牛骨骼肌卫星细胞的分离培养及诱导分化方法的建立

为了给牛骨骼肌卫星细胞的分离培养及诱导分化方法及进一步揭示肌肉分化的机理及转基因肉牛的研究提供重要帮助,试验以新生胎牛的骨骼肌为试验材料,分别采用胶原酶Ⅰ和胶原酶Ⅺ与胰蛋白酶结合对其进行消化,并通过差速贴壁法对骨骼肌卫星细胞进行分离纯化,同时采用免疫荧光染色、RT-PCR、Western-blot法对骨骼肌卫星细胞进行鉴定。结果表明:研究成功获得了大量的牛骨骼肌卫星细胞;该细胞的标志性分子的mRNA及其蛋白表达的纯度在98%以上;细胞生长状态良好,可稳定传至90代并保持旺盛的增殖活力;细胞分化效率高,2%的马血清能够诱导细胞分化使其融合形成多核肌管,数量众多的肌管可自发融合为更粗的肌管,并可观察到其具有收缩现象。     

不同发育阶段小鼠胚胎S、M—期卵裂球的检测以及低温对胚胎细胞DNA合成的影响

利用放射自显影技术检测了小鼠着床前胚胎(4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚)不同发育阶段(早、中、晚)S期和M期卵裂球的比率，并研究了低温(4℃)对小鼠胚胎发育及DNA合成的影响。结果显示，早期和中期4-细胞胚胎S期卵裂球比率较高，分别是75%、92%，没有M期卵裂球，晚期4-细胞胚胎S期卵裂球比率较低(30%)，M期卵裂球比率为11%；早期和中期8-细胞胚胎S期卵裂球比率仍很高，分别是73%、80%，M期卵裂球分别为0、2.5%，晚期8-细胞胚胎S期卵裂球比率增至64%，M期卵裂球减少至9%；早、中、晚期桑葚胚的S期卵裂球比率分别是77%、72%和79%，M期卵裂球的比率分别是5%、3%和3%；早、中、晚期囊胚的S期卵裂球比率分别是78%、74%和77%，M期卵裂球的比率分别是4%、3%和4%。4℃的低温对小鼠早期胚胎的发育和DNA合成都没有明显影响；4-细胞、8-细胞胚胎和桑葚胚经低温处理及培养后其囊胚形成率和平均卵裂球数分别是62%和(26±6)个、54%和(25±7)个、87%和(34±8)个；4-细胞、8-细胞胚胎、桑葚胚和囊胚经低温处理后S期卵裂球比率分别是97%、77%、70%和74%。     

罗同丘细胞对小鼠卵母细胞体外成熟及其后续发育的影响

观察了卵丘细胞共培养对小鼠生发泡期部分裸露（PNO）和裸卵（NO）成熟和发育能力的影响；分别用小鼠、大鼠、猪的卵丘细胞与小鼠PNO和NO进行了共培养。检测了小鼠PNO和NO的减数分裂能力、生发泡构型、受精和胚胎发育能力。结果，PNO、NO的减数分裂能力显著（P〈0．05）低于卵丘完整复合体（COCs）的减数分裂能力。COCs中SN型卵母细胞比率显著高于PNO和NO中SN型卵母细胞比率（P〈0．05），大部分PNO和NO的卵母细胞核型为NSN型。与对照组相比，与小鼠或大鼠卵丘细胞共培养的小鼠PNO和NO的减数分裂能力没有显著提高，但是与猪卵丘细胞共培养却可以提高小鼠PNO和NO的减数分裂能力。结果表明，猪卵丘细胞能促进小鼠卵母细胞的体外成熟，但并不影响小鼠卵母细胞的受精和胚胎发育。     

镜鲤、柏氏鲤及其杂种肠道组织学的比较研究

本研究用组织切片厦Mallory氏三色法、PAS法染色技术观察7镜鲤、柏氏鲤及其杂种[(镜鲤♀×柏氏鲤♂)，F↓（1）]二龄鱼的肠道组织，结果是：三种鱼前、中、后肠的一般结构相似；但少数镜鲤和杂种的肠道组织有异常结构。一尾发育正常的镜鲤肠壁根薄，为一般鱼的J／2，绒毛变短，     

小鼠四倍体胚胎凋亡检测及嵌合胚胎制作

四倍体胚胎补偿技术,特别是ES细胞和iPS细胞功能验证是已成为目前干细胞研究领域热点。本试验旨在通过提高四倍体胚胎与ES细胞形成嵌合胚胎效率,为构建转基因动物模型搭建技术平台。本研究利用电融合法制作小鼠四倍体胚胎,并采用TUNEL法检测四倍体胚胎凋亡情况以对其进行质量评估,同时通过四倍体胚胎补偿法和聚合法,将小鼠四倍体胚胎与带有GFP标记ES细胞制作成嵌合胚胎,从而能够为快速、简便获得完全ES细胞发育而来生物个体提供重要技术支持,并为基因功能研究和疾病动物模型构建提供一定研究基础。     

内在调节蛋白及生长因子对精原干细胞增殖与分化的调控

文章阐述了在转录水平上精原干细胞在增殖与分化过程中的内在调节蛋白Plzf、Sohlh及其对精原干细胞的调节机制。介绍了胶质细胞源性神经营养因子、干细胞因子、Ets相关分子、骨形态发生蛋白、肝细胞生长因子、斯里兰卡肉桂碱受体等由支持细胞分泌的对精原细胞增殖与分化有重要作用的生长因子。     

ERβ及p-ERβ在小鼠发情周期卵巢内的表达

应用免疫组织化学和Western blot技术对雌激素受体β(Estrogen Receptor β,ERβ)及其磷酸化形式p-ERβ进行定位和半定量的研究,探讨ERβ和p-ERβ在小鼠发情周期卵巢中的表达规律。Western bolt检测结果表明,在小鼠发情周期卵巢中,ERβ和p-ERβ均在小鼠发情期卵巢中高水平表达,而在其他时期的表达量差异不显著。同时,免疫组织化学结果显示,ERβ及p-ERβ在小鼠卵巢的卵泡和黄体中,随发情周期的变化而有规律的分布。ERβ及p-ERβ在小鼠卵巢中的分布和表达量的变化与卵巢中卵泡和黄体的发育过程基本一致,揭示ERβ对小鼠卵巢发情周期的周期变化具有调节作用。     

猪颗粒细胞中Ran的定位及作用

试验成功地培养了猪颗粒细胞,并采用激光共聚焦显微技术研究细胞有丝分裂过程中Ran的定位变化。结果表明,猪间期颗粒细胞中,Ran主要分布于细胞核内,核仁内没有Ran分布,细胞质中Ran浓度极低。核膜破裂,细胞进入有丝分裂,Ran分布到整个细胞,但在染色体周围浓集;在有丝分裂中期,浓集区形态和纺锤体的形态一致;在有丝分裂后期和末期,Ran的浓集区随纺锤体的拉长而分布于被分开的两组染色体之间;有丝分裂结束后,随着细胞核的形成,Ran在染色体周围浓集,核膜形成后又浓集于细胞核内,在整个有丝分裂中,Ran在细胞分裂区的细胞膜下未见特殊分布。这些分布与Ran在细胞周期中的作用是一致的。     

鲁西黄牛成纤维细胞MSTN基因敲除研究

肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)又称GDF-8,属于转化生长因子超家族,是在骨骼肌中广泛表达的一类糖蛋白。试验根据已知牛MSTN基因的序列设计引物,通过PCR技术克隆获得同源长短臂,利用pPNT质粒为骨架构建含有loxP-Neo-loxP结构的打靶载体,然后利用脂质体转染鲁西黄牛成纤维细胞,G418和GANC双向筛选,收集打靶细胞,PCR法进行鉴定,初步确定筛选到的细胞为MSTN基因敲除细胞,为后续试验获得MSTN基因敲除牛奠定了基础。     

鲫鱼退化滤泡超微结构观察

本文研究了鲫鱼退化滤泡的超微结构，观察到，卵黄是由颗粒细胞吞噬消化的，这些吞噬的颗粒细胞最终要退化。同时，破碎的卵质成分中，含有溶解体、多泡体和螺纹样结构，它们的作用可能是消化卵质成分。