛋白分子量约30ku和41ku，能够与CCK标准阳性血清发生特异性反应。以重组噬菌体为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡后，抗体浓度显著升高，肉鸡的体重、采食量都有所提高，而料肉比有所下降。结果说明，鸡CCK蛋白展示在T4噬菌体表面具有良好的免疫原性。     

共轭亚油酸对脂肪细胞成熟调控机理研究

共轭亚油酸(CLA．Conjugated linoleic acid)是一类具有顺、反异构体的十八碳二烯酸的统称,当前,CLA的生物学功能已成为研究热点,尤其在脂肪代谢调控上,具有降低脂肪沉积和血液胆固醇水平的功效。通过对CLA的脂肪细胞成熟(包括对脂肪细胞的增殖、分化,脂肪的沉积、甘油三磷酸的沉积等过程)调控机理的综合论述,以便为CLA更深入的研究提供参考。     

基因型鹅副粘病毒NA-1株全基因组的克隆及特性分析

将本实验室分离保存的NA-1株鹅副粘病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集鸡胚尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的GPMVZJ1株基因组序列,设计了8对特异性引物,RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒各基因片段,并将各目的基因片段回收纯化,克隆PGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,小提质粒选取阳性克隆酶切鉴定并进行序列测定,对测定结果进行拼接得到全长cDNA序列(GenBank登录号:DQ659677)。NA-1株核苷酸比新城疫病毒(NDV)核苷酸多6个碱基,位于1644~1645nt之间,符合NDV核苷酸“六碱基原则”。序列分析结果表明,GPMVNA-1株与各地代表株核苷酸同源性81.2%~91.3%。同时根据各毒株F基因开放阅读框前389个核苷酸序列绘制出系统发育进化树,结果表明GPMNNA-1株与SF02和QY97病毒株同属于基因型,不同于基因IX型NDV的国家标准株F48E9和基因型的LaSota传统弱毒株。     

霍乱弧菌封闭带毒素功能片段△G的原核表达及其免疫增强活性

用PCR扩增了MBP—ZOT质粒上的ZOT基因，该基因编码264～399位氨基酸残基C末端的15ku △G片段，并与经改造后的质粒P^BCX、连接。将重组后的质粒PMLAG在大肠杆菌BL21中表达，将表达的目的蛋白纯化，再将p^BCX-△G片段与传染性腔上囊炎病毒VP2包涵体蛋白通过滴鼻免疫途径对14日龄SPF鸡进行联合免疫试验，分别于免疫后第10、20d采集血清样品，进行ELISA试验，检测免疫后IBD抗体效价。动物免疫试验发现：融合蛋白P^BCX △G起到了明显免疫增强效果，与VP2重组蛋白联合免疫2次后，血清IBD的VP2 IgG抗体效价是单独用VP2免疫组的3倍，明显高于空白免疫组。     

牛疱疹病毒I型二重LUX荧光PCR鉴别检测方法的建立

采用LUX新型荧光PCR技术原理，建立了快速检测牛疱疹病毒I型（BHV-1）以及鉴别野毒感染和基因缺失疫苗免疫动物的二重实时荧光PCR方法。结果显示，该方法对多株BHV-1病毒均呈典型gE、gC双基因阳性反应，对其他常见动物疱疹病毒以及健康牛基因组DNA等均呈阴性反应；对细胞增殖病毒液的gE、gC双基因鉴别的检测敏感性可达0．4～O．04TCID50比常规PCR方法高100倍以上；对带毒牛血清、抗凝全血、牛新鲜精液和冷冻精液基因鉴别的检测敏感性分别达0．04TCID50、0．4TCID50、0．4TCID50和4TCID50。采用该方法从临床牛血样、鼻拭子样品中检出IBRV阳性样品，检测全程仅需约2h。对单基因克隆质粒的检测进一步证实该方法能特异地鉴定gE、gC基因，检测灵敏度分别达90、30拷贝。结果表明，该方法可应用于临床快速诊断BHV-1病毒感染，鉴别BHV-1病毒感染与对应的基因缺失疫苗免疫动物。     

晋西黄土区主要造林树种耗水量测算与分析

依据水量平衡原理,采用盆栽试验分别测算了晋西黄土区主要造林树种侧柏、刺槐、杏树和梨树在其生长季(4～10月)成熟单株树木的耗水量,并根据林地土壤水分动态及土壤水分特征曲线标定的各树种无效水界值,分析了各树种土壤水分供耗特点及其有效性.结果表明:①2002贫水年生长季降水量430.7 mm,试验树种同期耗水量约为430～470 mm,树木供耗失衡;2003丰水年降水量870.2 mm,耗水量约为450～510 mm,但降雨分配不均,5月和10月树木供耗也略有失衡.②不同树种年内土壤含水量变化趋势相近,而同月耗水量差异较大,同一树种不同月耗水量差异也较大,丰水年各试验地土壤水分状况要好于贫水年.③侧柏、刺槐、杏树和梨树无效水界值为8.0%,8.4%,9.4%和10.9%,侧柏较其它树种利用水分能力最强.贫水年林外单株树木土壤含水量在一段时间内低于对应树种的无效水界值,影响树木正常生长.单株树木依靠冬季和次年春季降水补充,生长季初期都能恢复到速效水水平.     

堆型艾美球虫3-1E基因在大肠杆菌中的可溶性表达及鉴定

将堆型艾美球虫（E．acervulina）3-1E基因克隆至pET-32a（＋）载体中。转化大肠杆菌BL21，在37℃下，用终浓度为1.0mmol／L的IPTG诱导表达，得到相对分子质量约为38500的重组蛋白。Western blot检测证实，该重组蛋白可以与特异性抗血清结合。在20℃条件下，以终浓度分别为2．0、1．0、0．5mmol／L的IPTG进行诱导．当IPTG终浓度为0．5mmol／L时，以可溶性形式存在的目的蛋白含量最高。