猪传染性胃肠炎核酸疫苗免疫小鼠后的血清抗体IgG检测

本试验旨在对猪传染性胃肠炎核酸疫苗(含有TGEV-S基因质粒)开展免疫原性研究,为科学评价该TGE核酸疫苗的免疫效果提供依据。通过灌胃口服免疫TGE核酸疫苗诱导小鼠机体产生特异性免疫,定期采样监测其血清抗体产生规律,采用间接ELISA方法测定免疫小鼠血清抗体IgG的抗体效价。结果发现:TGE核酸疫苗免疫小鼠后有效地激发了TGEV特异性抗体,首免后第二周开始就能检测到血清抗体应答,且该组抗体水平一直都与空载体组和PBS空白对照组之间呈极显著差异(P0.01),表现出良好的免疫原性。     

禽核酸疫苗的研究进展

本文对禽用（鸡、鸭、火鸡）核酸疫苗的研究进行综述。首先描述禽用核酸疫苗的进展：病原,质粒以及免疫途径。其次,描述提高核酸疫苗免疫效果的方式：接种途径,疫苗剂量以及首免时间,增加宿主细胞对质粒的摄入,添加免疫增强分子,优化质粒骨架和密码子,疫苗抗原的选择,异源性的首免-加强免疫策略。最后,描述禽用核酸疫苗的其他特点：接种后质粒的去向,免疫反应的特点以及核酸疫苗的其他用途。     

犬新孢子虫吉林株SAG1基因在BHK21细胞中的表达及免疫学评价

将构建成功的重组质粒pVAX-SAG1转染至BHK21细胞上,通过IFAT与RT-PCR方法检测重组质粒在BHK21细胞上的表达情况。大量提取重组质粒pVAX-SAG1,免疫Balb/c小鼠,分别在首免前、二免前、三免前以及三免后的第1、2、3周进行小鼠断尾采血,应用ELISA方法与流式细胞技术检测体液免疫水平和细胞免疫水平。结果表明,转染的重组质粒pVAX-SAG1在BHK21细胞中得到瞬时表达,并且重组质粒pVAX-SAG1免疫Balb/c小鼠后,在体液免疫水平上,pVAX-SAG1组与空载体pVAX1和PBS对照组差异极显著（P〈0.01）;在细胞免疫水平上,pVAX-SAG1组与PBS对照组差异显著（P〈0.05）。本试验为新孢子虫基因工程核酸疫苗的进一步研究奠定了基础。     

铜绿假单胞菌oprL和oprF基因二价组合DNA疫苗初免-灭活疫苗加强免疫效果的研究

为探索铜绿假单胞菌oprL和oprF基因的二价组合DNA疫苗pOPRL+pOPRF初免-灭活疫苗加强免疫的效果,本实验以铜绿假单胞菌二价组合DNA疫苗pOPRL+pOPRF免疫BALB/c小鼠后再以灭活疫苗加强免疫,根据两种疫苗的免疫次数分为初免-加强免疫1组和初免-加强免疫2组,同时设置二价组合DNA疫苗单独免疫组、灭活疫苗单独免疫组以及生理盐水对照组。免疫后间接ELISA法测定小鼠血清抗体水平、MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平,双抗体夹心ELISA测定小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γ、IL-2和IL-4的水平。三免两周后将铜绿假单胞菌以1.35×10~(10)cfu/只的剂量对各组小鼠进行攻毒试验,测定攻毒后各组小鼠的保护率。结果显示DNA疫苗初免-灭活疫苗加强免疫诱导的小鼠血清抗体水平、刺激指数(SI)值及小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γ和IL-2含量显著高于DNA疫苗单独免疫组(p0.05)。且初免-加强免疫1组小鼠的SI值及分泌的IFN-γ和IL-2含量显著高于灭活疫苗组(p0.05),但各组小鼠分泌的IL-4含量无显著差异(p0.05)。初免-加强免疫1组、初免-加强免疫2组、灭活疫苗组和DNA疫苗单独组的保护率分别为92%、80%、84%和72%。表明二价组合DNA疫苗初免-灭活疫苗加强免疫策略可以诱导小鼠产生较高水平的抗体和Th1型细胞免疫应答,并可为小鼠提供较好的保护率。     

猪瘟、猪伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征的免疫程序设计

选择猪繁殖与呼吸综合征病毒和抗体阴性、猪伪狂犬病抗体阴性、猪瘟抗原阴性的20头仔猪,随机分成4组,分别为试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组及对照组,分别设计3种猪瘟、猪伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征免疫程序,首免后第2周开始每隔2周分别采血检测抗体.试验结果表明只有试验Ⅰ组的免疫程序可行,即：21日龄进行猪瘟疫苗首免,60日龄加强免疫1次,母猪分娩前10日龄进行猪伪狂犬疫苗首免,35日龄加强免疫1次,35日龄进行猪繁殖与呼吸综合征疫苗首免,60日龄加强免疫1次.     

猪瘟、猪伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征免疫程序设计

选择猪繁殖与呼吸综合征病毒和抗体阴性、猪伪狂犬病抗体阴性、猪瘟抗原阴性的20头仔猪,随机分成4组,分别为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,分别设计3种猪瘟、猪伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征免疫程序,首免后第2周开始每隔2周分别采血检测抗体。试验结果表明只有试验Ⅰ组的免疫程序可行,即:21日龄进行猪瘟疫苗首免,60日龄加强免疫1次,母猪分娩前10日龄进行猪伪狂犬疫苗首免,35日龄加强免疫1次,35日龄进行猪繁殖与呼吸综合征疫苗首免,60日龄加强免疫1次。     

禽用DNA疫苗免疫效果增强的策略

对于人和动物的传染病来说,DNA疫苗免疫是一种很有希望的免疫方式。经过25年的发展,已经上市的核酸疫苗仍屈指可数。禽用核酸疫苗一直是禽类疫苗的研究热点,文中描述提高核酸疫苗免疫效果的方式：接种途径,疫苗剂量及首免时间,增加宿主细胞对质粒的摄入,添加免疫增强分子,优化质粒骨架和密码子,疫苗抗原的选择,异源性的首免-加强免疫策略。     

猪瘟、O型口蹄疫及高致病性猪繁殖与呼吸综合征免疫程序试验

选择猪繁殖与呼吸综合征病毒和抗体阴性、口蹄疫病毒感染抗体阴性、猪瘟抗原阴性的30头仔猪(35日龄阉割),随机分成6组(其中1组为空白对照组),分别设计5个免疫程序进行猪瘟、O型口蹄疫和高致病性猪繁殖与呼吸综合征免疫,首免后第2周开始每周分别采血检测抗体,至112 d。试验结果表明有2个免疫程序可行,即:28日龄左右用猪瘟、口蹄疫、高致病性猪繁殖与呼吸综合征3种疫苗同时分点注射,间隔28~35 d再加强免疫1次;或28日龄左右用猪瘟、口蹄疫疫苗同时分点注射,间隔28~35 d再加强免疫1次,高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗在35日龄首免,间隔14~28 d加强免疫1次。     

乳酸杆菌DNA对鸡新城疫油苗和禽流感油苗免疫增强作用的研究

本试验提取乳酸杆菌L.caseiZhang的DNA作佐剂,按每只鸡100ug剂量添加到新城疫油苗及禽流感病毒H5亚型油苗中。新城疫和禽流感试验分别设空白对照组(Ⅰ组)、无佐剂疫苗组(Ⅱ组)、细菌核酸佐剂组(Ⅲ组)、弗氏完全佐剂组(Ⅳ组)、弗氏完全佐剂核酸免疫协同组(Ⅴ组)5组进行免疫,分别于15和28日龄首免,两周后二免。二免后每周采样用血凝及血凝抑制法检测血清抗体水平,并用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖反应。结果显示,添加核酸组鸡HI抗体和T淋巴细胞增殖反应均极显著高于单独免疫疫苗组(P<0.01);而免疫组均极显著高于空白对照组(P<0.01);细菌核酸组HI抗体略高于弗氏完全佐剂组,但T淋巴细胞转化率极显著高于弗氏完全佐剂组(P<0.01);同时弗氏完全佐剂核酸免疫协同组与核酸组无显著性差异。由此得出,乳酸杆菌L.caseiZhangDNA对新城疫油苗和禽流感病毒H5亚型油苗具有免疫增强作用;乳酸杆菌L.caseiZhangDNA与弗氏完全佐剂无明显的免疫协同作用。     

犬瘟热病毒融合蛋白、血凝蛋白、基质蛋白和核衣壳蛋白基因DNA联合免疫的研究

为研究犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)、血凝蛋白(H)、基质膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)基因核酸联合免疫的效力,本研究分别构建了表达经哺乳动物密码子优化的CDV F、H、M和N蛋白基因的真核重组表达质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM和p CAGG-CDVN;将其分别转染BHK-21细胞后通过间接免疫荧光试验表明,目的蛋白均获得正确表达。此外,将等量混合的重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM(3组份DNA疫苗)或重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM、p CAGG-CDVN(4组份DNA疫苗),分别以500μg/只经肌肉注射途径免疫A组(6只)或B组(6只)比格犬,间隔4周以相同剂量、途径加强免疫一次,并于初次免疫前、后不同时间检测血清CDV中和抗体。中和试验结果显示,A组和B组免疫犬,二免4周时,CDV中和抗体滴度平均值达到峰值,分别为6 log2和5.64 log2;在初免54周时,CDV中和抗体滴度均仍然维持5 log2。因此,3组份DNA疫苗为具有良好应用前景的犬瘟热候选疫苗。