检测非洲猪瘟病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法的建立

利用非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白不同抗原表位的2株单克隆抗体,1株作为捕获抗体,另1株用辣根过氧化物酶(HRP)标记后作为检测抗体,采用方阵法对ELISA反应条件进行优化,建立了检测ASFV抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果显示,该方法中捕获抗体包被质量浓度为1.25 mg/L,酶标单克隆抗体的最适稀释度为1∶4 000。通过试验确定该方法的临界值为0.299,当样品D₄₅₀值≥0.3,且P/N大于2时,判定为阳性。该双单抗夹心ELISA方法可特异性检测ASFV抗原,其他抗原检测结果均为阴性,特异性强;重复性好,批内和批间变异系数(CV)均小于8%。应用本研究建立的方法与荧光PCR方法同时对225份临床样品进行检测,总符合率为96.89%。结果表明,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法可用于ASFV抗原的大量样品检测,为ASF防控提供了技术支持。     

Ca-GA合剂和磷浸种对水分胁迫条件下冬小麦萌发及幼苗叶绿素荧光参数的影响

在干旱胁迫条件下 ,研究了钙赤合剂 (Ca -GA)和磷 (KH2 PO4 )浸种对冬小麦种子萌发及幼苗叶绿素荧光参数的影响。结果表明 :经Ca- GA处理和KH2 PO4 处理后的冬小麦种子萌发时α 淀粉酶活性显著升高 ,发芽势、发芽率均高于对照。幼苗的根冠比增大 ,叶片相对含水量增大。幼苗可变荧光 (Fv)、最大荧光 (Fm)、可变荧光与最大荧光比 (Fv/Fm)、可变荧光与初始荧光比 (Fv/Fo)、最大荧光与初始荧光比 (Fm/Fo)、光化学淬灭系数 (qP)在水分胁迫下降低幅度均小于对照 ;而初始荧光 (Fo)升高幅度小于对照 ,非光化学淬灭系数 (NPQ)升高幅度则大于对照 ,说明经Ca GA和KH2 PO4 处理可以减缓水分胁迫造成的光合电子传递、光合原初反应过程的抑制程度 ,提高光系统Ⅱ(PSⅡ)的电子传递和热耗散能力。实验结果表明 ,Ca- GA和KH2 PO4 浸种对促进冬小麦种子的萌发和提高幼苗的抗旱性有较大的帮助。     

湿地植物铅的富集特征及根际铅移动性的影响因素研究

【目的】 揭示湿地植物铅的富集特征及根际铅移动性影响因素的作用机理,为人工湿地修复重金属污染水体提供理论指导和依据。 【方法】 通过根箱法研究了五种挺水湿地植物 (大叶皇冠草、黑籽荸荠、圆币草、草龙、小婆婆纳) 根际 pH、氧化还原电位 (Eh)、Fe2+ 和 Fe3+ 浓度、铅 (Pb) 的化学形态及移动性的变化。 【结果】 与非根际相比,五种植物根际pH下降,Fe2+ 和 Fe3+ 浓度显著下降,Eh显著升高,Pb的移动性显著降低 (P<0.05)。与非根际相比,根际pH下降幅度为 0.1～0.4个单位,根际Fe2+和 Fe3+浓度下降幅度为0.6～2.7 mmol/kg。土壤中铅的存在形态主要以残渣态为主 (36.39%～47.54%),其次是铁锰氧化物结合态 (30.16%～41.64%)、有机质结合态 (8.85%～15.08%) 和碳酸盐结合态 (6.89%～12.46%)。五种湿地植物根际Pb的移动性降低的主要原因是根际碳酸盐结合态Pb含量显著下降,其中大叶皇冠草受根际pH、Eh、Fe3+和Fe2+的影响导致其根际Pb移动性降低效应最为显著。 【结论】 五种供试植物Pb主要分布在根部;根表富集的铁膜数量显著高于锰膜数量;供试植物根际Fe3+含量与Pb的移动性因子呈极显著正相关,湿地植物根系铁氧化能力对降低其根际重金属的移动性有重要作用。本研究为人工湿地修复重金属污染水体提供了有力的理论依据。      

琼脂培养基质条件下砷在水稻幼苗中的积累转运

[目的]研究砷（As）在水稻幼苗中的积累转运。[方法]利用琼脂培养基质模拟厌氧的湿地环境,在不同As浓度条件下对水稻幼苗进行培养。[结果]培养基质中的As对水稻根部干重没有显著影响,对地上部干重产生了显著抑制作用。低剂量的As可以促进部分水稻品种干物质的积累。水稻根系对As具有较强的吸收积累能力,As被根系吸收后多数被固定于根部,只有少量被转运至茎叶,二者呈极显著正相关关系。[结论]该结果为进一步研究As在水稻中的积累转运规律提供了重要的理论依据。     

水疱性口炎病毒单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定

用纯化的水疱性口炎毒(VSV)免疫接种Balb/c小鼠,取免疫接种的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌抗VSV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(5B1、8H1、9B9和11E11)。4株单克隆抗体均能与VSV反应,且不与其他病毒及BHK细胞反应,表明4株单克隆抗体特异性良好。4株单克隆抗体腹水ELISA效价分别为1∶512 000、1∶256000、1∶256 000、1∶1 024 000。本试验为研究VSV生物学特性和建立VSV免疫学检测方法奠定了基础。     

孔雀链球菌病的诊断

链球菌病是禽类疾病中常见的细菌性传染病之一，其临床特征主要表现为昏睡、持续性下痢、皮下组织及全身浆膜水肿、出血。多在鸡、鸭和火鸡中发生，其他禽类偶有感染。但孔雀感染链球菌的病例在国内却鲜有报道。近日某动物园孔雀舍暴发一急性传染病，发病率在50％以上，死亡率30％左右。主要     

八宝景天–柑橘间作降低柑橘根际土壤镉含量以减少对镉的吸收

  【目的】  超富集植物与经济作物间作是实现重金属污染农田边生产边修复的有效措施。为此，研究八宝景天 (Hylotelephium spectabile) 和柑橘间作对柑橘重金属吸收累积的影响，为柑橘生产提供安全、经济有效的栽培措施。  【方法】  以早熟和晚熟柑橘、八宝景天为试材进行盆栽试验，以全Cd含量为0.92 mg/kg的污染土壤和0.06 mg/kg的清洁土壤为供试土壤。分别设置早熟和晚熟柑橘单作、八宝景天单作、早熟和晚熟柑橘–八宝景天间作和柑橘–八宝景天限制性间作，共7个处理，限制性间作采用半透膜根际袋将八宝景天和柑橘根系分开。在植株生长74天 (7月) 和218天 (12月)时采样，调查植株生物量和Cd含量，分别测定根际土壤全Cd和有效态Cd含量。  【结果】  与柑橘单作相比，与八宝景天间作柑橘的叶片Cd含量降低了26.7%，与清洁土壤种植的柑橘叶片Cd含量 (0.011 mg/kg) 相近。间作条件下，柑橘根际土壤中全Cd含量由0.92 mg/kg降低至0.75 mg/kg，有效态Cd含量由单作处理的0.82 mg/kg降低至0.78 mg/kg，低于柑橘单作处理；柑橘–八宝景天间作柑橘根际土壤中全Cd的减少量是柑橘–八宝景天限制性间作柑橘根际土壤全Cd减少量 (6.52%) 的2.83倍。柑橘–八宝景天间作中八宝景天对土壤Cd的年提取量、年去除率分别达1.40 mg/pot、3.34%，与其单作 (1.50 mg/pot、3.73%) 相比，去除效率降低了10.6%，其主要原因是间作降低了八宝景天的生物量。  【结论】  尽管柑橘–八宝景天间作影响八宝景天对镉的去除效率，但显著降低了柑橘根际全Cd和有效态Cd含量，进而将柑橘叶片Cd含量降低到与清洁土壤下近似的水平，实现了边修复边安全生产的目标，因此，柑橘–八宝景天间作可作为中低度Cd污染农田土壤修复的重要生物措施。     

鹿流行性出血病RT-LAMP检测方法的初步建立

本实验应用反转录环介导等温扩增技术（RT-LAMP）建立了一种快速、灵敏、特异的检测鹿流行性出血病病毒（EHDV）的方法。针对EHDV-VP7基因,在基因的保守区域设计两对特异性引物,通过优化反应温度、Mg2＋浓度等,建立了EHDV RT-LAMP检测方法。实验结果表明,建立的EHDV RT-LAMP检测方法的灵敏度是普通荧光RT-PCR方法的1 000倍,且能区分EHDV、AKV和VSV病毒。     

打顶对烤烟叶片生长期间蛋白酶及含氮化合物的影响

K326生长期间进行打顶和未打顶处理,研究鲜烟叶片蛋白酶及含氮化合物的变化规律。结果表明:蛋白酶、总游离氨基酸在生长期间呈“M”型曲线变化,分别在打顶后20d和50d达到高峰,且打顶处理的烟株叶片蛋白酶含量大于未打顶处理,但总游离氨基酸与此相反。可溶性蛋白和非可溶性蛋白在生长期间呈先升高后降低的趋势,在打顶后20d左右达到最大值,随后逐渐降低,且打顶处理的烟株大于未打顶处理的烟株。     

鹿流行性出血病病毒单克隆抗体的制备与鉴定

为了更好的研究鹿流行性出血病病毒(EHDV)的生物学特性和建立EHDV免疫学检测方法,本研究用纯化的EHDV免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得了2株(1A5和8H6)能够稳定分泌抗EHDV单抗的杂交瘤细胞株.其细胞培养上清效价分别为1∶256和1∶512,腹水效价分别为1∶1 024 000和1∶2 048 000;McAb 1A5和8H6 的相对亲和力分别为0.9 mg/L和0.7 mg/L.间接ELISA结果显示,2株单抗仅与EHDV反应,不与蓝舌病病毒、赤羽病病毒、水疱性口炎病毒、小反刍兽疫病毒和BHK细胞反应,表明2株单抗特异性良好.这2株单抗的获得为研究EHDV生物学特性和建立EHDV检测方法奠定了基础.