江西省鲫鱼造血器官坏死病病毒(CyHV-2)感染流行病学研究

为了解江西省鲫鱼造血器官坏死病的流行状况和特征,2015~2017年,从江西省22个区(县、市)的水产养殖(苗种)场采集80批鲫样品,使用聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光定量PCR(qPCR)进行病原鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)的监测,扩增部分基因片段,进行测序和做进化树分析。结果显示,80批鲫样品检出CyHV-2型阳性样本6批,阳性检出率为7.5%,江西省存在CyHV-2散在性分布;系统进化分析显示江西省监测的所有CyHV-2毒株与YC110907、SY-C1、JS2012、H.Fukuda等CyHV-2病毒株属同一分支。鉴于目前江西省CyHV-2尚未成扩散的趋势,需加强苗种引种检疫,筑牢产业生物安全屏障。     

“天辰水产专用液体肥”对养殖池塘中浮游生物种群结构的影响

将“天辰水产专用液体肥”定量施放在池塘养殖水体中后,定时检测水体中浮游生物量和种群结构的变化。结果表明,对照池Ⅰ、Ⅲ和Ⅴ号浮游植物的量为0.1mg/L￣0.2mg/L,浮游动物的量为0.1mg/L￣0.2mg/L;而试验池塘中经过2次施放肥料后,浮游植物的量上升为0.1mg/L￣0.3mg/L,浮游动物的量为0.2mg/L￣0.3mg/L。浮游植物中蓝藻和绿藻数量虽然在施肥后数量有所上升,但没有硅藻明显。3个试验池塘中浮游动物的数量也有明显的上升。     

2019年江西省水产养殖动物疾病监测与流行分析

2019年在全省30个县设置水产病害测报点93个进行常规水生动物疾病监测,同时开展9种重大、新发水生动物疫病的病原监测,以期全面了解江西省水产动物病害流行情况。各养殖品种的监测面积共计5647.6914公顷,共监测到27种病害,监测到6种重大、新发水生动物疫病病原,影响江西省水产养殖业较大的水生动物疫病有细菌性败血症、草鱼出血病、鲫造血器官坏死病、白斑综合征、孢子虫病等,6月~8月是我省鱼病综合发病高峰期。并通过对2019年病害流行情况和发生特点进行分析,预测了2020年我省病害流行趋势并提出了相应的防治措施。     

TaqMan实时荧光PCR快速检测斑点叉尾鮰病毒

根据GenBank登录的斑点叉尾鮰病毒株ORF8基因序列,设计引物和Taqman荧光探针,建立了用于检测斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒的实时荧光定量PCR方法;对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性,并建立了绝对定量方法。特异性试验证实,该方法只能检测到斑点叉尾鮰病毒,与真鲷虹彩病毒、蛙虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒等多种常见的水生动物病毒没有交叉反应,具有高度的特异性。标准曲线表明,在3.3×10~3.3×107拷贝数之间有较好的线性关系(r=0.998 3),最少可检测到33个拷贝的阳性质粒,敏感度很高。同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现,变异系数分别为0.7%和1.2%,重复性较好。该方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3h。试验结果表明,采用实时荧光PCR检测斑点叉尾鮰病毒方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点,并且能对病毒进行准确的定量分析,不仅适合口岸进出口检验检疫的需求,而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具。     

锦鲤人工感染SVCV后血液生化指标监测及在疾病诊断中的应用分析

对健康锦鲤、人工感染SVCV并引起患病症状的锦鲤进行尾静脉取血,然后对其血液生化指标进行测定,其结果经数据分析处理,得出在测定的18个参数当中,尿酸、甘油三酯、尿素氮的变化最灵敏,因此,检测尿酸、甘油三酯、尿素氮三个参数可做为SVCV疾病初期的诊断指标。总蛋白、白蛋白、球蛋白、高密度脂蛋白、乳酸脱氢酶、肌酐、葡萄糖在感染后期变化明显,可以做为锦鲤患SVC疾病后期的诊断参考指标。     

6株鱼类病毒性神经坏死病病毒cp基因的分子特征和遗传发生分析

根据已报道的鱼类病毒性神经坏死病毒(viral nervous necrosis virus, VNNV)衣壳蛋白基因(coat protein gene, cp基因)设计引物,对2006年从我国沿海养殖石斑鱼中分离到的6株鱼类神经坏死病毒进行RTPCR扩增,特异性扩增出6株病毒的完整衣壳蛋白基因,分别连接到pMD18-T载体中,并进行序列测定和分析.结果发现,6个VNNV分离株的cp基因核苷酸序列的同源性在97.3%以上;推导的氨基酸序列同源性在79.6%～99.1%之间.根据cp基因核苷酸序列绘制分子进化树,发现6个VNNV分离株在进化树同一分枝上,属于RGNNV基因型,与已报道的点带石斑鱼神经坏死病病毒(ECNNV)、巨石斑鱼神经坏死病病毒(ETNNV)及玛拉巴石斑鱼神经坏死病病毒(MGNNV)亲缘关系较近.试验结果表明,目前我国沿海养殖场发生的鱼类病毒性神经坏死病均由同一来源的病毒引起,该基因型的鱼类神经坏死病毒在我国沿海养殖的石斑鱼中广泛传播流行.     

2011年度江西水产养殖病害监测

2011年在全省设置测报县(市、区)33个,对3333hm2养殖水面的9个养殖品种进行病害监测。共监测到28种病害,其中细菌性疾病为主要养殖病害,占总数的57.1%,其次为寄生虫性疾病,占总数的25%。5-9月是江西鱼病综合发病高峰期。根据各主要养殖种类的平均死亡率,估测2011年全省水产养殖病害死亡造成的直接经济损失超过8.4亿元。     

2016年江西地区草鱼呼肠孤病毒(GCRV)分子流行病学分析

应用三重RT-PCR检测方法对2016年采自江西地区重要的水产养殖(苗种)场的50批草鱼样品和10份疑似草鱼出血病病例进行GCRV检测.结果显示,50批草鱼样品检出GCRV-Ⅱ型阳性样本5批,阳性检出率为10%;10份临床疑似病例检出GCRV-Ⅱ阳性样本6份,阳性检出率为60%,表明我省养殖的草鱼成鱼和草鱼苗种均携带有草鱼呼肠孤病毒(GCRV),且阳性率较高,需加强苗种的引种检疫;当前我省草鱼主养区域草鱼出血病的流行株主要以基因Ⅱ型为主,这对我省进行草鱼出血病精准免疫预防有很强的指导意义.     

江西省2021年上半年水生动物病害发生情况调研及防控建议

2021年上半年江西省多地反映水产养殖病害较为严重,为调查了解江西省上半年的病害发生具体情况,采取现场调研、书面调查、电话问询等多种方式,组织开展了全省水生动物疾病发生情况调研与分析.调研结果显示,以病原种类计,2021年上半年全省11个地市的主要养殖鱼类发生的水生动物疾病共计有41种,其中病毒性疾病3种,细菌性疾病1...     

鱼类病毒性神经坏死病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其特性

利用RT-PCR技术获得病毒性神经坏死病毒0603株的衣壳蛋白基因,将其插入到杆状病毒Bac-To-Bac表达系统的pFastBacI质粒中,构建了pFastBac-cp质粒.转化DH10Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-cp,脂质体介导将其转染Sf9细胞产生有感染性的重组杆状病毒AcNPV-cp.利用AcNPV-cp感染Sf9细胞后,SDS-PAGE分析可见大小约为37 ku的特异性蛋白带,Western-blotting分析发现,其可以与病毒性神经坏死病毒阳性血清反应出现特异性的杂交带.试验结果表明,AcNPV-cp在Sf9细胞中成功地表达了病毒性神经坏死病毒的衣壳蛋白,其具有良好的免疫学活性.负染电镜观察发现,CP蛋白可自行装配成病毒样颗粒,其大小形态类似于病毒性神经坏死病毒.制备超薄切片后电镜观察发现,CP蛋白自行装配成的病毒样颗粒呈晶格状排列在细胞质中.为研制有效防控鱼类病毒性神经坏死病的新型颗粒性疫苗奠定了基础.