转fat-1基因对绵羊胎儿组织脂肪酸组成的影响

n-3多不饱和脂肪酸具有多种重要生理功能,哺乳动物只能通过食物摄取n-3多不饱和脂肪酸,以满足机体的健康所需。脂肪酸去饱和酶-1基因(fatty acid desaturase-1,fat-1)以18~20碳的n-6多不饱和脂肪酸为底物进行脱氢反应,产生相应的n-3多不饱和脂肪酸,为了解转fat-1基因绵羊(Ovis aries)具体脂肪酸的组成,本研究利用fat-1表达质粒转染绵羊胎儿成纤维细胞,筛选获得阳性单克隆细胞系,通过体细胞核移植,得到转fat-1基因绵羊。通过脂肪酸质谱测定仪对5种组织脂肪酸含量进行测定,研究了fat-1基因对5种组织3类32种脂肪酸含量变化的影响。结果发现,在脑和臀肌中,饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸类别百分含量变化不显著;在肝脏、心脏和睾丸中,fat-1基因能够使饱和脂肪酸下降、使肝脏和睾丸的单不饱和酸量升高、使心脏中单不饱和脂肪酸含量降低;单不饱和脂肪酸中C18:1n-9c和饱和脂肪酸中C16:0、C18:0的含量变化决定了转基因绵羊组织单不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸的变化趋势,在脑和臀肌中,这3种脂肪酸在转基因与对照组之间差异不显著;fat-1基因引起肝脏多不饱和脂肪酸降低,心脏和睾丸中多不饱和脂肪酸含量增高,主要由二十碳二烯酸C20:2(eicosadienoic acid,EDA)、二十碳三烯酸C20:3n-3(eicosatrienoic acid,ESA)、花生四烯酸C20:4n-6(arachidonic acid,ARA)、二十碳五烯酸C20:5n-3(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸C22:6n-3(docosahexaenoic acid,DHA)的含量起主导作用;在5种组织中,转基因组EPA与DHA的含量均升高,尤其是EPA差异显著(P0.05)。fat-1基因降低了多不饱和脂肪酸中C20:3n-3和C20:4n-6的含量而增加了C20:5n-3和C22:6n-3的含量,从而提高了n-3/n-6的比值。本研究解析了转fat-1基因绵羊的脂肪酸组成和特点,对开发优质绵羊品种、改善人类膳食中脂肪酸结构及降低肥胖症风险提供了理论依据。     

牛肌肉卫星细胞向胰岛素分泌细胞的诱导转分化研究

肌肉卫星细胞是源自中胚层的肌源干细胞,具有增殖分化融合成肌管并形成肌细胞的能力.在体内条件下,肌肉卫星细胞不可能跨胚层分化为内胚层来源的胰腺细胞.本研究从牛(Bos taurus)胎儿肌肉中分离培养得到肌肉卫星细胞,并在体外条件下将其诱导成胰岛素分泌细胞.在诱导过程中,分析了与胰腺发育相关的胰十二指肠同源基因盒1基因(pancreatic and duodenal homeobox 1,PDX1)、神经原素3基因(neurogenin 3,NGN3)、淀粉酶基因(Amylase)和胰岛素基因(Insulin,INS)的动态表达情况.结果表明,PDX1作为决定胰腺分化发育和胰岛功能的主要调节基因,在诱导分化的第2天能够检测到其mRNA的表达,在第3天表达量达到了最大,第4天以后维持在较低水平.NGN3是内分泌细胞形成非常重要的转录因子,是能够将胰岛素分泌到胞外的关键基因,其mRNA在分化诱导的第3天开始表达,第4天达到最高水平,之后逐渐下降.Amylase是胰腺发育中细胞外分泌相关的基因,Amylase mRNA在第6天才开始表达,8d后达到最高.INS mRNA表达量在11～12 d最高,酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)发现,诱导形成的胰腺细胞能够正常分泌胰岛素,培养液中胰岛素的浓度在诱导的11～12 d达到最高值.向培养液中添加葡萄糖后,可使细胞的胰岛素分泌量显著提高,说明诱导得到的细胞类似于成体胰岛的功能,其胰岛素分泌受外界葡萄糖浓度的调节.上述结果表明,肌肉卫星细胞可以被诱导转分化为胰岛素分泌细胞,并对培养环境中的葡萄糖刺激做出应答反应.本研究结果为进一步的研究和临床应用提供基础资料.     

牛卵泡抑素基因克隆及真核表达载体构建

[目的]克隆牛的卵泡抑素基因（Follistatin,FSTN）基因,构建真核表达载体。[方法]用Trizol法从牛的卵巢中提取总RNA,反转录成cDNA,用带有酶切位点牛FSTN的特异性引物扩增其完整编码区序列,连接到T载体、测序,序列无误后亚克隆入真核表达载体pIRES2-AcGFP1中,酶切及PCR鉴定载体。[结...     

影响哺乳动物卵子成熟的若干因素

随着胚胎工程的飞速发展,人们利用卵母细胞体外培养,体外受精等技术,已成功地培育出“试管牛”,“试管羊”,“试管猪”等,从而为快速繁育优良品种提供了可能。对卵母细胞成熟机制的研究,无疑是十分必要的。本文着重讨论影响卵子成熟的一些因素。我们知道,在动物繁殖期,卵母细胞开始生长、发育,积累营养物质,最后形成有许多颗粒细胞包围的,含有充满液体囊腔的囊状滤泡。但此时卵母细胞仍停留在减数分裂Ⅰ的双线期,没有完成减数分裂,故而这种卵母细胞不能受精。     

初生珍珠鸡消化系统的解剖

初生珍珠鸡消化系统的解剖李光鹏，程岭，马勇，张纪平（黑龙江省自然资源研究所）闵伟，高嵩，崔祥庆（柴河林业局大青林场）有关鸟类的解剖，主要是对成鸟尤其是家禽的报道较多，对雏鸟的解剖学资料较少。张心田等对黑龙江籽鹅的消化系统胚后发育作了报道。珍珠鸡肉质鲜...     

初生黑熊消化系统的解剖

黑熊(Selenarctos thibetanus)为食肉目熊科动物、别名狗熊、黑瞎子。有关其生态学方面的报道较多,而关于熊类消化系统解剖的报道较少。被测初生黑熊一只,来自阿城山河熊场。生约两个小时,因母熊卧压使窒息而死,随即用酒精浸泡,带回实验室后,改用5％福尔马林固定。常规方法解剖并测量。 1 表观状况 初生黑熊全身被以4～6毫米长的绒毛,浅灰色。表1列出一些表观特征数据。     

多肽生长因子与哺乳动物早期胚胎发育

本文介绍几年来报道较多的，与哺乳动物胚胎发育有关的几种生长因子：ＥＧＦ、ＴＧＦ－、ＴＧＦ－Ｂ、ｂＦＧＦ、ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－Ⅱ．ＣＳＦ－Ｉ、ＬＩＦ等．这些因子通过胚胎或胚胎周围组织细胞的旁分泌或自分泌途径，促进和影响胚胎发生．     

大鼠肌肉卫星细胞的分离、鉴定与诱导分化

肌肉卫星细胞是组织特异性干细胞,负责着骨骼肌的生长和再生.尽管发现卫星细胞的存在已经有50多年的历史了,但分离鉴定肌肉卫星细胞的方法仍然不稳定.本研究使用两步酶消化和差速贴壁相结合的方法分离大鼠(Rattus norve gicus)肌肉卫星细胞.免疫细胞化学染色显示,分离的大鼠肌肉卫星细胞高表达Desmin;通过RT-PCR鉴定所分离的细胞表达肌源性干细胞因子Myf5及Myod1;成肌诱导48h后,卫星细胞开始形成多核的肌管;成脂诱导1周后,细胞内开始出现脂滴,2周后充脂细胞明显增多.研究结果提示,分离的卫星细胞具有肌源性,有发育形成肌管和向成脂细胞分化的能力.