6株鱼类病毒性神经坏死病病毒cp基因的分子特征和遗传发生分析

根据已报道的鱼类病毒性神经坏死病毒(viral nervous necrosis virus, VNNV)衣壳蛋白基因(coat protein gene, cp基因)设计引物,对2006年从我国沿海养殖石斑鱼中分离到的6株鱼类神经坏死病毒进行RTPCR扩增,特异性扩增出6株病毒的完整衣壳蛋白基因,分别连接到pMD18-T载体中,并进行序列测定和分析.结果发现,6个VNNV分离株的cp基因核苷酸序列的同源性在97.3%以上;推导的氨基酸序列同源性在79.6%～99.1%之间.根据cp基因核苷酸序列绘制分子进化树,发现6个VNNV分离株在进化树同一分枝上,属于RGNNV基因型,与已报道的点带石斑鱼神经坏死病病毒(ECNNV)、巨石斑鱼神经坏死病病毒(ETNNV)及玛拉巴石斑鱼神经坏死病病毒(MGNNV)亲缘关系较近.试验结果表明,目前我国沿海养殖场发生的鱼类病毒性神经坏死病均由同一来源的病毒引起,该基因型的鱼类神经坏死病毒在我国沿海养殖的石斑鱼中广泛传播流行.     

猪呼吸道疾病综合征的病因分析与防控

在我国养猪业由分散、传统、数量型向集约、规模、质量型转变的过程中,我国猪病综合防制体系还不够完善,疫苗研制和药物保健相对滞后,导致猪病日渐增多且日趋复杂,形成了呼吸道综合征、繁殖障碍综合征及肠道综合征等三大系统性疫病,尤其是猪呼吸道疾病在规模化猪场十分普遍。细菌、病毒、支原体及寄生虫等病原性因素和不良环境因子、应激及低下的免疫力等非病原性因素,都可诱发、     

上半年肉鸡行情总结及下半年预测

正世上没有一个人会承认自己是不敢的,这"不愿"两字,正是"不敢"的最好托词。——古龙怅寥廓,问苍茫大地,谁主沉浮?今年勇敢养鸡人都赚的让人眼红,不愿养鸡的,望行情仰天长叹,是不愿还是不敢,自己心里明白。谈起2016年肉鸡行情,估计很多人都会想起2015年行情。春节过后,肉鸡行情远远超出了去年大家的预测。行情有如洪水猛兽一般突飞猛涨之时,"暴利"、"鸡飞冲天"等词语也随之而     

猪呼吸道疾病综合征的病因分析与防控

在我国养猪业由分散、传统、数量型向集约、规模、质量型转变的过程中,我国猪病综合防制体系还不够完善,疫苗研制和药物保健相对滞后,导致猪病日渐增多且日趋复杂,形成了呼吸道综合征、繁殖障碍综合征及肠道综合征等三大系统性疫病,尤其是猪呼吸道疾病在规模化猪场十分普遍。细菌、病毒、支原体及寄生虫等病原性因素和不良环境因子、应激及低下的免疫力等非病原性因素,都可诱发、     

鱼类神经坏死病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用

根据GenBank中登录的鱼类神经坏死病毒CP基因序列，选择高度保守区域设计引物和TaqMan荧光探针，通过对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化，建立了用于检测鱼类神经坏死病毒的实时荧光RT-PCR方法。利用该方法检测鱼类神经坏死病毒及其他多种常见的水生动物RNA病毒，结果只能检测到目的病毒，表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现，其最低检测限可达1．2pg／μL的总RNA。与RT-PCR的灵敏度对比试验表明，其敏感度比RT-PCR高100倍。对同一样品进行检测，在组内及组间的变异系数分别为0．9％以及1．5％，证实其重复性极好，并且从抽提核酸到得出结果仅需4h。对临床500份样品进行鱼类神经坏死病毒检测，结果发现有40份阳性样品。这些结果表明，本研究所建立的实时荧光RT-PCR能对鱼类神经坏死病毒进行准确、快速的检测，具有特异性好、灵敏度高的优点，是开展鱼类神经坏死病的临床检测和疫情监测工作的有力工具。[中国水产科学，2008，15（3）：506-510]     

鱼类病毒性神经坏死病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其特性

利用RT-PCR技术获得病毒性神经坏死病毒0603株的衣壳蛋白基因,将其插入到杆状病毒Bac-To-Bac表达系统的pFastBacI质粒中,构建了pFastBac-cp质粒.转化DH10Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-cp,脂质体介导将其转染Sf9细胞产生有感染性的重组杆状病毒AcNPV-cp.利用AcNPV-cp感染Sf9细胞后,SDS-PAGE分析可见大小约为37 ku的特异性蛋白带,Western-blotting分析发现,其可以与病毒性神经坏死病毒阳性血清反应出现特异性的杂交带.试验结果表明,AcNPV-cp在Sf9细胞中成功地表达了病毒性神经坏死病毒的衣壳蛋白,其具有良好的免疫学活性.负染电镜观察发现,CP蛋白可自行装配成病毒样颗粒,其大小形态类似于病毒性神经坏死病毒.制备超薄切片后电镜观察发现,CP蛋白自行装配成的病毒样颗粒呈晶格状排列在细胞质中.为研制有效防控鱼类病毒性神经坏死病的新型颗粒性疫苗奠定了基础.     

杀鲑气单胞菌的实时定量PCR检测方法的建立和应用

选取杀鲑气单胞菌A层A蛋白(VapA)保守序列,利用Primer Express2.0软件设计引物和探针.以ATCC标准株10倍系列稀释,通过血球计数板计数后进行实时定量PCR,制作标准曲线.通过SDS软件获得细菌数量(X)与Ct值的关系为:Ct＝-3.1574lgX 43.6841(相关系数R2=0.992).实时定量PCR的检测限为6个细菌.建立的方法对杀鲑气单胞菌典型株和非典型株具有较好的特异性,与其他细菌没有交叉反应.杀鲑气单胞菌实时定量PCR方法的建立,对于快速口岸检疫、临床诊断和疫病监测具有重要的应用价值.