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优选玉屏风多糖脂质体的最佳工艺并对其进行表征验证。采用逆向蒸发法制备玉屏风多糖脂质体,以膜材比、脂药比和超声时间为考察因素,包封率为评价指标,采用L9(34)正交试验设计优选制备条件,以超速离心法测定包封率,体外释药试验验证,纳米颗粒分析仪和透射电镜测定其粒径大小与形态。制备玉屏风多糖脂质体的最佳工艺为膜材比8∶1,脂药比4∶1,超声时间90s,包封率88.38%,24h累积释放率73.45%,平均粒径132.65nm。制备的玉屏风多糖脂质体具有较高的包封率与良好的缓释作用,粒径和形态较均匀,重现性好。 相似文献
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比较了3种不同的牙鲆淋巴囊肿病毒纯化方法,优化后的方法如下:剥离囊肿表面薄膜,收集内容物,匀浆后再用超声波细胞破碎仪破碎,反复冻融,650×g、1800×g差速离心,30%(W/W)蔗糖垫底超速离心(78500×g)浓缩病毒,最后蔗糖密度梯度超速离心(78500×g)纯化病毒。电镜观察发现,出现在47%~52%蔗糖密度区域的病毒带含有多量、纯净和结构一致的病毒粒子。此外,利用制备的兔抗血清对不同地区的病毒进行了免疫特性分析,Western blotting检测显示来自威海、青岛及秦皇岛3个地区的淋巴囊肿病毒反应结果是一致的,均有3条蛋白带发生反应,其分子量分别为125、66和55kDa。 相似文献
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猪圆环病毒(PCV)首先是由德国学者Tischer等在传代的PK—15细胞中发现,当时他观察到一种形态类似小RNA病毒的圆型小颗粒病毒,该病毒可以持续感染PK—15细胞,不会引起细胞病变。1982年,Tischer等用超速离心法提取了病毒及核酸,鉴定了病毒的核酸类型,观察了病毒形态,首次证实是一种单链环状DNA病毒,并命名为猪圆环病毒(PCV)。随后,Tischer、Allian用从PK—15细胞中分离的PCV人工感染猪,没有引起任何临床症状和病理变化,当时认为PCV只是一种可以感染猪但不引起发病的病毒,对猪不造成危害。1991年Clark报道, 相似文献
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猪骨骼肌肌内脂滴分离和纯化方法的探究 总被引:1,自引:0,他引:1
本试验旨在探究分离和纯化猪骨骼肌肌内脂滴的方法,为深入揭示肌内脂肪形成的调控机制奠定基础。试验采集体重为(120±2) kg的"杜×长×大"三元杂交猪的背最长肌,采用梯度超速离心法对猪背最长肌肌内脂滴初步超速分离,探索不同组织匀浆方式、缓冲液pH、温度及苯甲基磺酰氟(PMSF)对肌内脂滴初分离的影响,确定高效获取纯化脂滴的最佳离心力及离心时间。使用油红O及Bodipy染色进行肌内脂滴形态学鉴定,通过考马斯亮蓝染色及Western blot技术对脂滴进行纯度检测。结果表明:使用全自动组织研磨仪匀浆猪骨骼肌,在4℃、pH 7.4缓冲液中添加PM SF时分离获得的肌内脂滴形态完整;纯化条件为4℃、230 000×g离心30 min时获得脂滴量最多、形态最好,考马斯亮蓝染色鉴定脂滴蛋白条带丰富清晰,并且Western blot验证纯度最高。本实验室建立了猪骨骼肌肌内脂滴的分离和纯化方法,应用此方法获得了形态完整且纯度较高的肌内脂滴,该技术可为研究肌内脂肪生成和分子调控机制开辟新的途径。 相似文献
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病毒的浓缩与纯化是病毒分子生物学和生物制品研究的主要内容,也是疾病诊断的常用 技术.超速离心法、密度梯度离心、超过滤法、层析法等提纯浓缩病毒的效果好,但其对设 备要求较高,而且操作较为复杂,难以在基层推广应用.而采用透析袋、红细胞吸附释放法 对新城疫病毒进行浓缩、提纯无需特殊设备,其操作简便,使浓缩后的病毒含量及纯度有了较大的提高,也便于进行该类病毒病的诊断与研究. 相似文献
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间接ELISA方法快速检测鲤春病毒(SVCV)的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以超速离心纯化的鲤春病毒(SVCV)免疫大白兔,制备了兔抗SVCV免疫血清,在此基础上建立了快速检测SVCV的间接ELISA方法,对40份经过细胞培养和RT-PCR方法检毕的SVC样品(8份阳性,32份阴性)进行验证,符合率100%. 相似文献
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【目的】鸡胚蛋可用于改善机体免疫功能,研究不同提取方法对鸡胚组织中外泌体的分离效果,有利于深入解析鸡胚蛋生理功能。【方法】收集13胚龄惠阳胡须鸡胚蛋12枚(3组,4枚/组),通过酶消化、差速离心及过滤等前处理后将所获样品分为4份,通过超速离心法(UC)、蔗糖垫超速离心法(SDUC)、膜亲和法(exoEasy)以及聚乙二醇沉淀法(ExoQuick)4种方法分离提取外泌体,分别标记A~D。比较BCA蛋白浓度测定、透射电镜、纳米流式和标志蛋白流式检测等4种方法获得的外泌体蛋白浓度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况。【结果】4种方法均能获得符合外泌体直径分布(40~200 nm)、具有外泌体典型微囊结构特征的囊泡物质,外泌体蛋白浓度和颗粒浓度由高到低依次为DCAB,但D样品中含有其他聚团杂质蛋白;表面标志蛋白CD63、CD81阳性率变化趋势为BDCA。【结论】综合考量外泌体的纯度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况,根据供试组织样品来源、试验条件和目的可优选蔗糖垫超速离心法或膜亲和法,如需高纯度外泌体可首选蔗糖垫超速离心法,样品稀有或不具备超速离心设备则选用膜亲和法。 相似文献
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利用蔗糖密度梯度超速离心浓缩纯化vero细胞培养SA14-14-2株猪乙脑病毒灭活抗原,进行胶体金点样和配比优化,制备GICA试纸条.结果最优浓缩样品配比构成是PBS 1.32 mL、灭活病毒液24 mL、30%蔗糖2.6 mL、55%蔗糖6.6 mL;用于胶体金偶联的抗原浓度约2.80 mg/mL.试纸条能明显区别阴阳性血清,阳性血清稀释1∶256能显示条带,优化后灵敏度达到1∶1024.与猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、Ⅱ型圆环病毒病阳性血清不发生交叉反应.用于检测2群免疫母猪抗体阳性率分别为86%和100%,说明疫苗免疫效果较好;检测未经免疫肉猪出现阳性结果,分别达到38%和24%,说明存在病毒隐形感染. 相似文献
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经原代体外分离培养及鉴定获取鹿茸间充质干细胞(Antler mesenchymal stem cells,AMSCs),分别利用超速离心法(Ultracentrifugation,UC)和膜亲和法(exoEasy)提取AMSCs培养基上清中的外泌体(Exosomes,Exo),并比较2种方法提取AMSCs-Exo效果,以及验证AMSCs-Exo的功能。结果表明:UC法和exoEasy法均能够提取到AMSCs-Exo,UC法提取的AMSCs-Exo结构更完整,杂质较少,粒径分布具有代表性,仅有单一主峰,Western blot(WB)能检测出AMSCs-Exo标志蛋白;而exoEasy法提取的AMSCs-Exo浓度较低,结构不完整,杂质较多,并且颗粒分布分散,不具有代表性,没有单一主峰,WB无法检测到Exo标志蛋白。进一步通过5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine assay,EdU)试验证实,AMSCs-Exo可显著促进haCat细胞增殖。通过比较2种方法提取的AMSCs-Exo可知,UC法提取的AMSCs-Exo更适合相关功能验证研究中。 相似文献