Nupr1 mRNA在小鼠早期妊娠子宫中的表达

试验旨在研究核蛋白1(nuclear protein 1,Nupr1)mRNA在小鼠早期妊娠子宫中的表达,探讨Nupr1与小鼠胚胎着床的相关性。通过建立小鼠早期妊娠模型、假孕妊娠模型、延迟着床及激活模型、人工蜕膜化模型和激素处理模型,采用原位杂交的方法检测Nupr1mRNA在小鼠各种模型子宫组织中的定位表达情况,并应用实时荧光定量PCR法检测早期妊娠模型和假孕妊娠模型中Nupr1mRNA的相对表达量。结果显示,Nupr1mRNA在小鼠早期妊娠第1~4天子宫的腔上皮和腺上皮表达,第5~8天表达于蜕膜区域;假孕妊娠第1~5天,Nupr1mRNA主要表达于小鼠子宫腔上皮和腺上皮;延迟着床模型中信号表达于在小鼠子宫的腔上皮和腺上皮,与正常妊娠第4天结果相似;延迟激活模型中信号表达于蜕膜区,与早期妊娠第5天表达结果相似;人工蜕膜化模型中信号表达于蜕膜区,而蜕膜对照组中信号表达于腔上皮和腺上皮;17β-雌二醇(oestrogen,E2)处理组信号表达于腔上皮和腺上皮,信号增强,孕酮(progesterone,P4)和E2共同处理表达无明显变化;实时荧光定量PCR结果显示,正常妊娠第2天Nupr1mRNA相对表达量较高,假孕妊娠第2天Nupr1mRNA相对表达量也较高。本研究结果表明,Nupr1mRNA在小鼠子宫中的表达与小鼠早期妊娠过程相关,Nupr1mRNA在腔上皮和腺上皮的表达可能受激素调节,在子宫基质中的表达与蜕膜化及活化胚泡相关。     

甘氨酰tRNA合成酶在小鼠围着床期子宫及蜕膜化过程的时空特异性表达

核编码的甘氨酰-tRNA合成酶(Glycyl-tRNA Synthetase, GlyRS)是细胞质和线粒体蛋白质翻译所必需的,GlyRS除了在蛋白翻译中的作用外,它还参与基因转录、炎症和细胞增殖等其他生物学过程。本研究从mRNA水平和蛋白水平检测了GlyRS在小鼠早期妊娠1～8 d模型、人工诱导蜕膜化模型和体外诱导人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中的表达规律。结果表明:GlyRS mRNA和蛋白在小鼠早期妊娠1～4 d的腔上皮和腺上皮中表达,在小鼠早期妊娠5～8 d主要在胚胎和蜕膜区表达;随着蜕膜化程度增加,表达量逐渐增加;在人工诱导蜕膜化模型中,诱导组GlyRS mRNA和蛋白表达情况类似,表达量均明显高于对照组。在体外诱导的人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中,诱导组GlyRS mRNA表达量随着诱导天数的增加而增加,均显著高于对照组。以上结果表明GlyRS参与小鼠早期妊娠及子宫蜕膜化的过程。     

膜联蛋白A8在小鼠早期妊娠子宫中表达研究

膜联蛋白A8(Annexin A8,ANXA8)是一种磷脂结合蛋白,与炎症反应、癌症的发生以及血管生成有密切联系。本实验旨在利用实时荧光定量PCR、原位杂交与免疫组织化学的方法研究ANXA8 mRNA与蛋白在小鼠早期妊娠和人工蜕膜子宫中的表达。原位杂交结果表明:ANXA8 mRNA在小鼠早期妊娠第1～4天子宫腔上皮和腺上皮有微弱表达,ANXA8 mRNA在妊娠第5、6天的初级蜕膜区与第7、8天的次级蜕膜区表达,并随妊娠进行逐渐增强;人工蜕膜化模型中ANXA8 mRNA表达在蜕膜区。实时荧光定量PCR证明:ANXA8 mRNA的表达量在早期妊娠模型中的第7、8天显著提高,人工蜕膜侧子宫与对照侧相比也显著提高。免疫组织化学结果表明:ANXA8蛋白与ANXA8 mRNA表达规律相似。体外分离培养小鼠子宫基质细胞,并诱导蜕膜化,实时荧光定量PCR结果表明ANXA8随着基质细胞的蜕膜化表达升高。以上体内和体外实验表明,ANXA8在小鼠子宫中的表达具有着床相关特异性,ANXA8参与小鼠子宫蜕膜化过程。     

SerpinB6b在大鼠着床期子宫及蜕膜的表达与调控

SerpinB6b是丝氨酸蛋白酶抑制剂亚家族B成员之一。本实验旨在利用荧光定量PCR、原位杂交、免疫组织化学与蛋白质印迹分析等实验技术,研究SerpinB6b mRNA和蛋白在大鼠早期妊娠1~9 d、人工诱导蜕膜化及体外诱导蜕膜化模型子宫中的表达规律。结果显示:SerpinB6b mRNA和蛋白在大鼠早期妊娠1~5 d腔上皮、腺上皮有微弱表达;在6~9 d,表达主要集中在胚胎和蜕膜区,且随蜕膜化程度增加,表达量逐渐增强,且在第8天达到最高;在大鼠人工诱导蜕膜化模型中,SerpinB6b在蜕膜区的表达均显著高于非蜕膜区;在大鼠子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化模型中,SerpinB6b随着诱导蜕膜化天数的增加呈上升趋势。以上体内和体外实验结果表明,SerpinB6b在大鼠子宫中的表达具有着床相关特异性,SerpinB6b参与大鼠子宫蜕膜化过程。     

Dnm1l mRNA在小鼠早期妊娠子宫中的表达研究

为了研究Dnm1l mRNA在小鼠胚胎着床过程中的表达,试验采用原位杂交方法检测早期妊娠、假孕、人工蜕膜化、延迟着床及激活等小鼠模型中Dnm1l mRNA的表达,并应用Real-time PCR检测早期妊娠模型中Dnm1l mRNA的相对表达量。结果表明:Dnm1l mRNA在小鼠早期妊娠的子宫中呈现时空特异性表达,Real-time PCR检测表达的整体趋势变化与原位杂交试验中观测到的结果基本一致。说明Dnm1l mRNA与小鼠早期妊娠过程相关,其表达可能受到着床胚泡的调节。     

早期妊娠、发情周期及假孕小鼠子宫与荆豆素-Ⅰ的结合特性及激素调节

应用免疫荧光技术以生物素化的荆豆素-Ⅰ(UEA -Ⅰ)为探针,检测其结合位点α-L-岩藻糖在小鼠妊娠1～8 d、假孕1～6 d及发情周期子宫中的表达情况,并以摘除卵巢的小鼠为模型观察雌激素、孕酮对小鼠子宫α-L-岩藻糖表达的影响.结果,UEA-Ⅰ的结合位点主要位于妊娠1～4 d的子宫腔上皮及腺上皮中.在假孕小鼠,UEA-Ⅰ的结合位点主要位于假孕1～2 d的子宫腔上皮及腺上皮中,假孕3～4 d时在这些部位的结合逐渐减少或消失.另外,在发情周期各期的子宫腔上皮和腺上皮中也发现很多UEA-Ⅰ的结合部位,在发情期明显增多,当用雌激素处理时在这些部位的结合明显增加.这些表明,UEA-Ⅰ在子宫腔上皮和腺上皮上的结合位点可能与胚胎的存在与否无关, 而是受母体雌激素的调节.但胚胎着床后UEA-Ⅰ的结合位点消失,以后又在初级蜕膜中出现,表明UEA-Ⅰ的结合位点可能与胚胎着床后的蜕膜化反应有关.     

早期妊娠、发情周期及假孕小鼠子宫与荆豆素—I的结合特性及激素调节

应用免疫荧光技术以生物素化的荆豆素-I（UEA-I）为探针，检测其结合位点a-L岩藻糖在小鼠妊振1～8d、假孕1～6d及发情周期子宫中的表达情况，并以摘除卵巢的小鼠为模型观察雌激素、孕酮对小鼠子宫a-L-岩藻糖表达的影响。结果，UEA-I的结合位点主要位于妊娠1～4d的子宫腔上及腺上皮中。在假孕小鼠，UEA-I的结合位点主要位于假孕1～2d的子宫腔上皮及腺上皮中，假孕3～4d时在这些部位的结合逐渐减少或消失。另外，在发情周期各期的子宫腔上皮和腺上皮中也发现很多UEA-I的结合部位，在发情期明显增多，当用雌激素处理时在这些部位的结合明显增加，这些表明，UEA-I在子宫腔上皮和腺上皮上的结合位点可能与胚胎的存在与否无关，而是受母体雌激素的调节。但胚胎着床后UEA-I的结合位点消失，以后又在初级蜕膜中出现，表明UEA-I的结合位点可能与胚胎着床后的蜕膜化反应有关。     

交感神经对妊娠早期大鼠子宫内PCNA表达的影响

为研究妊娠早期子宫内交感神经对PCNA的调控效应,选取180~200日龄健康的性成熟Wistar雌性大鼠36只,随机分为对照组和处理组,处理组采用静脉注射6-OHDA损毁交感神经。采用免疫组化法和qRT-PCR法,观察和分析交感神经对妊娠早期大鼠子宫内膜组织学结构以及PCNA分布的影响。结果表明,PCNA阳性物质主要分布在固有层浅层的蜕膜细胞及肌层的外纵肌细胞核内存在。损毁交感神经后,子宫腺较正常的妊娠状态减少,腺上皮变薄,PCNA免疫阳性细胞减少,子宫内膜的蜕膜细胞及平滑肌细胞等的PCNA发生异常表达,特别是着床前的妊娠第4天(处理组)大鼠子宫腺数量减少,但腺上皮内PCNA免疫阳性细胞增强,子宫正常的组织学微环境被打乱,导致囊胚不能与子宫建立联系,出现着床数下降而排卵数基本正常的状况。免疫组化观察和mRNA相对表达量的统计分析均显示损毁支配子宫的交感神经后,导致子宫组织的蜕膜细胞及平滑肌细胞等的PCNA发生异常表达,打破了正常生理状态下子宫内膜发育与胚泡发育的同步性,影响妊娠早期的胚泡着床。     

精子膜抗原SA-30免疫对小鼠子宫内肥大细胞的影响

用牛精子膜抗原SA 30免疫雌性昆明系小鼠 ,取小鼠子宫做常规石蜡切片 ,甲苯胺蓝染色检测子宫内的肥大细胞。结果表明 ,所有肥大细胞均位于子宫肌层 ,间情期时 ,SA 30免疫组和对照组子宫内肥大细胞在数量上无明显差别 (P >0 0 5 ) ;而妊娠第 3天的小鼠子宫中 ,SA 30免疫后肥大细胞显著增多 (P <0 0 5 )。提示SA 30免疫可能诱导妊娠早期小鼠子宫内的细胞免疫反应 ,从而导致生育力的下降。     

延后着床对小鼠妊娠的影响

哺乳动物的胚胎植入都存在着一个短暂的植入窗口期,这个窗口期阻碍了辅助生殖技术的应用。通过以小鼠为研究对象,利用胚胎移植技术研究了延后着床对妊娠的影响。结果显示,小鼠的胚胎在延后1d(即第5天)也能着床并能诱导蜕膜化的发生,而延后2d则不能移植。与正常组(第4天移植)相比,延后着床组的胚胎吸收率明显增加、窝产仔数明显减少及妊娠期延长。试验结果表明,小鼠胚胎超出子宫植入窗口期亦可着床,但会导致植入间隙和胎盘发育异常进而影响妊娠结果。     

Hmgn3和Hoxa10对小鼠子宫基质细胞蜕膜化过程中Foxo1表达的调控

利用小鼠子宫基质细胞体外诱导蜕膜化模型转染Hmgn3或Hoxa10过表达载体及siRNA片段,通过荧光定量PCR方法检测Hmgn3和Hoxa10对Foxo1表达的调控。结果显示:转染Hmgn3或Hoxa10过表达载体可促进Foxo1在子宫基质细胞蜕膜化过程中的表达,而转染Hmgn3或Hoxa10siRNA则可抑制Foxo1的表达。在小鼠子宫基质细胞中转染Hmgn3或Hoxa10siRNA后再添加孕酮,Foxo1的表达显著下降。同样,干扰Hmgn3或Hoxa10也可减低cAMP对Foxo1表达的调控。结果表明:Hmgn3和Hoxa10可通过Foxo1来影响小鼠子宫基质细胞的蜕膜化,孕酮和cAMP可通过Hmgn3和Hoxa10来调控Foxo1在子宫基质细胞中的表达。     

BDNF与TrkB蛋白在小鼠子宫和着床前胚胎中表达规律的研究

为了研究BDNF与TrkB蛋白在小鼠发情周期和妊娠早期子宫、输卵管及着床前胚胎中的表达规律,试验采用免疫组织化学方法检测BDNF与TrkB蛋白在子宫和输卵管中的表达,采用免疫荧光技术检测着床前不同发育阶段胚胎中蛋白的表达,并利用图像分析软件对两种蛋白在着床前胚胎中的表达强度进行定量分析。结果表明:BDNF与TrkB蛋白在发情周期及妊娠3.5天和4天子宫腔上皮、子宫腺上皮和血管内皮细胞中表达,在发情周期子宫内膜固有层基质细胞中不表达,但在妊娠3.5天和4天子宫蜕膜细胞中表达,发情前期、发情期和发情后期BDNF蛋白的表达强度高于发情间期;BDNF与TrkB蛋白在妊娠2天输卵管黏膜上皮和血管内皮细胞中表达;两种蛋白在着床前胚胎各发育阶段都有表达,在囊胚期达到最高水平。说明BDNF和TrkB蛋白通过旁分泌或自分泌途径对子宫、输卵管尤其是着床前胚胎发育发挥调控作用。     

褪黑素受体在牦牛子宫中的表达分析

为探究褪黑素受体（MTNR）在牦牛子宫中的定位及表达与妊娠的关系,本研究利用免疫组织化学技术（S-P法）分别检测未妊娠、妊娠25~45 d、妊娠50~85 d、妊娠90~110 d牦牛子宫中MTNR的表达情况。结果表明：MTNR免疫阳性产物在牦牛子宫腺上皮细胞、腔上皮细胞、基质细胞、血管平滑肌细胞、血管内皮细胞、肌层平滑肌细胞均有表达;不同妊娠阶段牦牛子宫中的基质细胞和肌层平滑肌细胞中均有MTNR的表达,但其差异性不显著（P〉0.05）;血管内皮细胞和血管平滑肌细胞中的MTNR表达强度随着妊娠阶段时间的增加且差异性显著（P〈0.05）;腺上皮细胞中的MTNR在妊娠后期表达强度增加且差异极显著（P〈0.01）;腔上皮细胞的MTNR在妊娠后期表达强度降低（P〈0.01）。     

妊娠过程中子宫内膜蜕膜化机制

经过40余年的发展，人工辅助生殖技术得到了广泛的应用，为数以百万计的家庭带来了福音。然而这些技术仍然存在许多挑战，如相对较低的妊娠成功率及体外受精-胚胎移植技术所生婴儿的健康风险高于自然受孕婴儿等。因此，需要进一步分析相关生理基础和技术程序。接受辅助生殖的女性妊娠失败主要发生在妊娠早期，对胚胎着床和子宫蜕膜化两大关键事件机制的探索就显得尤为重要。人子宫蜕膜化涉及到子宫内膜间质细胞剧烈的形态与功能的分化，对于妊娠成功至关重要。对人类而言，cAMP和孕激素信号是启动子宫蜕膜化的关键。文章总结了近年来蜕膜化中几个重大事件的研究结果，包括蜕膜化的启动、内膜基质细胞的改变、子宫腺分泌的增加及子宫自然杀伤细胞的增多，以期为进一步理解人类子宫蜕膜化内在机制与诸多不育问题及提高人工生殖技术的成功率提供参考。     

缝隙连接蛋白43对小鼠子宫基质细胞蜕膜化的影响

缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)是缝隙连接蛋白家族成员之一,广泛存在于哺乳动物器官和组织中,参与细胞增殖、分化、凋亡等生理过程。本试验参照Gen Bank中已发表的Cx43基因序列,设计特异性引物,进行PCR扩增。为了提高构建过表达重组质粒的效率,PCR产物先与p GEM-T载体进行连接,经双酶切后与pc DNA3.1载体融合得到过表达重组质粒,经双酶切和测序鉴定后将其转染到体外分离培养的小鼠子宫基质细胞中,利用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)方法检测Cx43 mRNA表达变化及Cx43过表达对蜕膜化标志性分子表达的影响。结果表明,与空载体转染组相比,重组质粒pc DNA3.1-Cx43转染子宫基质细胞后可使小鼠子宫基质细胞Cx43 mRNA的表达量显著升高,同时Cx43过表达可使子宫基质细胞蜕膜化标志性分子Prl8a2和Prl3c1 mRNA的表达量均显著升高,表明Cx43可促进小鼠子宫基质细胞发生蜕膜化。     

褪黑素受体在未妊娠和妊娠牦牛子宫表达的研究

旨在研究褪黑素对妊娠牦牛子宫的调控作用,采用real-time PCR法和免疫组织化学S-P法,对未妊娠和妊娠不同时期牦牛子宫中褪黑素受体(MT1)mRNA和褪黑素受体(MT1)蛋白的表达进行研究。结果表明:牦牛未妊娠和妊娠的不同时期,牦牛子宫基质细胞(SC)和肌层平滑肌细胞(MM)中均有MT1蛋白表达(P0.05);血管内皮细胞(EBV)和血管平滑肌细胞(VSM)中的MT1蛋白表达,在妊娠28~35d差异不显著,随妊娠时间的增加,MT1蛋白表达增加(P0.05);腺上皮细胞(GE)中的MT1蛋白,在妊娠初期(妊娠28~35d)差异不显著,妊娠50~60d时,差异显著(P0.05),妊娠90~100d时,差异极显著(P0.01)。而在腔上皮细胞(SE)中,MT1蛋白表达量在妊娠28~35d比未妊娠时低(P0.05),而这种趋势随妊娠时间的增加继续降低(P0.01)。未妊娠牦牛子宫中MT1mRNA表达量显著高于妊娠牦牛(P0.01)。综上表明,在妊娠期,牦牛子宫对褪黑素的需求量降低,褪黑素主要作用于牦牛GE,调节子宫腺功能,使牦牛子宫产生适应妊娠的生理反应。     

环氧合酶-1和环氧合酶-2在兔早期妊娠子宫内膜及早期胚胎中的表达

环氧合酶(cyclooxygenase，Cox)是由花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，而前列腺素在哺乳动物的生殖过程中起着很重要的作用。本试验采用RT—PCR方法对环氧合酶-1(Cox-1)及环氧舍酶-2(Cox-2)在早期妊娠兔子宫内膜中的表达进行了半定量研究和在早期胚胎中的表达定性研究。结果表明，Cox-1在早期妊娠兔子宫内膜中表达较平稳，呈组成型表达；在早期胚胎中各个时期均可以检测到Cox-1mRNA，表明它在早期胚胎发育过程中起作用。Cox-2在早期妊娠子宫内膜中的表达水平有很大差异，妊娠第l天表达水平较高，从第2天开始表达下降，到第6天表达又明显增加，第8天达到最高。Cox-2在囊胚之前的各个时期胚胎均未检测到，而在扩展胚泡和孵出胚泡中表达，Cox-2的时期特异性表达可能与兔胚泡孵出及胚胎着床等过程相关。     

妊娠早期蒙古绵羊子宫内膜enJSRV及IFN-τ基因表达水平的分析

本研究旨在检测内源性绵羊肺腺瘤反转录病毒(enJSRV)与干扰素-τ(IFN-τ)在妊娠早期蒙古绵羊子宫内膜组织的表达以及enJSRV的表达与外周血孕酮水平变化的关系。运用TaqMan实时荧光定量PCR技术和电化学发光法对enJSRV和IFN-τ在妊娠早期蒙古绵羊子宫内膜组织相对表达及孕酮水平进行了测定。实时荧光定量PCR结果显示,enJSRV和IFN-τmRNA在妊娠早期绵羊子宫内膜组织有不同程度的表达。SAS统计学软件分析得出,子宫内膜组织中enJSRV mRNA在妊娠12～14d(交配日为0d)表达较高,2～10、16～30d的表达均低于前者。IFN-τmRNA仅在妊娠12～25d表达,14d达其峰值,30d就不能检出,且差异都极显著(P<0.01)。电化学发光法结果显示,孕酮水平在妊娠2d为0.4ng·mL-1,以后升高,妊娠8～16d维持在8.3ng·mL-1左右,在妊娠19～30d孕酮水平有所下降,30d为2.5ng·mL-1。以上结果提示,子宫内膜组织中enJSRV mRNA的表达与外周血孕酮含量及IFN-τ的变化高度相关,且enJSRV在胎盘的形态发生及生殖生物学方面发挥重要作用。     

NO在小鼠早期胚胎吸收过程中的作用

给妊娠 7d小鼠尾静脉注射细菌脂多糖 (L PS)诱导早期胚胎吸收。注射 L PS后 12、2 4、36 h,以 EL ISA、比色法检测血清和子宫匀浆中 Th1型细胞因子 IFN- γ、IL- 12与 NO的含量变化 ;免疫组织化学法观察 3种一氧化氮合酶(n NOS,e NOS,i NOS)和 Th2型细胞在小鼠子宫表达的变化。此外 ,还观察了 NO供体硝普钠 (SNP)诱导孕鼠流产效果及氨基胍 (AG)对抗 L PS诱导孕鼠流产的效果。结果显示 ,相对于正常妊娠组 ,L PS处理组孕鼠子宫匀浆 NO含量及 IFN- γ、IL- 12水平极显著升高 (P<0 .0 1) ,血清 NO含量也极显著升高 (P<0 .0 1) ;n NOS、i NOS在 L PS处理组小鼠子宫可见阳性标记 ,而 e NOS未见阳性标记 ;大量 Th2型阳性细胞标记仅在正常妊娠组小鼠子宫内膜基质可见 ,L PS处理组未见阳性细胞。腹腔注射 SNP致使孕鼠早期胚胎吸收 ,然而妊娠 6～ 9d腹腔注射 AG却未能降低 L PS诱导的孕鼠早期胚胎吸收。上述结果提示 ,L PS处理后 ,Th1型免疫反应增强 ;源自升高表达的 i NOS的子宫局部高浓度 NO可能作为一种效应分子介导小鼠早期胚胎吸收。     

母猪感染性流产的病因与诊断

<正>母猪卵巢黄体分泌孕酮维持妊娠,一旦孕酮分泌中断则妊娠终止。母体或者胎儿释放的皮质激素可以启动激素级联放大效应,导致子宫释放前列腺素,黄体溶解而引起分娩。因此,内分泌系统和母畜与胎儿之间的相互作用可以导致流产,而且,此过程可以受到感染性或非感染性疾病的影响。假孕是指在没有受孕的情况下,黄体存在时间超过预期时出现的一种情况。在发情周期的第11~12天,对母猪使用雌二醇可以导致假孕的发生。短期处理(发情周期第11~12天用药),假孕时间