基于线粒体控制区的鸡不同杂交组合遗传多样性研究

旨在探讨鸡不同杂交组合线粒体控制区（mtDNA D-loop区）的遗传多样性和单倍型特性。选取固始鸡和隐性白羽鸡及其正、反交F1代、藏鸡以及F2代等6个群体共387个个体的mtDNA D-loop区进行测序,分析其遗传规律和单倍型特性,并与不同红色原鸡亚种进行聚类,分析其母系起源。结果显示,6个群体D-loop区全序列大小为1 231 bp,共检测到28个多态位点和1个C碱基缺失,共构成19种单倍型,分为A、B、C和E 4个单倍型群,其中,固始鸡和反交F1代主要为A、C单倍型,固始鸡A、C单倍型比例分别为53.42%和46.58%,反交F1代A、C单倍型比例分别为50.75%和49.25%;隐性白羽鸡、正交F1代和F2代优势单倍型均为E单倍型,占比分别为48.89%、48.84%和50.00%。6个鸡群体单倍型多样度（Hd）在0.496~0.729之间,核苷酸多样度（Pi）在0.003 40~0.005 41之间,Hd值和Pi值最大的均为正交F1代,其次为隐性白羽鸡和F2代,固始鸡和反交F1代群体遗传多样性接近。聚类分析显示,A、B单倍型群与滇南亚种交叉聚为一枝;E单倍型群与印度亚种交叉聚为一枝;C单倍型群与印度亚种、指名亚种、印尼亚种以及滇南亚种聚为一枝。结果提示,mtDNA D-loop区遵循严格的母系遗传,后代的遗传多样性和单倍型比例与其母本基本一致;我国家鸡群体具有多个红色原鸡母系起源,且主要起源于原鸡滇南亚种。     

坝上长尾鸡线粒体DNA D-loop序列变异与起源分化研究

为了更好地保护和利用坝上长尾鸡的品种资源,且从母系遗传的角度探明坝上长尾鸡的遗传多样性与起源分化,试验采用PCR直接测序法,测定了30只坝上长尾鸡线粒体DNA(mt DNA)D-loop区1 491bp片段序列。结果显示:在所测定的mt DNA D-loop序列中,A、G、T和C碱基的平均含量分别为28.02%、13.91%、30.97%、27.10%。共检测到1个插入/缺失和32个变异位点,组成17个单倍型。单倍型多样度为0.945±0.025,群体内序列间核苷酸平均差异数为8.536,核苷酸多样度为0.00573,平均遗传距离为0.006。由最大似然法构建的NJ系统进化树将坝上长尾鸡聚为3大支,划分为与A、B、C 3个类群。与其它家鸡品种类比,显示其独特性。与原鸡亚种类比,发现A类群起源于原鸡海南亚种,B类群起源于原鸡印度亚种,C类群起源于原鸡滇南亚种。结果表明:坝上长尾鸡遗传多样性丰富,并具有独特性;坝上长尾鸡存在3个区分明显的母系来源。     

崇仁麻鸡mtDNA D-loop区遗传结构与遗传多样性分析

为研究崇仁麻鸡线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)D-loop区遗传多样性和遗传结构，试验采用PCR产物直接测序的方法，测定崇仁麻mtDNA D-loop区的全序列，并与其他5个红色原鸡亚种进行系统进化关系分析。结果显示：30个样本的mtDNA D-loop区序列长度范围为1 231～1 232 bp，共发现27个多态位点，单倍型多样性（Hd）、核苷酸多样性（Pi）和平均核苷酸差异（K）数值分别为0.947、0.006 89和8.476。群体中16种单倍型划分为A、B、C和E单倍型类群。研究表明，崇仁麻鸡具有较高的线粒体遗传多样性，可能来源于不同的母系。     

重庆地方品种鸡母系起源研究

为了研究重庆地方品种鸡母系起源,试验采用聚合酶链式反应(PCR)和直接测序法,测定了重庆3个地方品种鸡线粒体DNA(mtDNA)控制区的部分序列,分析了其遗传变异。结果表明:共得到591 bp的mtDNA序列,腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)4种核苷酸的平均比例分别为26.88%、29.54%、14.08%、29.50%;共发现16个变异位点,约占分析位点总数的2.71%,颠换和转换之比为0.067,没有观测到插入/缺失;共检测到6种单倍型,单倍型多样性为(0.762±0.141),核苷酸多样性为(0.005 5±0.003 5);与分布在老挝、云南等地的3个红色原鸡大陆亚种(原鸡亚种、原鸡海南亚种、原鸡滇南亚种)比较,共发现35个变异位点,17种单倍型;根据NJ无根系统发生树及MJ网络图分析,共划分为4个单倍型类群,重庆3个地方品种鸡的单倍型主要分布在分支Ⅰ和Ⅳ中,说明它们很可能起源于红色原鸡的大陆亚种。     

泰国红色原鸡和中国红色原鸡mtDNA控制区遗传多态性和分类关系研究

对泰国红色原鸡Gallus gallus gallus亚种和中国红色原鸡Gallus gallus spadiceus亚种各16个个体mtDNAD-loop序列进行系统分析,测定线粒体D-loop部分序列大小约为560bp,A、C、G、T这4种核苷酸的平均比例分别为13.6%、43.2%、4.3%和38.9%,A+T含量高于G+C含量。结果共发现27个变异位点,颠换和转换之比为0.13,没有观测到插入/缺失情况。测定的6种单倍型中,2个红色原鸡亚种没有共享单倍型,单倍型多样度分别为0.250和0.695,平均核苷酸差异数分别为3.750和10.833,核苷酸多样度分别为0.954%和2.757%。泰国红色原鸡中性检验的Tajima'sD值为-1.800(P<0.05),不符合中性突变。2个红色原鸡亚种间核苷酸分歧度(Dxy)为2.847%,核苷酸净遗传距离(Da)为0.991%。序列群体间的方差组分(Va)占总变异的47.31%,Fst=0.473,差异极显著(P<0.01);群体间mtDNAD-loopFst值也差异显著(P=0.035)。红色原鸡2个亚种具有不同的群体遗传结构,群体之间存在明显的遗传分化,本研究支持这2个亚种并非是同一个亚种的观点。     

清远麻鸡线粒体DNA细胞色素b基因遗传多样性分析

为了更好地对清远麻鸡种质资源进行保护和开发利用，以线粒体DNA(mtDNA)细胞色素b (cytochrome b, Cytb)基因为分子标记，检测了80只清远麻鸡的遗传多样性，并探讨了清远麻鸡在5个红色原鸡亚种的进化地位。结果显示：清远麻鸡mtDNA Cytb基因序列全长为1 143 bp,碱基T、C、A和G的平均比例分别是24.08%、36.38%、27.46%和12.08%。单倍型多样性(Hd)为0.585±0.038,核苷酸多样性(Pi)为0.000 87±0.000 59,平均核苷酸差异(K)为0.995。80条序列共发现13个多态位点，其中11个为单变异位点，2个为简约信息位点；基于多态位点定义了7种单倍型，系统发育树显示清远麻鸡与红色原鸡既有独立分支，又有相互交叉。清远麻鸡在mtDNA水平上呈中度遗传多样性，研究结果为清远麻鸡种质资源遗传评估、有效保种和选育利用提供了理论依据。     

鸡mtDNA D-loop区单倍型簇频率与中国家鸡多母系起源研究

本研究旨在通过分析家鸡和原鸡D-loop区单倍型簇的区域性分布和频率揭示中国家鸡多母系起源的区域和传播途径。通过对1 347条鸡D-loop序列进行完全对比排序,共发现198种单倍型,聚成12个单倍型簇。分析结果显示,海岛型红色原鸡与家鸡和大陆型红色原鸡有明显差异;苏门答腊大陆型红色原鸡作为独立分支,也体现出与东南亚大陆型红色原鸡的区别。单倍型簇频率分析显示,Clade C代表的母系可能更早在东南亚及云南等地驯化并对我国南方家鸡形成产生影响,但并非直接由云南引入我国,应该另有途径;Clade D代表的母系可能更早在山东及河南一带驯化繁衍,后引入四川,并在四川开始大规模繁育饲养,此后向周边区域传播扩散,成为中国家鸡重要母系来源。本研究结果进一步支持了我国家鸡多母系起源的论断,并指出东南亚是我国南方家鸡重要的母系来源;同时,河南和山东一带也可能是我国家鸡起源的区域之一。     

西南地区三个地方鸡种母系遗传多样性评估

为研究西南地区乌蒙乌骨鸡、云龙矮脚鸡、施甸鸡的遗传多样性及母系亲缘关系,通过PCR扩增、产物回收、测序的方法,获得3个地方鸡种81个个体的mt DNA D-loop区的部分序列,利用Clustal W、Dna SP5.10、MEGA4.0等生物信息学软件对测序结果进行分析。通过对81个个体mt DNA D-loop区731~795 bp的片段数据分析,并与原鸡属的mt DNA D-loop进行聚类,构建了单倍型及品种聚类图。结果显示,乌蒙乌骨鸡、云龙矮脚鸡、施甸鸡的单倍型多样性指数分别为0.712±0.068、0.895±0.048、0.731±0.074;乌蒙乌骨鸡、云龙矮脚鸡、施甸鸡具有较近的亲缘关系,推测3个地方鸡种起源于分布在越南北部、中国云南东南部、广西西南部、雷周半岛的徐闻、海南岛的Gallus gallus jabouillei亚种。     

寿光鸡遗传多样性及其起源进化的研究

为了更好地对寿光鸡种质资源进行保护和开发利用,以线粒体基因组(mitochondrial genome,mt DNA) D-loop区为分子标记,检测了58只寿光鸡的遗传多样性,同时探讨了寿光鸡在5个红色原鸡亚种的进化地位。结果显示:寿光鸡mt DNA D-loop区全长1 231～1 232 bp,核苷酸多样性(Pi)为(0. 005 3±0. 001 35),单倍型多样性(Hd)为(0. 864±0. 018),平均核苷酸差异(K)为6. 525;群体共发现23处单核苷酸变异位点,并由此界定了8种单倍型;系统发育分析发现,寿光鸡主要分布在A、B、C和E 4个进化分支,构成比分别为43. 1%、36. 2%、12. 1%和8. 6%。结果表明:寿光鸡在线粒体水平上具有很高的遗传多样性,有4个母系来源,本研究为寿光鸡种质资源遗传评估、有效保种和选育利用提供了理论依据。     

拉伯高脚鸡线粒体DNA D-loop序列变异与起源分化研究

为从母系遗传角度探明云南拉伯高脚鸡的遗传多样性与起源分化,采用PCR产物直接测序技术对30只拉伯高脚鸡的线粒体DNA控制区(mtDNA D-loop)第一高变区序列进行了分析。结果表明:在所分析的mtDNA D-loop 527 bp序列中,共检测到17个变异位点,归结为5个单倍型。单倍型L1和L2属G世系,单倍型L3和L4属A世系,单倍型L5属B世系。G世系占整个群体的63.3%,A世系占33.3%。单倍型多样度为(0.763±0.049),群体内序列间核苷酸差异的平均数为7.205,核苷酸多样度为0.01315,平均遗传距离为0.016。由最大似然法构建的NJ系统进化树将拉伯高脚鸡聚为3大枝,分别与G、A、B 3个世系对应。与红原鸡及国内外鸡种聚类比较,拉伯高脚鸡在起源上具有其独特性。结果表明,拉伯高脚鸡存在较高的遗传多样性,起源上具有云南本地鸡特有的遗传特征。     

A Genetic Diversity Analysis of Mitochondrial DNA D-loop Region in Four High Quality Chicken Breeds

This study was conducted to elucidate the genetic diversity of mitochondrial DNA (mtDNA) D-loop region in Qingyuan partridge chicken group 1,Qingyuan partridge chicken group 2,Yangshan chicken and Qingyuan Yellow feather black-bone chicken.The specific primers were designed according to mtDNA D-loop region of Gullus gullus spadiceus (accession No.:NC_007235.1) in GenBank.The sequence was analyzed after PCR amplification and sequencing,and the haplotype number,polymorphism number,haplotype diversity,nucleotide diversity and nucleotide mean difference were counted.The evolution divergence among breeds was calculated by Mega 5.10 software,and the phylogenetic tree was constructed.The results showed that the length of mtDNA D-loop region in four high quality chicken breeds was 591 bp,and 549 bp were used for subsequent analysis.The content of A,T,C and G were 27.2% to 27.3%,30.1% to 30.4%,29.5% to 29.8% and 12.8% to 12.9%,respectively,and the average content of G+C was 42.5%.There were 92 polymorphic sites which contained 14 singleton variable sites and 78 parsimony informative sites,and the percentage of transitions and transversions were 89.13% (82/92) and 10.87% (10/92),respectively.The haplotype diversity ranged from 0.682 to 0.835,and the nucleotide diversity ranged from 0.00849 to 0.01167.There were 32 haplotypes in all sequences,which could be divided into clades A,B,C and E,however,most of the individuals belonged to clades B (51.2%) and E (37.6%).The phylogenetic tree results showed that four high quality chicken breeds could be classified as 4 branches which were consistent with the haplotypes classification results.The results indicated that the four high quality chicken populations from Qingyuan had relatively high haplotype and nucleotide diversity and likely shared two or more common maternal lineages.     

Genetic Diversity and Evolution of Danzhou Chicken Assessed with Mitochondrial Complete DNA D-loop Region Sequencing

The objective of this study was to determine the genetic diversity and evolution of Danzhou chicken.The complete mitochondrial DNA (mtDNA) D-loop regions of 36 Danzhou chickens were amplified,sequenced and analyzed.The sequencing reads were compared with the complete mtDNA D-loop sequence of several relative strains of chicken annotated in GenBank,and analyzed by bioinformatics methods.The genetic diversity and its evolutionary relationship in Danzhou chicken were analyzed.The results showed that the lengths of PCR products at the D-loop region were 1 210 bp,with 59.9% being A+T and 40.1% as C+G.The variable regions were 167-1 215 bp,and the high variable regions were mainly 167-367 bp.A total of 20 variable sites that defined 6 haplotypes were identified.The average haplotype diversity (Hd) and average number of nucleotide difference (k) were 0.571 and 6.449,respectively,the nucleotide diversity (Pi) was 0.00537,and the Tajima's D value of neutrality test was 1.61643.6 haplotypes could be grouped to 3 haplogroups (A,B and C) as determined by phylogenic analysis,with B clade,as the most abundant population.It concluded that the genetic diversity and haplotype diversity of Danzhou chicken were relatively low.Phylogenetic tree showed that the genetic composition of Danzhou chicken came from 3 maternal ancestors,Gallus gallus spadiceus,Gallus gallus bankiva and Gallus gallus jabouillei were potential ancestors.There was few influence of exotic lineage detected,which indicated that Danzhou chicken was a relatively conserved breed.     

Genetic Diversity Analysis of Three Newly Discovered Native Chicken Breeds in Yunnan Using mtDNA D-loop Region Sequences

This study was aimed to evaluate the information of their genetic background of Frizzle chicken (FM),Naked-neck chicken (CB) and YN chicken (YN) that were three newly discovered native chicken genetic resources with excellent characteristics,which had been found in Nujiang prefecture and mountainous area of Yunnan province.The variation in a total of 168 individuals sampled from the three chicken populations was assessed using the mitochondrial DNA (mtDNA) D-loop region sequences as genetic marker.The results showed that there were a total of 27 haplotypes were defined in the three native chicken as well as the haplotype diversity of these three chicken were 0.947,0.938 and 0.596,respectively.The nucleotide diversity of these three chicken were 0.01268,0.01434 and 0.00239,respectively.Phylogenetic tree displayed that all 168 individuals distributed in maternal lineage A,B,C,E,F and G.Frizzle chicken contained lineages E,F and G,and Naked-neck chicken contained all 6 lineages,of which the main lineages were E,F and G.YN chicken included lineages E,F and G,and lineage E was the highest percentage in this population.Also,it found that YN chicken was closely related to Gallus gallus murghi,White Plymouth Rock chicken,White Leghorn chicken and New Hampshires chicken,while Naked-neck chicken was closely related to Gallus gallus spadiceus,Gallus gallus jabouillei,Gallus gallus gallus Linnaeus,Indonesian cockfight and Laos chicken.The Frizzle chickens shared more haplotypes with Naked-neck chicken,and the evolutionary relationship between the two species was closer.This study provided a basis for the origin and genetic assessment of three newly discovered Yunnan local chicken breeds.     

Genetic Diversity Analysis of Shaanxi Moschus berezovskii Based on mtDNA Cytb Gene and D-loop Region Sequence

【Objective】 This study was aimed to explore the genetic diversity of Shaanxi Moschus berezovskii population,and understand the genetic information of Moschus berezovskii.【Method】 The hair of Moschus berezovskii was collected to extract DNA,the mitochondrial DNA(mtDNA) cytochrome b(Cytb) gene and D-loop sequences of 43 Moschus berezovskii individuals were determined,and the base composition was counted.All sequences were integrated and compared using ClustalX 2.0 software to obtain nucleotide polymorphic sites (SNPs) in the population.The nucleotide diversity (Pi),number of haplotype (H),haplotype diversity (Hd) and average number of nucleotide differences (K) were calculated by DNASP 5.10 software.The genetic distance among different haplotypes of Cytb gene and D-loop sequences was calculated by Mega 7.0 software,and Neighbor-Joining (NJ) phylogenetic tree was constructed.【Result】 The AT content of Cytb gene and D-loop region were higher than GC content,indicating there was bias in base composition.There were 241 and 383 SNPs of Cytb gene and D-loop region,respectively.The nucleotide diversity of Cytb gene and D-loop region were 0.28343 and 0.07707,and the haplotype diversity was 0.983 and 0.975,respectively,indicating that the population genetic diversity was rich.The genetic distances of 35 haplotypes of Cytb gene ranged from 0.002 to 0.831,and 29 haplotypes of D-loop region ranged from 0.006 to 1.342.The phylogenetic tree showed that there were two mitochondrial lineages,indicating that there were two mitochondrial maternal origins.The evolutionary analysis of D-loop region also supported this conclusion.【Conclusion】 The nucleotide diversity and haplotype diversity of Moschus berezovskii population were high,and the genetic diversity was rich.At the same time further supported the view of Moschus berezovskii and Moshus moschiferus belonged to a branch of the view.     

中国6个地方鸡品种的母系起源

通过对线粒体DNA（mtDNA）D-loop区的测序和比对,探讨了中国6个地方鸡品种的母系起源。结果表明,文昌鸡、鲁西斗鸡、寿光鸡、济宁百日鸡和莱芜黑鸡分别有5、5、5、6和7种单倍型,琅琊鸡只有3种单倍型;6个地方鸡品种聚为3个分支：分支A是1个主要分支,共有17种单倍型,有寿光鸡（10只）、鲁西斗鸡（9只）、文昌鸡（5只）、莱芜黑鸡（6只）、济宁百日鸡（6只）和琅琊鸡（2只）,分别占所分析各地方鸡品种个体数的100%、90%、84%、75%、60%和20%,与分布于老挝、云南红原鸡的3个大陆亚种（G.g.gallus、G.g.jabouile和G.g.spadi-ceus）关系较近;分支B中包含8只琅琊鸡（80%）和1只济宁百日鸡（10%）;分支C中有1只鲁西斗鸡（10%）、1只文昌鸡（16.7%）、2只莱芜黑鸡（25%）和3只济宁百日鸡（30%）;分支B和C分别与来自红原鸡G.g.gallus亚种H19单倍型和H32、H33单倍型聚在一起。推测这6个地方鸡品种分别来自云南、老挝和越南附近地区的红原鸡大陆亚种。基因流是上述品种群体间遗传分化的主要因素。错配分布和Fu＇sFs检验表明,分布于山东的5个地方鸡品种未发生群体扩张。     

MCU在低氧诱导肉鸡心肌细胞线粒体损伤中的作用

旨在探讨线粒体钙单向转运体（mitochondrial calcium uniporter,MCU）介导线粒体Ca²⁺转运是否参与低氧诱导的肉鸡心肌细胞线粒体损伤。试验通过分离白羽肉鸡鸡胚原代心肌细胞,在低氧条件下（3% O₂,5% CO₂,92% N₂）培养24、48、72 h,同时使用RU360抑制MCU的表达并在低氧条件下处理72 h后,使用流式细胞术检测细胞内Ca²⁺浓度、线粒体Ca²⁺浓度、线粒体活性氧水平和线粒体膜电位,检测MCU及其调节因子的mRNA和蛋白表达。结果显示,通过差速贴壁方法培养的心肌细胞纯度可达90%以上;低氧培养24 h,诱导心肌细胞MCU、MICU1 mRNA表达增加（P<0.05）,胞浆和线粒体内Ca²⁺浓度显著上升（P<0.05）,线粒体膜电位增加（P<0.05）;低氧培养48 h,诱导MCUR1和MICU1 mRNA表达减少（P<0.05）,细胞Ca²⁺浓度上升（P<0.05）;低氧培养72 h,诱导MCU mRNA表达增加（P<0.01）,细胞和线粒体内Ca²⁺增加（P<0.01）,线粒体膜电位下降（P<0.01）,活性氧增加（P<0.01）。低氧处理72 h后,与低氧组相比,RU360预处理组细胞和线粒体内Ca²⁺减少,线粒体膜电位上升,活性氧生成减少（P<0.01）,MCU mRNA表达减少（P<0.01）。结果表明：低氧诱导MCU上调导致线粒体钙超载,促使线粒体功能降低并发生损伤,进而心肌细胞发生损伤;抑制MCU表达可以减轻低氧诱导的心肌细胞线粒体钙超载,保护线粒体。     

外源胰岛素和能量限饲对鸡PPP1R3C表达的效应

旨在检测PPP1R3C在爱拔益加肉鸡不同组织中的表达情况，探究外源胰岛素和能量限饲对鸡体胰岛素敏感组织中PPP1R3C表达的影响。试验一，取不同发育阶段的雌性肉鸡（E14、E19、D7和D21，n=10）组织样，通过qRT-PCR技术检测PPP1R3C在不同时期胸肌中的表达；试验二，腹腔注射胰岛素（INS）或PBS，取两组注射后不同时间点（0、15、120和240 min，n=5）的D24雄性肉鸡组织样，检测PPP1R3C在肉鸡不同组织中的表达，探究外源胰岛素处理对肉鸡胰岛素敏感组织中PPP1R3C表达的影响；试验三，取D18雌性肉鸡，一组饲喂常规日粮（n=20），另一组饲喂限制30%能量的日粮（n=20），饲喂至48天屠宰取样，探究30%能量限饲对肉鸡PPP1R3C表达的影响；试验四，D7雌性肉鸡随机分为3组，对照组、15%能量限饲组和15%蛋白限饲组（n=10），分别饲养至D21屠宰取样，探究能量限饲是否具有剂量依赖性。结果表明：1）PPP1R3C在胸肌组织中高表达，其次是心和腿肌组织（P<0.05）。2）PPP1R3C表达量呈现了明显随鸡发育而升高的趋势。3） INS注射显著下调了胸肌中PPP1R3C的表达，在注射后120 min时PPP1R3C的表达显著低于0和15 min （P<0.05）；PBS注射后胸肌中PPP1R3C的表达没有显著差异，在注射后120和240 min时，INS组PPP1R3C表达显著低于PBS组（P<0.05）。INS注射也降低了肝中PPP1R3C的表达，在INS处理15 min时PPP1R3C的表达已显著低于0 min （P<0.05）；PBS注射后肝中PPP1R3C表达处于动态平衡，在注射后120 min时，INS组PPP1R3C表达显著低于PBS组（P<0.05）。胰岛素注射后在腹脂中出现了与胸肌和肝相反的结果，在胰岛素注射后15 min时PPP1R3C的表达显著高于0、120、和240 min （P<0.05），而0、120、和240 min之间没有显著差异；PBS注射后腹脂中PPP1R3C表达没有显著变化，在注射后15 min时，INS组PPP1R3C表达量显著高于PBS组（P<0.05）。4）30%能量限饲导致PPP1R3C在胸肌和肝中的表达均显著下调（P<0.05）。5）15%能量限饲和15%蛋白限饲不能显著影响胸肌中PPP1R3C的表达。以上研究表明，PPP1R3C在胸肌中表达最高，并随着个体发育表达上升，且外源胰岛素对PPP1R3C的表达效应具有明显的组织特异性。30%能量限饲可产生类似于外源胰岛素的效应，且能量限饲存在一定的剂量依赖性，本研究结果为进一步揭示鸡PPP1R3C功能奠定了基础。     

饲粮精氨酸水平对肉仔鸡免疫功能及其抗FAdV-4影响的研究

本试验旨在研究饲粮精氨酸水平对肉仔鸡免疫功能及其抗禽腺病毒I群4型（fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）的影响。选取1日龄罗斯（Ross）308肉仔鸡300只,随机分为5组（每组5个重复,每个重复12只）,设置5个饲粮精氨酸水平组,分别为0.96%、1.20%、1.44%、1.68%和1.92%,试验鸡饲养至21日龄,各重复随机选取4只测定血清免疫指标和免疫相对器官指数。随后各重复再次随机选取6只,并分为感染组和对照组,感染组肌肉注射FAdV-4 NP毒株0.2 mL（TCID₅₀=10^-6.23/0.01 mL）,对照组肌肉注射等量灭菌生理盐水,感染2 d后,统计死亡率、发病率,ELISA测定肝组织iNOS水平、qPCR测定肝iNOS mRNA表达量及病毒载量。结果表明：1）饲粮精氨酸水平为1.44%、1.68%和1.92%时,均能显著提高脾脏指数（P<0.05）且精氨酸水平为1.68%能显著提高胸腺指数（P<0.05）,而精氨酸水平为0.96%会显著降低脾脏、胸腺和法氏囊指数（P<0.05）。2）1.68%精氨酸水平组能显著提高血清球蛋白（GLO）、IgG水平和球蛋白/白蛋白（G/A）比值（P<0.05）;精氨酸水平为0.96%显著降低血清球蛋白和IgG水平（P<0.05）。3）精氨酸水平为0.96%可显著降低肉仔鸡血清中IL-1β、TNF-α、iNOS和NO水平（P<0.05）,而1.68%和1.92%精氨酸水平组均能显著提高肉仔鸡血清中IL-1β、TNF-α、IFN-γ和iNOS水平（P<0.05）。4）肉鸡感染FAdV-4后,0.96%精氨酸水平组的死亡率会显著高于1.20%、1.44%、1.68%和1.92%组（P<0.05）。5）ELISA测定结果显示,1.44%、1.68%和1.92%精氨酸水平组能显著提高感染后的肝组织iNOS水平。6）1.44%、1.68%和1.92%精氨酸水平组均能显著提高肝iNOS mRNA表达水平（P<0.05）;肉鸡感染FAdV-4,iNOS mRNA水平均会显著降低（P<0.05）,1.44%、1.68%和1.92%精氨酸水平组能提高感染FAdV-4后肝iNOS mRNA水平（P<0.05）并显著降低肝的病毒载量（P<0.05）。由此可见,肉仔鸡饲粮中精氨酸的不足会降低其机体的免疫功能及抗FAdV-4病毒能力。提高肉仔鸡饲粮中精氨酸水平不仅能提高免疫器官指数、血清免疫因子水平及肝iNOS mRNA表达水平,降低肝的病毒载量,从而提高机体免疫功能和抗病毒能力。     

长顺绿壳蛋鸡SLC8A1基因多态性及其对蛋壳品质的影响

【目的】探究溶质载体家族8成员A1（solute carrier family 8 member A1，SLC8A1）基因多态性对长顺绿壳蛋鸡蛋壳品质的影响，为今后改善蛋壳品质提供参考。【方法】根据GenBank数据库中鸡SLC8A1基因序列（登录号：NC_052534.1），使用Primer Premier 3.0软件设计引物进行PCR扩增，采用直接测序法筛选SLC8A1基因SNP位点，并利用SPSS 22.0软件检测SNP位点不同基因型蛋壳指标的差异。【结果】在SLC8A1基因外显子11上共发现3个新的SNPs：g.16085681 T>C、g.16085766 C>T和g.16085781 T>C，共存在3种单倍型：H1（TCT）、H2（CTC）、H3（TTC），以及6种双倍型：H1H1（TTCCTT）、H1H2（TCTCTC）、H1H3（TTTCTC）、H2H2（CCTTCC）、H2H3（CTTTCC）、H3H3（TTTTCC）。χ²检验结果显示，3个SNPs位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05），均表现为中度多态。关联性分析结果显示，g.16085681 T>C位点TC基因型个体蛋壳强度显著高于TT基因型（P<0.05），g.16085681 T>C位点和单倍型H2（C_16085681T_16085766C_16085781）对SLC8A1基因mRNA二级结构产生明显的影响；g.16085766 C>T位点CC基因型个体蛋形指数显著高于TT基因型（P<0.05）；双倍型H1H1、H1H3个体蛋形指数显著高于H2H3，H2H3个体蛋壳强度和蛋壳厚度均显著高于H1H3，H1H2、H2H2个体蛋重均显著高于H3H3（P<0.05）。【结论】g.16085681 T>C位点可作为影响蛋壳强度的标记位点，g.16085766 C>T位点可作为影响蛋形指数的标记位点，双倍型H2H3可能是蛋壳强度和蛋壳厚度的有利双倍型。