牛骨骼肌特异性启动子的筛选

分别构建含有牛骨骼肌α-肌动蛋白（α-actin）启动子、牛骨骼肌肌球蛋白轻链2(mylpf)启动子及牛肌酸激酶(ckm)启动子的荧光素酶报告基因表达质粒。将3种荧光素酶表达质粒分别与含有海肾荧光素酶的质粒共转染牛成肌细胞和牛成纤维细胞。经双荧光素酶检测得到转染成肌细胞,72 h后,α-actin启动子的表达量显著高于mylpf启动子和ckm启动子,转染成纤维细胞72 h后,这3种启动子的表达量和空载体相近。结果表明,α-actin启动子在成肌细胞中的表达效率高于mylpf启动子和ckm启动子;3种启动子在成纤维细胞中的表达量与空载体相近,证明了这3种启动子的骨骼肌特异性。通过对骨骼肌特异性启动子的研究,为外源基因在骨骼肌组织的特异性表达提供了试验依据,为进一步研究转基因肉牛奠定了基础。     

Metacaspase在酵母凋亡过程中的作用

Metacaspase是由YCA1/MCA1编码的一种哺乳动物caspases同系物。由于其分子结构的差异,使其断裂为不同的特异性底物。在哺乳动物中,凋亡被一组蛋白酶caspases定向激活,断裂特异性底物且触发细胞死亡。环境损伤、细胞内缺陷、预凋亡基因的异源表达诱导具有典型凋亡特征的酵母细胞死亡与metacaspase紧密相关。删除metacaspase可以阻碍不同因素引起的死亡,metacaspase在酵母细胞凋亡中具有核心作用。     

乳酸对酵母凋亡及某些相关基因表达的影响

采用终浓度为200、250、300 mmol.L-1的乳酸作用酵母细胞200 min,同时,采用终浓度为250mmol.L-1的乳酸分别作用酵母细胞120、200、260 min后,通过DAPI染色、PI染色和TUNEL染色法检测酵母细胞的凋亡。结果表明,随着乳酸终浓度的增加,酵母的死亡率随之增加。死亡的细胞出现DNA断裂和染色质凝聚现象,但没有显示膜损伤,所以乳酸引起的酵母细胞死亡是以凋亡的形式进行。200 mmol.L-1乳酸处理酵母200 min,可引起约不到30%的凋亡,当终浓度增加到300 mmol.L-1时,凋亡率可达80%以上,乳酸引起的死亡率和凋亡率具有剂量依赖性,但无时间依赖性。RT-PCR检测结果表明,随着凋亡程度的增加,Fis1、Bir1、SOD1、SOD2基因的表达随之降低。     

影响哺乳动物卵子成熟的若干因素

随着胚胎工程的飞速发展,人们利用卵母细胞体外培养,体外受精等技术,已成功地培育出“试管牛”,“试管羊”,“试管猪”等,从而为快速繁育优良品种提供了可能。对卵母细胞成熟机制的研究,无疑是十分必要的。本文着重讨论影响卵子成熟的一些因素。我们知道,在动物繁殖期,卵母细胞开始生长、发育,积累营养物质,最后形成有许多颗粒细胞包围的,含有充满液体囊腔的囊状滤泡。但此时卵母细胞仍停留在减数分裂Ⅰ的双线期,没有完成减数分裂,故而这种卵母细胞不能受精。     

胰岛素、催乳素对奶山羊乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

具有泌乳功能的乳腺上皮细胞可作为乳腺生长发育及泌乳功能调控机制研究的细胞模型。本研究对已建立的奶山羊乳腺上皮细胞系的泌乳功能进行评价。应用SDS-PAGE、TG试剂盒及HPLC方法对体外培养奶山羊乳腺上皮细胞总蛋白、乳脂和乳糖的分泌情况进行了测定以确定胰岛素、催乳素处理后的奶山羊乳腺上皮细胞的泌乳功能。结果表明：在添加表皮生长因子、胰岛素样生长因子-1、转铁蛋白-硒钠、标准胎牛血清的DF12培养液中奶山羊乳腺上皮细胞具有乳脂、乳蛋白及乳糖的分泌能力。胰岛素处理48 h后对细胞的泌乳功能无显著影响,催乳素处理细胞48 h后可使奶山羊乳腺上皮细胞乳蛋白、乳糖分泌能力显著升高。从而建立了具有泌乳功能的奶山羊乳腺上皮细胞系,为奶山羊、奶牛等重要经济动物泌乳机制的研究提供了便利条件。     

哺乳动物卵巢中的细胞凋亡及其调节

细胞凋亡是近几年细胞生物学研究的热点。卵巢中发生的生殖细胞减少、卵泡闭琐和黄体退化都与细胞凋亡密切相关。就上述三个过程中的细胞凋亡进行了概述 ,并简要介绍了新近发现的几种因素对卵巢细胞凋亡的调节。     

镜鲤、柏氏鲤及其杂种肠道组织学的比较研究

本研究用组织切片厦Mallory氏三色法、PAS法染色技术观察7镜鲤、柏氏鲤及其杂种[(镜鲤♀×柏氏鲤♂)，F↓（1）]二龄鱼的肠道组织，结果是：三种鱼前、中、后肠的一般结构相似；但少数镜鲤和杂种的肠道组织有异常结构。一尾发育正常的镜鲤肠壁根薄，为一般鱼的J／2，绒毛变短，     

凋亡基因Bcl-2与Bax在小鼠发情周期、妊娠及产后子宫中的表达

细胞凋亡作为细胞的一种主动死亡方式,与机体的生长、发育、分化、衰老、死亡等有重要关系。在雌性生殖器官,如子宫、卵巢、胎盘和乳腺中均有凋亡现象,其作用机理和发生机制尚不完全明确。其中任何一个环节的凋亡发生率过高或过低,均有可能影响妊娠的正常进行,导致不孕、流产、早产等。在雌性动物的发情周期中,整个机体特别是子宫等生殖器官出现     

小鼠四倍体胚胎凋亡检测及嵌合胚胎制作

四倍体胚胎补偿技术,特别是ES细胞和iPS细胞功能验证是已成为目前干细胞研究领域热点。本试验旨在通过提高四倍体胚胎与ES细胞形成嵌合胚胎效率,为构建转基因动物模型搭建技术平台。本研究利用电融合法制作小鼠四倍体胚胎,并采用TUNEL法检测四倍体胚胎凋亡情况以对其进行质量评估,同时通过四倍体胚胎补偿法和聚合法,将小鼠四倍体胚胎与带有GFP标记ES细胞制作成嵌合胚胎,从而能够为快速、简便获得完全ES细胞发育而来生物个体提供重要技术支持,并为基因功能研究和疾病动物模型构建提供一定研究基础。