猪水泡病病毒VP1重组蛋白的表达及抗原性检测

本研究利用猪水泡病病毒外壳蛋白VP1基因和pGEX-4T－1质粒成功构建重组质粒pGEX-4T－1－VP1，并转入BL21（DE3）表达菌中，经IPTG诱导后通过SDS-PAGE凝胶电泳实验和考马斯亮蓝染色，结果显示在57KDu处出现特异性表达条带。经免疫印迹试验证实本研究所表达的重组蛋白VP1具有抗原性，可为利用重组蛋白VP1建立间接ELISA方法检测猪水泡病奠定基础。     

小反刍兽疫病毒核蛋白单克隆抗体的制备与初步应用

针对小反刍兽疫病毒核蛋白制备特异性的单克隆抗体,并对其进行生物学特性鉴定和初步应用。以纯化的Bacmid-PPRV-N重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的致敏脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合,获得单克隆抗体,并通过染色体技术等方法研究其生物学特性,将其作为竞争单抗,Bacmid-PPRV-N重组蛋白作为检测抗原建立竞争ELISA检测方法。结果表明:经克隆和间接ELISA筛选,获得了2株能稳定分泌抗小反刍兽疫病毒N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5B11和3H10-3B8。生物学特性鉴定试验表明:5B11和3H10-3B8抗体类型和亚类均为IgG2b;5B11单抗腹水的效价达1∶819 200,3H10-3B8达1∶12 800;血清学试验证明2株单抗均能与Bacmid-PPRV-N重组蛋白抗原结合,具有高度的特异性;相加ELISA试验结果显示,5B11和3H10-3B8 2株单克隆抗体分别识别N蛋白上不同的抗原位点;2株杂交瘤细胞的染色体均为99～104。应用建立的c-ELISA检测方法对222份血清样品进行PPRV抗体的检测,与参考试剂盒比较得到98.20%的符合率。本研究获得了2株能稳定分泌抗PPRV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以单抗5B11作为竞争抗体建立了PPRV的c-ELISA检测方法。     

小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

用基因工程表达的小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)H蛋白免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA方法筛选,获得2株稳定分泌抗PPRVH蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2C6和4B10),其细胞培养上清液ELISA效价分别为1:256和1:128,腹水ELISA效价分别为1:128000和1:64000。亚型鉴定表明,2C6和4B10分别为IgG2b和IgG2a。ELISA结果显示,2株单克隆抗体仅与PPRVH蛋白和PPRV反应,不与其它相关病毒反应,表明2株单克隆抗体特异性良好。这2株单克隆抗体的获得为研究PPRVH蛋白生物学特性及建立PPRV免疫学检测方法奠定了基础。     

鹿流行性出血病病毒VP7基因的克隆及原核表达

根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体转入大肠埃希菌(E.coliLMG194),用L-阿拉伯糖诱导表达。SDS-PAGE和Western blot试验结果表明,EHDV VP7基因在LMG194中得到了表达,其表达产物可以与EHDV阳性血清特异性反应,说明该融和蛋白具有免疫学活性。     

打顶对烤烟叶片生长期间蛋白酶及含氮化合物的影响

K326生长期间进行打顶和未打顶处理,研究鲜烟叶片蛋白酶及含氮化合物的变化规律。结果表明：蛋白酶、总游离氨基酸在生长期间呈“M”型曲线变化,分别在打顶后20d和50d达到高峰,且打顶处理的烟株叶片蛋白酶含量大于未打顶处理,但总游离氨基酸与此相反。可溶性蛋白和非可溶性蛋白在生长期间呈先升高后降低的趋势,在打顶后20d左右达到最大值,随后逐渐降低,且打顶处理的烟株大于未打顶处理的烟株。     

非洲猪瘟病毒抗体检测间接ELISA方法的建立

以基因工程表达的非洲猪瘟病毒VP73蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,用以检测猪血清中抗非洲猪瘟VP73蛋白的抗体。该方法对非洲猪瘟标准阳性血清的检测灵敏度可以达到1∶2 560,与同类进口ELISA试剂盒相当。此方法只特异性检出非洲猪瘟阳性血清,而对猪传染性胸膜肺炎等5种猪传染病阳性血清的检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。批内和批间重复性试验结果发现,检测同一份血清的变异系数小于10%,表明其重复性较好。包被好的酶标板37℃放置5d后,对同一份血清的检测敏感性无明显变化,初步表明其稳定性较好。利用建立的间接ELISA方法和进口ELISA试剂盒分别对150份血清样品进行非洲猪瘟血清抗体检测,结果表明本方法的特异性和敏感性分别为99.1%和94.3%,2种方法检测结果的符合率为98%。以上试验表明,本试验建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性、较好的重复性和稳定性,可以满足临床检测的需求。     

CO_2倍增对干旱胁迫下大豆光合效应的影响

采用开顶式气室,研究了干旱胁迫下CO2浓度升高对大豆生长状况、光合作用及蒸腾作用的影响。结果表明,CO2浓度升高,大豆的光合速率提高5%,蒸腾速率降低6.8%,气孔导度降低11%,大豆的水分利用效率提高了1.03倍,增强了大豆的抗旱性。CO2浓度升高,可增强土壤微生物的活动,使大豆根瘤数增多。干旱胁迫则使大豆的光合速率、蒸腾速率、气孔导度降低,水分利用效率提高。     

烟草种子纯度检测方法研究进展

对烟草种子纯度鉴定的常规鉴定方法、电泳鉴定方法、DNA分子标记鉴定法、及自动化技术在烟草种子纯度鉴定方面的研究及应用进行了介绍,并分别讨论了各种方法的优缺点及其研究进展.     

一流本科课程建设背景下说课内容设计与视频制作技巧

基于团队在申报一流本科课程中总结的经验,分享切实可行、高质高效的说课视频设计心得,研究了说课中每个环节的设计思路与实现方法。基于说课在一流本科课程申报中的重要性,以“休闲农业与乡村旅游”课程为例,从说课定义、说课视频、说课内容、具体操作方式4个方面重点介绍一流本科课程申报中说课的具体内容。具体介绍了说课视频内容设计、展示素材整理、脚本设计和视频制作环节,重点阐述了说课中课程概述、教学设计思路、教学环境与方法、创新特色、教学效果评价与比较等内容,给出说课视频制作中的一些具体细节与注意事项,可为准备申报一流本科课程的教师提供较好的参考依据。      

牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

用基因工程表达的牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白免疫Balb／C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选,获得3株稳定分泌抗BVDVNS3蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株（1A9、2C3和5D5）,其细胞培养上清液ELISA效价分别为1：256、1：128和1：256,腹水ELISA效价分别为1：128000、1：64000和1：128000。亚型鉴定表明,1A9、2C3和5D5分别为IgG1、IgG2a和IgG1、ELISA结果显示,3株单克隆抗体仅与BVDVNS3蛋白和BVDV反应,不与其它相关病毒反应,表明3株单克隆抗体特异性良好。这3株单克隆抗体的获得为建立BVDV免疫学检测方法奠定了基础。