猪化脓隐秘杆菌的分离鉴定

<正>化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)常引起牛、羊、猪等动物的化脓性感染,主要表现为肺炎、关节炎、心内膜炎、乳腺炎、皮下脓肿等〔1〕,给养殖业带来较大的经济损失。化脓隐秘杆菌以前被称为化脓棒状杆菌、化脓放线菌,1997年Pascual Ramos等〔2〕将该菌从放线杆菌属中重新分类为隐秘杆菌属。化脓隐秘杆菌是隐秘杆菌属中致病力最强的病原体,是经济型家畜(牛、羊和猪)的一种     

某猪场支气管败血波氏杆菌和化脓隐秘杆菌混合感染的病原分离鉴定及药敏试验

支气管败血波氏杆菌是引起猪萎缩性鼻炎的病原之一,化脓隐秘杆菌是一种感染牛、羊、猪等动物的机会致病菌。国内目前没有关于二者混合感染猪的报道。本研究从陕西省某猪场发病仔猪肺脏中分离出两株病原菌,经染色镜检、生化试验和16S rDNA测序鉴定,确定病原菌为支气管败血波氏杆菌和化脓隐秘杆菌。采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,发现两株分离菌同时对卡那霉素、庆大霉素和头孢哌酮高度敏感。本研究为猪支气管败血波氏杆菌和化脓隐秘杆菌混合感染的诊断与防治提供了参考。     

化脓隐秘杆菌的特性及化脓隐秘杆菌病的防治

化脓隐秘杆菌原称化脓棒状杆菌（Corynebacterium pyogenes）、化脓放线菌（Actinomyces pyogenes）,1997年定名为化脓隐秘杆菌（Arcanobacterium pyogenes）。该菌是隐秘杆菌属中毒力最强的病原体,是经济型家畜（牛、羊和猪）的一种条件性致病菌,也是这些动物黏膜上的一种共生体,大部分寄居在健康动物的乳房、泌尿生殖道、呼吸道和胃肠道黏膜。     

牛源化脓隐秘杆菌的分离鉴定与黔中金荞麦体外抑菌试验

为分离致病性牛源化脓隐秘杆菌并探究黔中金荞麦对该菌的体外抑制作用,本试验对采集于贵州省凯里市某养殖场疑似患牛呼吸道综合征的病死牛肺组织进行细菌分离、形态学观察、生理生化鉴定、分子生物学鉴定、药敏试验和致病性试验,并运用打孔法探究黔中金荞麦提取物对分离菌株的体外抑制效果。结果显示,分离菌株为革兰阳性短棒状杆菌,结合生理生化和PCR鉴定结果,确定该菌为化脓隐秘杆菌,系统进化树分析也显示,分离菌株与化脓隐秘杆菌的模式菌株处于同一分支;该分离菌株可致10只小鼠于24 h内全部死亡;其对头孢他啶、利福平、青霉素等7种抗菌药敏感,对环丙沙星中介,对克林霉素、左氧氟沙星、庆大霉素等8种抗菌药耐药;黔中金荞麦不同组织部位、不同处理方法的提取物对该分离菌株均具有一定抑制效果,其中地下部分70%乙醇超声30 min提取物的抑菌效果最好,抑菌圈直径为(28.13±0.25) mm,与头孢喹肟的抑菌效果相当。本试验首次从贵州地区分离到致病性牛源化脓隐秘杆菌,黔中金荞麦对该菌具有良好的体外抑制效果。本试验结果可为该肉牛养殖场疫病防控以及牛化脓隐秘杆菌感染的治疗和预防提供参考依据。     

牛源化脓性隐秘杆菌的分离及鉴定

本研究通过对广西南宁某养殖场送检的病死牛病料进行细菌的分离、形态学观察、致病性试验、药敏试验以及用化脓隐秘杆菌特异性引物对分离株靶基因PLO进行PCR鉴定分析。结果分离到1株革兰氏阳性杆菌并能使5只小白鼠全部致死,且该菌对头孢噻呋等9种药物敏感;对红霉素等5种药物不敏感。该菌经PCR鉴定结果为化脓隐秘杆菌(GX-NN-170425)且其PLO基因与其他10株化脓隐秘杆菌参考株的核苷酸同源性为97.7%(Arcanobacterium pyogenes株)~99.9%(SP4株),进化树分析显示该分离株与其他10株化脓隐秘杆菌参考株都处在同一分支上。     

一例牛魏氏梭菌和化脓隐秘杆菌混合感染的实验室诊断

2019年8月,在黑龙江省黑河市嫩江某一牛场中出现了大批牛死亡现象,其病死牛主要表现为气性坏疽、化脓感染,并且全身实质器官有明显出血等特征。经统计发病率为30%,病死率为90%。结合流行病学资料分析临床症状、病理变化和实验室诊断,病料为剖检后当日死亡且病理变化明显的病死牛,确诊为牛魏氏梭菌和牛化脓隐秘杆菌引起的混合感染。在对分离出的细菌进行药敏试验时发现,产生耐药性的药物有恩诺沙星、硫酸庆大霉素、盐酸林可霉素、链霉素。     

化脓隐秘杆菌病牛肺脏中Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达

为了研究化脓隐秘杆菌致牛肺脏细胞凋亡途径,试验对自然感染奶牛肺脏和阴性对照牛肺脏进行取样,并制作病理组织切片和进行苏木素伊红染色,观察肺脏的病理组织学变化;同时采用免疫组织化学的方法检测肺脏中Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白的表达情况。结果表明:化脓隐秘杆菌可以引起牛肺脏发生化脓和坏死;与阴性对照牛肺脏相比,奶牛化脓隐秘杆菌病肺脏的Caspase-9和Caspase-3蛋白表达差异显著(P0.05),Caspase-8蛋白表达差异不显著(P0.05)。说明化脓隐秘杆菌能够引起奶牛肺脏化脓、肺脏细胞坏死和凋亡,并且以线粒体信号途径介导的凋亡途径占主导。     

化脓隐秘杆菌毒力因子的研究进展

化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)又名化脓放线菌或化脓棒状杆菌,为革兰染色阳性的短棒状杆菌,普遍存在于牛、羊、猪和其他重要经济动物的黏膜上[1],是一种条件性致病菌.化脓隐秘杆菌可在家畜间广泛传播,导致广泛多样的皮肤、内脏器官和关节的非特异性化脓性感染,如急性化脓性乳房炎、慢性脓肿性乳房炎、关节炎、心内膜炎、肝脓肿、子宫炎以及流产和不孕等,给养殖业带来较大的经济损失.     

牛支原体、巴氏杆菌A型和化脓隐秘杆菌多重PCR快速检测方法的建立

本试验旨在建立一种可同时鉴别牛支原体、巴氏杆菌A型和化脓隐秘杆菌的多重PCR方法。分别针对多杀性巴氏杆菌A型特异的hyac-hvaD基因区段、化脓隐秘杆菌的16SrRNA基因上保守区段和牛支原体的UvrC基因设计特异性引物,多重PCR的最佳扩增条件确定为：95℃ 10min预变性;95℃ 1min,56℃ 50s,72℃ 1min,循环30次;72℃ 210min延伸。结果表明,该多重PCR方法可同时扩增出以上三种致病菌的特异性片段,不能扩增出其他病原菌的相关片段;对多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和牛支原体的最低检测浓度分别为8×10^5CFU／mL、8×10^5CFU／mL和4×10^6CFU／mL。同时用该方法检测了牛支原体肺炎患牛的鼻拭子与肺组织,发现12h预增菌后,肺组织检测与牛支原体培养的阳性符合率为92％。对临床样本进行牛支原体分离培养需要3-4d时间,而采用多重PCR方法检测12h预增菌则能在24h内出结果。该多重PCR方法显著加快了临床诊断速度,具有推广应用价值。     

产后健康和子宫炎奶牛子宫中化脓隐秘杆菌分离鉴定

为了调查产后3周内健康和子宫炎奶牛子宫中细菌分离情况,尤其是化脓隐秘杆菌及其毒力基因的分布情况。本试验采集了产后3周内15头健康奶牛和11头患子宫炎奶牛的子宫分泌物进行细菌分离鉴定,并对分离到的化脓隐秘杆菌进行毒力基因的检测。结果表明,大肠杆菌、化脓隐秘杆菌、芽孢杆菌是产后3周内子宫分泌物最常分离培养的细菌;从15头健康奶牛和11头患病奶牛的子宫分泌物中分离到17株化脓隐秘杆菌,所有菌株均携带plo基因和fimA基因;携带多种毒力基因的化脓隐秘杆菌在健康和子宫炎奶牛中均可以分离到。本试验为进一步研究化脓隐秘杆菌对子宫内膜的致病机理提供参考依据。     

浅谈化脓隐秘杆菌的研究进展

正化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes),曾被称为化脓放线菌、化脓棒状菌,1997年重新被归类为化脓隐秘杆菌属~[1]。化脓隐秘杆菌为无芽孢、无荚膜、无鞭毛、不运动、兼性厌氧、多形性的革兰阳性菌~[2]。它对生长条件要求不高,但需在富含血液或血清的培养基中培养。化脓隐秘杆菌的生化特性是可发酵葡萄糖、麦芽糖、山梨醇,不发酵蔗糖、山梨醇、鼠李糖~[1]。化脓隐秘杆菌是一种重要的条件致病菌,其作为皮肤和黏膜生物菌群的一部分,常寄居在     

肉牛牛支原体肺炎感染的细菌学研究

[目的]牛支原体肺炎是严重危害国内外肉牛养殖业的一种重要疾病,病原混合感染将加剧病情,增加临床治疗难度。本研究通过阐明我国牛支原体肺炎混合感染情况,为探讨更加有效的防控手段提供参考依据。[方法]近4年来采用门诊和出诊的方式,收集了全国范围内35个临床初诊为牛支原体肺炎的牛场病牛样本,进行牛支原体及混合感染细菌的分离和分型鉴定。[结果]确定了这类疾病的细菌学感染特征,表现为牛支原体感染占绝对优势,混合感染模式主要以牛支原体合并多杀性巴氏杆菌A型感染、牛支原体合并和化脓隐秘杆菌感染为主。[结论]经实验室检测证实临床初诊病例绝大部分为牛支原体肺炎,但混合感染很普遍。     

木犀草素联合庆大霉素对耐药化脓隐秘杆菌抑制作用的研究

为探究木犀草素联合庆大霉素对耐药化脓隐秘杆菌的抑制作用,采用微量肉汤稀释法分别测定木犀草素和庆大霉素对34株化脓隐秘杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。选取对庆大霉素耐药的化脓隐秘杆菌,通过棋盘法测定两种药物联合抑菌效果。经亚抑菌浓度木犀草素作用耐药菌株,比较木犀草素作用前后化脓隐秘杆菌对庆大霉素的耐药性变化情况。结果表明,木犀草素对化脓隐秘杆菌的MIC值为39~156μg/m L,与庆大霉素联合的作用为不相关;耐药菌经亚抑菌浓度木犀草素(1/4MIC)作用36 h后,庆大霉素对耐药菌的MIC值下降2~32倍,且原菌株耐药水平越高,MIC下降倍数越高。提示木犀草素具有良好抗菌活性,且能够逆转化脓隐秘杆菌耐药性。     

15种中草药对化脓隐秘杆菌的药敏试验及神经氨酸酶活性的影响

为了测定不同中草药对化脓隐秘杆菌分离株的药敏试验及神经氨酸酶活性的影响,试验采用煎煮法提取连翘、金银花、穿心莲、蒲公英、苍术、红花、黄连、虎杖、黄芩、蛇莓、乌梅、大青叶、杜仲、大黄和贯众等15种中草药的有效成分,测定其对化脓隐秘杆菌分离株的最低抑菌浓度(MIC),同时以2’-(4-methylumbelliferyl)-α-D-N-acetylneuraminic acid(MUNANA)为底物测定不同中草药提取液在亚抑菌浓度下对化脓隐秘杆菌神经氨酸酶活性的影响。结果表明:连翘、蒲公英、黄连、黄芩、乌梅、大黄具有良好的抗化脓隐秘杆菌活性,其中黄连作用效果最好,对4株化脓隐秘杆菌的MIC值均为0.25 mg/mL;连翘、蒲公英、黄芩、乌梅和大黄对4株化脓隐秘杆菌的MIC值在1.95~31.25 mg/mL之间;对苯唑西林耐药的化脓隐秘杆菌分离株对上述6种中草药依然敏感;另外,红花和大黄两种中草药以亚抑菌浓度作用化脓隐秘杆菌后,其神经氨酸酶活性集中在30~50个荧光单位之间;连翘、黄连、乌梅和贯众等中草药作用化脓隐秘杆菌后,其神经氨酸酶活性集中在50~100个荧光单位之间。说明连翘、蒲公英、黄连、黄芩、乌梅、大黄对化脓隐秘杆菌分离株具有显著抑制作用。     

化脓隐秘杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

本试验旨在建立检测化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes,A.pyogenes)特异、灵敏的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank公布的化脓隐秘杆菌溶血素(pyolysin,PLO)基因高保守序列,设计特异性引物和探针建立检测体系,用于化脓隐秘杆菌的快速检测,并对该方法的特异性和灵敏度进行检测。结果显示,本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法仅对化脓隐秘杆菌的检测结果为阳性;该方法最低检测DNA浓度为77.6 fg,最低检测细菌浓度为63 CFU/mL。采用本研究建立的方法检测23份林麝临床病例样品,共鉴定出16株化脓隐秘杆菌,与API Coryne生化鉴定方法的结果相同。本研究为化脓隐秘杆菌的检测提供了一种灵敏、特异、快速的检测方法,其可用于化脓隐秘杆菌的诊断和流行病学调查。     

奶牛子宫内膜炎化脓隐秘杆菌16SrRNA基因的鉴定与分析

对内蒙古呼和浩特地区奶牛子宫内膜炎化脓隐秘杆菌进行了分离鉴定.经生化实验鉴定的化脓隐秘杆菌利用PCR技术扩增其16S rRNA基因,得到1.5 kb目的片段;将目的片段与T载体连接,测定目的片段的基因序列,与GenBank公布的化脓隐秘杆菌16S rRNA基因序列进行比较分析,其同源率为93%～100%.本试验共分离到化脓隐秘杆菌32株.     

犊牛化脓隐秘杆菌性肺炎的病原鉴定

2007年11月,黑龙江省某农场肉牛爆发传染病,以犊牛化脓性肺炎为特征,平均发病率达58%,死亡及淘汰率达9.3%。从病死牛内脏器官分离到一种具有多形性的革兰氏阳性杆菌,把分离的菌株接种小白鼠证明具有较强的致病性,经生物学特性鉴定,以及应用PCR方法获得16S rRNA基因并进行克隆测序分析,结果证明分离的细菌是化脓隐秘杆菌。药敏试验结果表明该细菌对阿奇霉素、红霉素和四环素等药物高度敏感,应用敏感药物通过气管内注射的方式使疫情得到有效控制。     

猪化脓隐秘杆菌的分离及鉴定

化脓隐秘杆菌根据16SrRNA基因序列分析结果,将其归入隐秘杆菌属,主要存在动物的黏膜上,是一种条件致病菌,可引起各种非特异性化脓性感染,部分临床症状与副猪嗜血杆菌相似;一起疑似副猪的检测过程中分离到一株优势菌株,经形态学、生化、16SrRNA鉴定、同源性比对和临床症状确定为化脓隐秘杆菌;药敏试验结果为病原菌对头孢噻呋钠、杆菌肽、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星、恩诺沙星高度敏感,对所选其余药物不敏感。     

牛呼吸道感染细菌病原的致病机理与防控研究进展

牛呼吸道疾病综合征(BRDC)是一种急性呼吸道疾病,其主要细菌性病原有多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌和昏睡嗜血杆菌,常见于断奶、运输等应激后牛群。该病呈世界性分布,可经呼吸道感染,严重影响肉牛及泌乳牛的品质,给养牛业造成巨大的经济损失。国内关于BRDC的研究仍比较匮乏,且尚无可预防BRDC细菌性病原的疫苗,为更好地防控BRDC,现就国内外BRDC细菌性病原的致病机理和防控研究进展做一综述。     

猪化脓放线菌的分离与鉴定

化脓放线菌(Actinomyces pyogenes)为放线菌属(Actinomyces Harz 1877)的细菌，该菌亦曾被称为化脓棒杆菌(Corynebacterium pyogenes)，现已归为隐秘杆菌属(Arcanobacterium，Collins el al．1983)其名为化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)。该菌最早(1893)从牛的脓汁中分得，常见于牛、羊、猪的化脓性病灶，表现为肺炎、关节炎、心内膜炎、乳腺炎、皮下脓肿等。近年来，随着规模化养猪业的发展，猪的腿部疾病越来越常见，病因及病