鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验抗原的研制

为应用血凝抑制(HI)试验检验鸡传染性支气管炎疫苗免疫效力(血清、卵黄抗体水平),建立了鸡传染性支气管炎病毒HI试验抗原的制备方法。该方法是通过选取抗原谱最广的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,经SPF鸡胚增殖培养36h后无菌收取鸡胚尿囊液,4℃、12 000r/min离心10min,上清用聚乙二醇(PEG)20000浓缩100倍;兔源A型产气荚膜梭菌中国标准株(C57-1株)37℃增殖培养18h,4℃、12 000r/min离心10min取上清,经PEG 20000透析袋浓缩5倍后通过0.20μm滤膜过滤除菌,然后将IBV液和A型产气荚膜梭菌菌液(含α毒素)二者按一定比例混合后经37℃恒温振荡感作2h,4℃经48h后制成。经大量试验表明,制备的IBV HI试验抗原效价高、稳定性好,可替代进口抗原应用于鸡群IBV疫苗免疫后血清抗体及卵黄抗体的HI效价检测。     

琼脂扩散试验检测鸡新城疫抗体的研究

本文报告了用NDV—Lasota株经鸡胚增殖病毒,收集含毒的鸡胚尿囊液,用乙醚脱脂、透析浓缩制成琼扩(AGP)抗原,应用本抗原和HI试验同步检测435份待检血清,结果AGP与HI试验的阳性符合率为91.6％(241/202),阴性复合率为100％(114/114),     

马动脉炎病毒血凝抑制试验研究及其应用

用马动脉炎病毒（EAV）免疫SPF豚鼠，4周后采血做血凝抑制试验（HI），其抗血清可以抑制血凝抗原对小鼠红细胞的凝集反应，抗原和抗血清在4℃感作24h后可以检测到最高的HI抗体效价，同时结果显示HI抗体与中和抗体产物呈正相关。对561份来自新西兰、吉尔吉斯、沙特阿拉伯及内蒙古、新疆的马血清用HI试验和微量血清中和试验（NT）进行EAV抗体检测，HI和NT阳性符合率为94．7％，血凝抑制抗体与中和抗体效价呈显著的正相关。     

高免鸡群蛋黄液和鸡血清IBD及ND抗体水平的对比试验

在制备IBD和ND二联卵黄抗体以及在计划鸡群的IBD和ND免疫程序时,都需要对鸡体内的IBD及ND抗体水平进行监测。通过对一群鸡按一定免疫程序高免IBD疫苗和ND疫苗后,利用鸡所产鸡蛋卵黄液和相对应鸡的血清测定IBD琼扩(AGP)抗体效价和ND凝集抑制(HI)抗体效价的对比试验认为:用卵黄液测定的抗体效价与用鸡血清测定的抗体效价呈一致关系,完全可用鸡蛋卵黄液代替鸡血清进行鸡体内IBD和ND抗体水平的监测。现将试验结果报告如下:     

虎血清中犬副流感病毒的抗体流行病学调查研究

为查明犬副流感病毒 (CPIV)对虎的感染情况 ,应用CPIV细胞培养物为血凝抑制 (HI)抗原 ,对上海、桂林、哈尔滨、宜昌、郑州等地区未曾使用过任何含CPIV疫苗免疫的 38只虎的血清进行HI抗体检测。结果表明 ,有 2 5份血清CPIV的HI抗体效价为 1∶4～ 1∶32 ,有 1 3份抗体效价 <1∶2 ,血清中CPIV的HI抗体阳性率达 65 79%。说明上述地区的虎可能存在着CPIV的隐性感染     

猪脾转移因子增强禽白血病病毒A/B亚群抗体阳性鸡群免疫水平的研究

为了解猪脾转移因子(TF)对禽白血病病毒A/B亚群(ALV—A/B)抗体阳性鸡群免疫水平的影响,本研究以新城疫(ND)HI试验和淋巴细胞增殖试验分别检测ND HI抗体效价(log2x)和刺激指数(SI)作为指示参数,采集特佳、罗曼、海兰和伊莎共4个品种蛋鸡血样,并从中选出各60羽份(ALV-A/B抗体阳性、阴性鸡各半,ALV p27抗原均为阴性),将4个品种的ALV-A/B抗体阳性蛋鸡均分为实验组(联合接种TF 0.02 mL+NDV La Sota疫苗1羽份/羽,TF多肽含量为3.5 mg/mL,核糖含量为72.0μg/mL,脱E受体法效力检验活力为15%)和对照组(单独接种NDV La Sota疫苗1羽份/羽),于接种后21 d采血检测。结果显示,ALV-A/B抗体阳性鸡群(120羽份)的ND HI抗体效价均值(6.1±1.3)与阴性鸡群(120羽份)均值(6.2±1.3)差异不显著,但其SI均值(1.20±0.10)显著低于阴性鸡群(1.35±0.10)(p0.05);实验组(60羽份)的ND HI抗体效价和SI均值(9.0±1.3,1.73±0.15)显著高于对照组(60羽份)均值(7.8±1.2,1.39±0.16)(p0.05)。研究结果表明,ALV-A/B抗体阳性与鸡ND HI抗体效价相关性不大,而对SI具有抑制作用;TF具有增强ALV-A/B抗体阳性鸡群免疫水平的作用。     

鸡产蛋下降综合征血凝抑制试验抗原符合率比较

用哈尔滨维科生物技术开发公司生产的批号为200901的鸡减蛋综合征京911株油乳剂灭活疫苗,以0.5mL/只剂量接种120日龄SPF鸡10只,7d后采血分离血清,以后每隔一定时间进行采血、分离血清。同时又采集了发病鸡场的15份发病鸡血清。分别用血凝抑制试验和琼脂扩散(AGP)试验对自制的阳性血清和发病鸡血清样品进行血清学检查。结果表明:当血清HI效价等于或大于28时,两种方法的符合率可达100%;当血清的HI效价为26~27时,AGP与HI的符合率为73.33%~86.67%;当血清的HI效价为24~25时AGP的检出率很低或完全呈阴性。从两种方法的符合率比较还可得出HI试验检测的灵敏度要高于AGP,而且HI法简单、特异、快速、实用、方便,不但能定性还可以定量。     

云南省鸡减蛋综合征的血清学调查

从云南省10个养鸡场采集不同日龄、品种、性别和不同用途鸡的血清样品103份，以血凝抑制（HI）试验检测鸡群的减蛋综合征（EDS）血清抗水平，结果，10周龄以下鸡的EDS血清抗体阳性率为16．7％，其阳性率随着日龄的增加而增高；不同品种鸡群中，迪高鸡和地方土鸡的EDS血清抗体阳性率较低，而伊萨褐鸡阳性率高达100％；公鸡EDS血清抗体阳性率为55．6％，母鸡为73．4％；商品鸡EDS血清抗体阳性率为68．95，种鸡阳性率为62．5％；全部检测各的平均阳性率为67．9％，多数血清EDS HI效价为1：32－1：1024之间，最高的达1：4096。     

抗独特型抗体检测H9亚型禽流感血清抗体

为了探讨用抗独特型抗体替代病毒或病毒亚单位检测H9亚型禽流感血清抗体的可行性,本试验分别用全病毒抗原和抗独特型抗体(Ab2)作检测原,通过琼脂免疫扩散试验(AGP)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了鸡的血清样品。在AGP试验中,分别用Ab2和禽流感病毒(AIV)对10份血清样品检测的符合率为70%。在间接ELISA试验中,Ab2和AIV抗原对10份血清样品检测的符合率为90%。用Ab2间接ELISA试验检测出的血清阳性率(8/10)高于血凝抑制试验(6/10)和AGP试验(5/10)。结果表明,在一定的情况下Ab2可以用来代替具有污染环境风险的病毒抗原来检测抗病毒抗体。     

应用对流免疫电泳检测鸡传染性法氏囊病病毒抗原和抗体

应用鸡传染性法氏囊病(IBD)血清抗体检测病毒抗原,对流免疫电泳试验(CIET)法比琼脂扩散(AGP)法检出率高50％;而用IBD抗原检测其血清抗体,CIET比AGP有60％血样抗体效价高1～2个滴度。CIET法比AGP法的检测速度快23～37个小时。CIET是一种简易、快速、敏感度较高的检测方法,可用于IBD的检测与诊断。     

用鸽鸡红细胞进行禽流感血凝抑制试验的比较

分别用1％鸽红细胞和1％鸡红细胞,对经H5亚型禽流感疫苗免疫过的鹅、鸽、鸡的血清,按照不同血清处理方法,进行禽流感血凝抑制试验.结果表明,鸽红细胞作指示细胞,检测鸽免疫血清HI抗体效价效果优于鸡红细胞,但不适于检测鹅、鸡的免疫血清的HI抗体效价.     

检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立

以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。     

鸡传染性支气管炎微量血凝抑制试验方法的研究

用胰酶处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制成血凝(HA)抗原,HA＝1:16384,用此抗原建立了微量血凝抑制试验(HI)方法检测IBV阳性血清。IBV阳性血清鸡胚病毒中和试验(NT)结果与HI效价呈正相关,相关系数r＝0.29,HI效价达1:8以上可保护鸡胚抵抗200个MLD的IBV攻击,表明HI抗体是保护性抗体,该方法具有较大的实用价值。     

榆中地区鸡禽流感H5亚型的血清学调查

2007年4月底,笔者在榆中县进行鸡禽流感春检工作,对23个乡镇的344份血清,应用血凝抑制试验(HI)进行了血清学检测。结果显示,应用于本次血凝抑制(HI)试验的4个血凝单位抗原的稀释倍数为512倍(29);在检测的阳性结果中,鸡禽流感H5亚型HI最高抗体滴度为512(29),主要分布在青城﹑甘草店﹑园子3个乡镇;HI最低抗体滴度为32(25),主要分布在中连川﹑和平﹑上花3个乡镇。血清抗体阳性率以青城乡最高,达100%,血清抗体阳性率以来紫堡乡最低,为35.71%;榆中县总体血清抗体阳性率为74.42%。由此可见,H5亚型禽流感病毒阳性率较高,且抗体滴度也较高,说明该地区大多数家禽对禽流感H5亚型病毒可以产生较强的保护抗体。     

雏白痢沙门氏菌琼扩沉淀试验抗原的研制(初报)

用四种不同方法制备的四种雏白痢沙门氏菌琼扩沉淀(AGP)试验抗原,经沉淀抗体效价为64倍的雏白痢沙门氏菌阳性血清滴定后找出,以每毫升含菌量为300亿的菌悬液,经3次反复冻溶、裂解后离心制得的AGP—UTSA抗原的效价最高,可达32倍。其每毫升蛋白质含量为22.5毫克。在4℃保存14个月效价不降。根据最高反应稀释度出现的沉淀线位置应居于抗原孔和抗体孔中间的标准进行试验的结果,确定AGP—UTSA抗原的实际应用单位为8个抗原单位。     

鸡传染性支气管炎病毒M41株和Conn株的血清交叉血凝抑制试验

本试验用系统血凝抑制(HI)交叉试验,对鸡传染性支气管炎病毒M41株和Conn株进行抗体区分。结果表明,M41株和Conn株标准抗原与M41阳性血清HI抗体效价在免疫后21 d分别为8 log2、5 log2,相差3 log2;免疫后28 d分别为8 log2、5 log2,相差3 log2;免疫后35 d分别为8 log2、5 log2,相差3 log2。M41株和Conn株标准抗原与Conn阳性血清HI抗体效价在免疫后21 d分别为4 log2、8 log2,相差4;免疫后28 d分别为4 log2、8 log2,相差4 log2;免疫后35 d分别为4 log2、9 log2,相差5 log2。因此,用血清HI交叉试验能够将抗M41株和Conn株抗体区分开来。     

传染性支气管炎病毒(M41株)HI试验抗原的特异性和敏感性试验

采用本研究室制备的3批传染性支气管炎病毒(IBV,M41株)HI试验抗原,分别对100份和80份不同鸡血清进行IBV HI抗体检测,同时用IBV ELISA抗体检测试剂盒进行检测,比较两种不同方法检测的特异性和敏感性。结果显示,特异性试验中80份SPF鸡血清,自制抗原检测均为阴性,IBV ELISA检测79份为阴性,10份其他鸡病血清,两种方法检测9份均为阴性,10份IBV阳性血清两种方法检测均为阳性;敏感性试验中,74份已知IB疫苗免疫或IBV M41株感染鸡血清IBV HI检测72份为阳性,阳性检出率为97.3%(72/74),IBV ELISA检测74份均为阳性,阳性检出率为100%(74/74),SPF鸡血清及其他鸡病血清,两种方法检测均为阴性,两种检测方法总符合率为97.5%,差异不显著(P0.05)。试验结果证明,本研究室自制抗原具有良好的特异性,特异性为100%,抗原同时具有良好的敏感性,但IBV ELISA方法的敏感性要高于IBV HI方法。     

应用HI和AGP试验同步检测新城疫抗体的比较

鸡新城疫(ND)血凝抑制(HI)试验是监测鸡群免疫状态的常规血清学方法,主要用于检测鸡血清中的HI抗体。为避免捉鸡采血对产蛋鸡群的不良影响,一些研究者用卵黄代替血清来检测HT抗体。近年来,报道了ND琼扩(AGP)试验方法,並应用AGP试验检测ND沉淀抗体。从1987年以     

对流免疫电流法诊断传染法氏囊病的研究

应用对流免疫电流技术（CIET）和琼脂扩散试验（AGP）对具有典型临床症状传染性法氏囊病鸡血清50份和法氏囊材料50份进行标准抗原检测被检血清，标准阳性因清检测被检抗原。AGP法标准抗原检测被检血清阳性40份，阳性率80％（40／50），标准阳性血清检测被检抗原，阳性36份，阳性率72％（36／50）；CIET法标准阳性血清检测被检抗原，阳性47份（47／50），阳性率为94％，标准抗原检测被检血清，阳性48份，阳性率为96％（48／50）。经x^2检验均P＞0.05，差异不显著。CIET法与AGP法，标准抗原检测被检血清，AGP法阳性率80％（40／50），CIET法阳性率96％（48／50）；标准阳性血清检测被检抗原，AGP法阳性率72％（36／50），CIET法阳性率94％（47／50）。经x^2检验均P＜0.05，差异显著。结果表明，CIET法比AGP法敏感、快速、且检出率高。     

纸膜免疫金银染色诊断鸡马立克氏病的研究

本研究建立了纸膜兔疫金银染色法(P—IGSS)诊断鸡马立克氏病(MD)。以定量滤纸为载体,既可检测抗原,又可检测抗体。检测抗原的灵敏度为0.39μg/点,检测抗体的灵敏度为1.4μg/点。450份鸡血清P—IGSS和琼脂扩散试验(AGP)检出率分别为42.44%和37.78%,30份接种MD病鸡羽髓抗原检出率分别为96.67%和90%。3次重复试验重复率达100%。2批金标抗体检测结果一致。与9种鸡传染病阳性血清和3种鸡传染病抗原不发生交叉反应。用本法3小时内可报告结果,而AGP需24—72小时,试验结果表明该方法用于MD诊断是可靠的。