鸡新城疫琼脂扩散试验方法的研究

用新城疫病毒(NDV)La Sota株接种的鸡胚含毒尿囊液,经灭活、透析和浓缩后,研制出琼脂扩散(AGP)抗原。应用AGP和HI试验同步检测不同免疫状态的鸡血清样品977份。试验表明,HI抗体效价≥16的被检血清,AGP阳性率为98.5％(268/272);HI抗体效价=8的,AGP阳性率为79.3％(142/179);HI抗体效价≤4的526份血清,AGP试验均为阴性。抗原经2次冻融,或在4℃和-3℃保存10个月以上,其效价未见降低。AGP抗原可用于ND的免疫监测和流行病学调查。     

应用HI和AGP试验同步检测新城疫抗体的比较

鸡新城疫(ND)血凝抑制(HI)试验是监测鸡群免疫状态的常规血清学方法,主要用于检测鸡血清中的HI抗体。为避免捉鸡采血对产蛋鸡群的不良影响,一些研究者用卵黄代替血清来检测HT抗体。近年来,报道了ND琼扩(AGP)试验方法,並应用AGP试验检测ND沉淀抗体。从1987年以     

鸡产蛋下降综合征血凝抑制试验抗原符合率比较

用哈尔滨维科生物技术开发公司生产的批号为200901的鸡减蛋综合征京911株油乳剂灭活疫苗,以0.5mL/只剂量接种120日龄SPF鸡10只,7d后采血分离血清,以后每隔一定时间进行采血、分离血清。同时又采集了发病鸡场的15份发病鸡血清。分别用血凝抑制试验和琼脂扩散(AGP)试验对自制的阳性血清和发病鸡血清样品进行血清学检查。结果表明:当血清HI效价等于或大于28时,两种方法的符合率可达100%;当血清的HI效价为26~27时,AGP与HI的符合率为73.33%~86.67%;当血清的HI效价为24~25时AGP的检出率很低或完全呈阴性。从两种方法的符合率比较还可得出HI试验检测的灵敏度要高于AGP,而且HI法简单、特异、快速、实用、方便,不但能定性还可以定量。     

酶联免疫吸咐试验,血凝抑制试验和琼脂扩散沉淀试验检测商品肉鸡的传染性支气管炎和新城疫抗体的比较

用琼脂扩散沉淀试验(AGPT)、血凝抑制试验(HIT)(M_(41),D_(274),D_(1466))和酶联免疫吸咐试验对一组在育肥期感染过临床传染性支气管炎(IB)的商品肉鸡群进行了血清学检测,并与对照组肉鸡的血清学结果进行对比。另外,还对HI试验和ELISA检测新城疫(ND)进行了比较。两组的AGP试验结果明显不同。AGP试验敏感性低。两组的HI试验结果相同,患与未患临床IB的鸡群间未见差异。两组的IBV ELLSA结果存在显著差异。 IBV的HI试验和ELISA之间的相关系数低而不显著。相反,NDV的HI和ELISA之间的相关系数高。结果表明,ELISA是诊断肉鸡IB的首选方法。     

EDS—76 AGP与HI效价的比较试验

通过血凝抑制试验测定鸡产蛋下降综合症(EDS—76)的HI效价,是比较常用的方法。不过血凝(抑制)试验需用新鲜红细胞,虽然经过醛化的红细胞能保存一定的时间,但醛化过程比较复杂。本室进行了EDS—76 AGP与HI效价的比较试验。     

琼脂扩散试验检测鸡新城疫抗体的研究

本文报告了用NDV—Lasota株经鸡胚增殖病毒,收集含毒的鸡胚尿囊液,用乙醚脱脂、透析浓缩制成琼扩(AGP)抗原,应用本抗原和HI试验同步检测435份待检血清,结果AGP与HI试验的阳性符合率为91.6％(241/202),阴性复合率为100％(114/114),     

间接ELISA检测减蛋综合征抗体的研究

目前,减蛋综合征感染的血清学检测方法主要有微量血凝抑制试验(HI)、琼脂扩散试验(AGP)、病毒中和试验(VN)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点-酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和斑点免疫金测定法(D IGFA)。至今为止,国内尚无成熟的ELISA检测方法用于该病的检测。试验用纯化的EDS-76     

鸡新城疫琼脂扩散试验抗原的制备及应用研究

用NDV LaSota株接种鸡胚增殖病毒,收获含毒尿囊液,经灭活、透析和浓缩研制成琼脂扩散(AGP)试验抗原。这种抗原具有特异性强、稳定性好和不散毒等优点。经多方面的试验和对976例血清样品同步进行HI和AGP试验检测以及现地应用,证明本方法简易、实用,特别适用于大量血清样品的检测和流行病学群体的定性诊断。     

H7亚型禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒活载体疫苗免疫原性评估

本研究以细胞感染-转染技术构建了一株表达H7亚型禽流感病毒(AⅣ)血凝素(HA)基因的重组鸡痘病毒rFPV-HA.以5×105PFU的rFPV-HA经翅下刺种免疫8周龄SPF鸡,免疫后第3周用100 CID5o的HA基因同源AⅣ A/Arfi St/eng-Q/983/79(H7N1)进行人工感染,1周后采集泄殖腔棉拭子进行病毒分离.免疫后第三周及攻毒后第1、2周对所有动物进行静脉采血,检测血凝抑制(HI)抗体和免疫沉淀(AGP)抗体.结果,攻毒前部分rFPV-HA免疫鸡可检测到HI抗体,但检测不到AGP抗体,野生型病毒(F017)接种组和空白对照组HI抗体和AGP抗体均为阴性.攻毒后rFPV-HA免疫组的HI抗体上升速度明显高于野生型病毒接种组和空白对照组.rFPV-HA免疫组有6/8的鸡为流感病毒分离阴性,野生型病毒接种组和空白对照组的试验鸡病毒分离全部为阳性.结果表明rFPV-HA可诱导鸡产生有效的免疫保护反应,阻止或降低消化道病毒排泄.rFPV-HA的成功构建为研制开发H7亚型禽流感活载体疫苗奠定了良好的基础.     

禽流感病毒检测技术研究

禽流感病毒的检测方法主要分为血清学检测和分子生物学检测两大类。血清学检测方法包括琼脂凝胶扩散试验(AGP)、血凝抑制试验(HI)、酶联免疫吸附试验( ELISA)、神经氨酸酶抑制试验(NIT)和病毒中和试验(VN)。随着分子生物学的发展,近两年国内外学者更加注重对禽流感病毒的分子生物学检测方法的研究。分子生物学检测方法包括RT-PCR、多重RT-PCR、多种改进的RT-PCR和基因探针技术。     

猪脾转移因子增强几种重要禽疫苗免疫效果的测试研究

为研究猪脾转移因子(TF)对禽疫苗的免疫增强作用,采用血凝抑制(HI)试验和琼脂凝胶扩散沉淀(AGP)试验方法测试了TF分别与鸡新城疫(ND)病毒活疫苗、禽流感(AI)病毒灭活疫苗、鸡传染性支气管炎(IB)病毒灭活疫苗、鸡传染性法氏囊病(IBD)病毒活疫苗联合接种SPF鸡后抗体效价(log2x)动态变化(共4个试验组),同时运用ELISA法评估了所采用免疫程序(上述前3种疫苗与TF同时接种后第7天,进行上述第4种疫苗与TF的联合接种)对SPF鸡外周血IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的影响(试验组5),于接种上述第4种疫苗后的7,14,21,28,35,42d检测细胞因子,均设立对照组(上述禽疫苗单独接种)和空白组(非疫苗接种)。结果显示,接种后7,14,21,28,35,42d,试验组的ND血凝抑制(HI)、AI HI、IB HI和IBD琼脂扩散沉淀(AGP)抗体效价均显著高于对照组(P<0.05),分别提高了1.1~1.4,1.0~1.3,0.7~1.4,0.9~1.6;试验组的IL-2、IFN-γ和IL-4浓度分别于接种后7,14,21d显著高于对照组和空白组(P<0.05),各组的IL-10浓度差异不显著。研究结果表明,TF可增强NDV活疫苗、AIV灭活疫苗、IBV灭活疫苗和IBDV活疫苗的免疫效果。     

禽类疾病常规血清学检测结果判断的十项基本原则

基层动物疫病预防控制中心、个体诊疗机构和规模化的养禽场对禽类疾病的血清学检测通常采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、凝集反应(如HA、HI试验)、沉淀试验(如AGP、IEP)和补体结合反应。目前,在临床快速诊断技术中最常用的实验方法是ELISA试验和凝集反应。本文通过笔者多年的实验室和临床经验总结,提供禽类疾病血清学检测结果判断的10项基本原则以供基层兽医工作者参考。     

琼脂凝胶免疫扩散试验(AGP)在检测珍稀雉类禽流感病毒上的研究应用

禽流感是由禽流感病毒引起禽鸟类的一种急性高度接触性传染病,发病率和死亡率均高达90%以上,为了建立一种简易快速准确的诊断方法。笔者采用琼脂凝胶免疫扩散试验方法(AGP)检测珍稀雉类患疑似禽流感病18例,阳性检出率100%,用HA、HI验证试验符合率为100%。从而建立一种简易、快速、准确的诊断方法。为快速检测本病提供可靠依据。     

用免疫荧光技术测定鸡肾炎肾组织中的支气管炎病毒抗体

澳大利亚大多数传染性支气管炎病毒(IBV)侵袭鸡时,均可引起鸡的肾炎,但不表现出临床症状,然而,很容易从鸡肾中分离出病毒。以IBV感染的鸡肾进行切片,作为一种抗原,用间接荧光抗体技术来测定IBV抗体并将这种方法与其它两种方法(即用于测定IBV的Q_1株病毒采用的琼脂凝胶技术(AGP)和血凝抑制技术(HI),并采用1％白陶土来吸附鸡血清以除去非特异性     

Ⅰ群4型禽腺病毒感染鸡阳性血清的制备及其在IFA中的应用

用LMH细胞扩繁I群禽腺病毒血清4型(FAd V-4)并通过口服途径感染24周龄SPF公鸡,心脏无菌采血制备鸡抗FAdV-4血清。通过ELISA、AGP、IFA和HI等方法检测血清,结果未见其他禽类常见病毒抗体。该血清用于间接免疫荧光检测FAd V-4,染色效果较好,测定FAID_(50)敏感性高。试验结果表明,该批血清2000倍稀释可以作为一抗用于FAd V-4毒价检测。     

禽流感血凝抑制试验中的质量控制

自2003年12月17日韩国农林部向世界卫生组织(OIE)报告了该国发生高致病性禽流感疫情以后，在短短的两个月内，亚洲有10个国家和地区接连发生禽流感，我国也有禽流感病例。因此，平时做好对禽流感疫情的监测就显得至关重要。目前，我国已建立了禽流感琼脂扩散试验(AGP)、血凝抑制试验(HI)、神经氨酸酶抑制试验(NI)、间接酶联免疫吸附试验(ELISA)等血清学诊断技术，     

平顶山地区12种鸡传染病的血清学调查

随着我市养鸡业的迅速发展,鸡的一些新老疫病也随之增多,对养鸡业构成了严重威胁.为了查清我市鸡传染病的流行情况,以便采取有效的防治措施,我们于2001年9～10月对所辖的叶县、宝丰、鲁山等5县(市)18个种鸡场饲养的罗斯、明星、艾维茵、伊莎褐等2364份组样采用血凝抑制试验(HI)、间接血凝试验(IHA)、平板凝集试验(PAT)、琼脂扩散试验(AGP)等血清学方法进行了12种传染病的抽样调查.     

“荆防败毒颗粒”治疗蛋鸡低致病性禽流感

1试验材料 1.1试验动物 4周龄健康海兰灰蛋鸡500只,双向琼脂扩散试验(AGP)检测禽流感病毒(AIV)核蛋白抗体阴性,自由采食、饮水.血清学检验H9N2 AI母源抗体HI≤2. 1.2其它材料 "荆防败毒颗粒"(山东绿都安特动物药业有限公司,批号20071210);"荆防败毒散"(山东绿都安特动物药业有限公司,批号20070424).     

禽流感高免球蛋白的制备及应用研究

应用H9N2亚型禽流感病毒(AIV)油乳剂灭活苗6个不同剂量免疫30周龄SPF蛋鸡,通过血凝抑制(HI)和琼脂免疫扩散(AGP)试验监测血清及卵黄抗体消长规律,确定2.0 mL为最适免疫剂量。首免后第18天血清与卵黄中抗体同时升至第一高峰,此时加强免疫。二免后1周,效价达到第二高峰,用常规抽提法从高抗体滴度卵黄中提取高免球蛋白(IgY)。中和试验(NT)表明:IgY具有中和病毒感染的作用,且中和抗体滴度随HI滴度的降低而降低;给鸡肌肉注射后6 h能检测出血清的HI抗体,24 h达到峰值,维持7 d,第13天血清中HI抗体消失。104个EID50的AIV(H9N2)攻毒,同时用HI价为214的IgY的10倍系列稀释物分5组进行保护试验,确定HI价为214的IgY保护范围在100倍稀释与10倍稀释之间。IgY系列保护试验表明HI价28为完全保护的最低滴度;在攻毒的前1天及至攻毒后第5天接种IgY均能100%保护。攻毒保存期试验证明,所制得的高免球蛋白4 ℃可以保存6个月,-20 ℃可保存1年。     

禽流感诊断技术

禽流感亚型众多加上基因突变、重组和重排,使其变异极快,导致毒株的致病性也千差万别,早期快速诊断和血清学监测无疑是预防、控制禽流感的前提条件,我国动物流感研究中心(AIRC)在近几年时间内相继建立了禽流感琼脂扩散(AGP)、血凝抑制试验(HI)、神经氨酸酶抑制试验(NI)、间接酶联免疫吸附试验(ELISA)等血清学诊断技术以及分子诊断技术(RTPCR).满足了我国禽流感流行病学监测及现地诊断与防制的迫切需要.