自然感染的新疆美利奴羊中绵羊慢病毒的分离鉴定

本文从自然感染绵羊慢病毒的绵羊的外周白细胞及组织中分离病毒，在接种后２代均出现细胞病变效应，将病毒培养液浓缩１００倍作为抗原进行琼扩检测呈阳性反应，病毒培养液经免疫电镜检测，观察到了病毒颗粒。病毒的半数感染量约为１０－５／ｍｌ，将分离到的３株ＯＰＰＶ分别命名为ＮＸＪ－５５，ＮＸＪ－７３，ＮＸＪ－０４８１。     

绵羊慢病毒北疆株自然感染新疆美利奴羊的研究

选１２只自然感染绵羊慢病毒的成年新疆美利奴羊，用琼脂凝胶免疫扩散试验连续检查血清中ＯｖＬＶ沉淀抗体，发现抗体应答的类型发生转换，即只出现对病毒核心蛋白抗原的抗体，出现对病毒包膜糖蛋白的抗体，同时出现对ｐ２５和ｐｇ１３５二者的抗体互相转换。从试验羊的多个器官中分离到３株ＯｖＬＶ，分别命名为ＯｖＬＶ ＮＸＪ－５５，ＮＸＪ－７３和ＮＸＪ－０４１８株，其ＴＣＩＤ５０／ｍＬ值诊次为１×１０＾－５．６，１×１     

我国部分地区ＮＤＶ的分子流行病学研究

本研究根据新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ基因编码区１－３７４位核苷酸序列计算其遗传距离并给出了ＮＤＶ的系统发育进化树，将６８株ＮＤＶ分为９个基因型（３０株为国内分离株），其中Ⅰ－Ⅵ是早已存在的老基因型，Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为新发现的基因型，特别是Ⅸ为我国特有的基因型（Ｆ４８ＥＯ、Ｍ３、ＨＬＪ－３、ＨeB-1P和ＮＭ－５）。１９９７－１９９９年我国云南、广西、甘肃、陕西、新疆等地分离的ＹＮ－１Ｐ、ＧＸ－３、Ｈ１、Ｈ２、Ｐ１、ＧＸ－１、ＧＸ－２、ＧＳ－３、ＳＨＸ－２、ＳＨＸ－３、ＳＨＸ－６、ＳＨＸ－７、ＸＪ－２和１９９１年分离的ＨuB-1均属于Ⅶ基因型，该基因型的病毒是９０年以来引起新城疫发生的主要病原。根据遗传距离和分离年代可将此基因型进一步划分为５个基因亚型，分别是Ⅶa、Ⅶb、Ⅶc、Ⅶd和Ⅶe。此外ＨuN-1/98、HLJ-4/95和ＨeH-1P属一个老的基因Ⅵ，１９７９－１９８５年分离自青海的ＱＨ－１、ＱＨ－２、ＱＨ－４属于一个新的基因型－Ⅷ型。可见在我国新城疫的流行是极其复杂的，既有老基因型的危害（Ⅰ－Ⅵ），又有新基因型（Ⅶ）的流行，更有我国独特Ⅷ和Ⅸ基因潜伏。     

新城疫病毒在鸡胚不同组织增殖的研究

不同新城疫病毒Ｆ４８Ｅ８、Ｎ－７９、Ｌａ Ｓｏｔａ和分离株Ｘ以１：１００００稀释接种９日龄ＳＰＦ鸡胚,每胚０．２ｍｌ,结果发现,Ｆ４８Ｅ８和分离株Ｘ毒力较强,可在５０小时左右致死鸡胚,Ｌａ Ｓｏｔａ和Ｎ－７９较弱,Ｆ４８Ｅ８和Ｘ株接种鸡胚的肌肉,肝脏,脑和尿囊液均有大量病毒存在,而Ｎ－７９和Ｌａ Ｓｏｔａ只在尿囊液中有大量病毒存在,胚体病毒极少。     

新城疫病毒在鸡胚不同组织增殖的研究

不同新城疫病毒Ｆ４８Ｅ８、Ｎ－７９、ＬａＳｏｔａ和分离株Ｘ以１∶１００００稀释接种９日龄ＳＰＦ鸡胚,每胚０．２ｍｌ,结果发现,Ｆ４８Ｅ８和分离株Ｘ毒力较强,可在５０小时左右致死鸡胚,ＬａＳｏｔａ和Ｎ－７９较弱。Ｆ４８Ｅ８和Ｘ株接种鸡胚的肌肉、肝脏、脑和尿囊液均有大量病毒存在,而Ｎ－７９和ＬａＳｏｔａ只在尿囊液中有大量病毒存在,胚体病毒极少。     

用PCR技术从一兔出血症病料扩增和检出2种病毒核酸

应用ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ技术,对兔出血症病毒核酸作了鉴定,分别设计合成２对ＰＣＲ扩增特异性引物,即按兔出血症病毒中国分离的ＮＪ核酸酸序列合成１对引物（ＮＪ引物）,按国分离的ＦＲＧ株核酸序列民另１对引物（ＦＲＧ引物）,进行ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ。     

鸡传染性贫血病毒的分离鉴定

本试验于１９９２年自东北某地疑似鸡传染性贫血鸡群得到一分离物，该发离物能抵抗７０℃５分钟处理，对氯仿不敏感，不凝集鸡，小白鼠，绵羊红细胞，可引起１日龄ＳＰＦ鸡发病，表现出传染性贫血的特征病变，分离物能被鸡传染性贫血病毒抗血清中和，能在ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞上适应增值并与参考毒ＧｉＦｕ－１，ＣＵＸ－１，ＴＫ５８０３在该细胞培养中产生一致的细胞病变，分离物与参考毒感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞用间接免疫     

禽流感病毒NP cDNA反义逆转录病毒载体的构建及重组病毒的鉴定

根据反义ＲＮＡ作用原理,以禽流感病毒（ＡＩＶ）Ｈ１４Ｎ５　ｃＤＮＡ全长及５’端２３５个ｂｐ为目的基因,反向插入反转录病毒载体 ｐＬＸＳＮ中,命名为 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ及 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ,用脂质体包裹重组质粒转染包装细胞 ＰＡ３１７,Ｇ４１８筛选抗性克性,扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒ＲＮＡ（ｖＲＮＡ）,以巢式ＰＣＲ方法检测,以及用包装细胞上清（重组病毒）感染滴定细胞系ＮＩＨ３Ｔ３,表明已筛选出产毒的的克隆细胞质,得到重组逆转录病毒,为反义ＲＮＡ抑制禽流感病毒复制的实验研究奠定了物质基础。     

雏鸡实验感染乙型脑炎和登革病毒的研究

用乙型脑炎（ＪＥ）和登革４型（ＤＥＮ４）病毒人工感染雏鸡,结果表明,雏鸡能产生１～４天的ＪＥ病毒血症和１～５天的ＤＥＮ４病毒血症;ＪＥ血凝抑制（ＨＩ）抗体和中和（ＮＴ）抗体于第６～８天产生,ＤＥＮ４的ＨＩ和ＮＴ抗体于第８～１０天产生,两种病毒的特异性抗体均于１６～２０天达到高峰。感染蚊虫叮咬,能将ＪＥ和ＤＥＮ４病毒传给雏鸡。实验证明,雏鸡对这两种病毒敏感。认为雏鸡在ＪＥ和ＤＥＮ病毒的保存和扩散中起一定作用。     

不同启动子对重组痘苗病毒表达狂犬病病毒糖蛋白基因的影响

以血凝素（ＨＡ）基因为侧翼，将狂犬病病毒糖蛋白基因ｃＤＮＡ置于不同类型的痘苗病毒复合启动子下游，构建了４种表达质粒。重组表达质粒转染已感染ＷＲ株痘苗病毒的ＢＨＫ２１细胞，并通过鸡红细胞吸附试验，筛选、纯化出与表达质粒对应的４组ＨＡ－重组痘苗病毒：ｖＳＦＪ１－１０ＲＶｇｐ，ｖＳＦＪ２－１６ＲＶｇｐ，ｖＲＪ１－１０ＲＶｇｐ，ｖＲＪ２－１０ＲＶｇｐ。经间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）鉴定，从４组重组病毒中每组各鉴定出１株阳性重组病毒。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测显示，重组病毒感染的ＢＨＫ２１细胞裂解物上清中有１种蛋白与抗ＲＶＧＰ的ＭｃＡｂ发生特异反应，分子量为６９０００。在重组病毒感染早期，ＲＶＧＰ的表达量以ｖＳＦＪ１－１０ＲＶｇｐ最高；而在感染晚期，则以ｖＳＦＪ２－１６ＲＶｇｐ最高。４株重组病毒免疫小鼠，均能够不同程度地诱导小鼠产生抗ＲＶＧＰ特异性抗体。     

用PCR技术从同一兔出血症病料扩增和检出2种病毒核酸

应用 Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 技术，对兔出血症病毒核酸作了鉴定。分别设计合成 ２ 对 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增特异性引物，即按兔出血症病毒中国分离的 Ｎ Ｊ株核酸序列合成 １ 对引物（ Ｎ Ｊ引物），按德国分离的 Ｆ Ｒ Ｇ 株核酸序列合成另 １ 对引物（ Ｆ Ｒ Ｇ 引物），进行 Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ。从纯化的病毒核酸样品和感染 Ｄ Ｊ Ｒ Ｋ 细胞的病毒核酸样品中，均扩增出 ２ 对引物范围内的特异性核酸片段， Ｎ Ｊ引物扩增产物为 ３６４ ｂｐ， Ｆ Ｒ Ｇ 引物扩增产物为 ５１３ｂｐ。模板用 Ｒ Ｎａｓｅ 消化后，仍出现 ３６４ ｂｐ 带，用 Ｄ Ｎａｓｅ Ｓ１ 消化，则此带消失；反之，用 Ｄ Ｎａｓｅ Ｓ１ 消化，出现５１３ ｂｐ 带，用 Ｒ Ｎａｓｅ 消化，则此带消失，证实前者模板为 Ｄ Ｎ Ａ，后者为 Ｒ Ｎ Ａ。 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交试验证实， Ｐ Ｃ Ｒ扩增出的核酸片段与各自的地高辛标记特异性探针发生强阳性杂交反应。由此认为，在兔出血症病毒感染中，同时存在着 ２ 种不同核酸型的病毒。     

绵羊肺腺瘤病毒内蒙古株的分离与观察

以内蒙古某羊场自然感染绵羊肺腺瘤病的病肺组织4例和3月龄绵羊胎肺2例作为材料，对胎肺细胞进行了原代培养并接种绵羊肺腺瘤病毒悬液，进行了绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的分离，同时采用电镜负染色技术和超薄切片透射电镜技术对上述样品进行了观察。结果表明，自然感染绵羊肺腺瘤病的4例病肺组织中都有散在的病毒粒子，其直径为100～125nm，接种病毒悬液的胎肺细胞从第2代到第9代均出现细胞病变，但对绵羊胎肺培养的病毒悬液电镜负染色观察未发现典型的病毒粒子，而超薄切片透射电镜观察发现了病毒样粒子。     

边界病和与其密切相关病毒实验感染猪和绵羊的比较研究

从断奶猪分离的一株瘟病毒能实验感染断奶猪，但不能引起明显的疾病症状。接种妊娠早期的猪和绵羊，该病毒和与其抗原性相似的绵羊边界病分离毒株均能引起猪和绵羊的先天性感染。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的高效表达

将鸡传染性支气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｖ） Ｓ１ 基因 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆至含有起始密码 Ａ Ｔ Ｇ 的转移载体 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４,构建成重组转移质粒 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４ Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ,再与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ Ｓ Ｖ Ｉ－ Ｇ Ｄ Ｎ Ａ（ Ｏ Ｃ Ｃ－ , ｇａｌ＋ ）共转染 草地夜蛾（ Ｓｆ９） 细胞, 经空斑纯化得 到已插入 Ｓ１ 基 因并能形成多角体 的重组病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 。以重组毒株感染 Ｔｎ５ Ｂ１ 细胞,在不同时间收取感染了病毒的细胞进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 与 Ｗ ｅｓｔｅｒｎ 印迹检测。 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 在感染的细胞中高效表达了 Ｓ１ 基因,表达产物为约 １００ ０００ 的融合蛋白,与预计的表达修饰后的产物大小相符,推测此蛋白已糖基化。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后 ４８、７２、９６ ｈ, Ｓ１ 蛋白分别占细胞内总蛋白量的 ２８７％ 、３５８％ 、３７１％ 。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的表达

将含有传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）广东地方分离株Ｄ４１的Ｓ１基因ｃＤＮＡ（从ＡＴＧ到Ｓ前体蛋白裂解位点）的片段克隆到具有多角体启动子（ＰＸＩＶ）和人工合成启动子（Ｐｓｙｎ）的杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸ－ＩＶＶＩ＋Ｘ３中，构建了重组转基因载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３－Ｓ１．Ｄ４１。用该重组转移质粒与无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－ＳＶＩ－ＧＤＮＡ（ｏｃｃ－，ｇａｌ＋）共转染草地夜蛾（Ｓｆ９）细胞，筛选并纯化出既能表达Ｓ１基因又能形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ＩＢＶＳ１－ｏｃｃ＋（ｏｃｃ＋，ｇａｌ－）。通过间接ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等方法在感染了重组病毒的Ｓｆ９细胞中成功地检测到分子量约６２０００的Ｓ１基因表达产物。虽然该重组Ｓ１糖蛋白可能由于Ｎ－糖基化不完全而分子量小于天然蛋白，但它可以像正常病毒粒子一样，被鸡抗ＩＢＶＤ４１株血清特异识别。     

H3亚型禽流感病毒分离株与变异株的生物学特性

本研究对分离到的Ｈ３Ｎ８禽流感病毒株（分离株Ａ／Ｃｈｉｃｋ／Ｊｉｌｉｎ／９８,以下简称Ｊ１株）和传代过程中发生变异的变异株（Ａ／Ｃｈｉｃｋ／Ｊｉｌｉｎ／９９,以下简称Ｊ２株）进行了生物学和病理学特性的初步研究,发现在相同的时间内,Ｊ１株病毒致死鸡胚数量明显高于Ｊ２株病毒,病毒ＨＡ的滴度也明显高于Ｊ２;Ｊ１株的ＩＰＶＩ为１．４４,而Ｊ２为０．６４;毒株的致病性试验与ＳＰＦ感染鸡的器官变化表明Ｊ１组的病理学变化较Ｊ２组明显,且主要的嗜器官为肺、肝、法氏囊、胸腺、脾等主要的免疫器官;本研究还对ＳＰＦ感染鸡的病变器官进行了病原学检测、病理组织检测和电镜观察。结果表明两者存在较明显的差异。     

绵羊进行性肺炎病对山羊的感染试验

绵羊进行性肺炎病毒（ＯＰＰＶ）感染山羊可生产琼扩抗体，用ＯＰＰ抗体阳性山羊的肺脏、肝脏分离物在绵羊胎肺细胞上连续培养传代。可出现以多核巨细胞为特征为细胞病变。用其培养物制备的琼扩抗原与抗ＯＰＰＶ标准阳性血清呈阳性反应，与抗马传贫病毒、牛白血病病毒标准阳性血清无交叉反应，电镜观察，病毒粒子大多散在细胞外及胞浆空胞中，以出芽方式增殖，病毒呈球多，直径８０～１２０ｎｍ，用ＯＰＰＶ感染山羊的肝脏分离培养物     

狂犬病 犬肠炎 犬瘟热 犬腺病毒病犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究

从国外引进的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＰＶ）、犬腺病毒－２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒病毒（ＣＰＩＶ）四联弱毒样品中，分离筛选出增殖性良好的ＣＰＶ０ＸＮ１，ＣＡＶ２－ＸＮ３和ＣＰＩＶ－ＸＮ４株。另外还通过离体异种细胞交叉传代，获得的ＣＤＶ－ＸＮ１１１２弱毒株；从狂犬病毒株疫苗样品中筛选出ＥＲＡ８３６株。经试验证明这５株病毒在５代以内可作为制苗用种毒。采用静置和旋转培养法高滴度扩增这５株弱     

从感染细胞的胞核和胞浆分离鉴定出2种核酸型的兔出血症病毒

以南京（ＮＪ）株的成都（ＣＤ）株兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）人工感染家兔,取病死兔肝组织制成组织匀浆,用１％ＮＰ－４０处理,离心将核质粗分后,将离心洗涤的细胞核心及超声波裂解。上清和胞核匀浆分别经氯仿处理,ＰＥＧ沉淀和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析获得纯化病毒,血凝检测表明,不同毒株胞浆和胞核病毒的比例有显著差异,ＮＪ株胞核病毒占优势,ＣＤ株则相反。自胞浆和胞浆病毒样品中分别提核酸,经电泳,ＤＮａｓｅＩ     

雏鸡实验感染乙型脑炎和登革病毒的研究

用乙型脑炎（ＪＥ）和登革４型（ＤＥＮ４）病毒人工感染雏鸡，结果表明，雏鸡能产生１～４天的ＪＥ病毒血症和１～５天的ＤＥＮ４病毒血症，ＪＥ血凝抑制（ＨＩ）抗体和中和（ＮＴ）抗体第６～８天产生，ＤＥＮ４的ＨＩ和ＮＴ抗体于第８～１０天产生，两种病毒的特异性抗体均于１６～２０天达到高峰，感染蚊虫叮咬，能将ＪＥ和ＤＥＮ４病毒传给雏鸡，实验证明，雏鸡这两种病毒敏感，认为雏鸡在ＪＥ和ＤＥＮ病毒的保存和扩散中起一定