鸡γ-干扰素在毕赤酵母中的表达及其生物活性检测

将鸡γ-干扰素(Ch IFN-γ)基因克隆至p PICZαA,以线性化质粒p PICZαA-IFN-γ电转化酵母GS115细胞,筛选出表达重组Ch IFN-γ(r Ch IFN-γ)的酵母菌株。r Ch IFN-γ通过离子交换层析纯化后,经水泡性口炎病毒(VSV)检测其抗病毒活性为10 240 IU/m L。以r Ch IFN-γ与H9亚型禽流感灭活疫苗联合免疫SPF鸡,使用r Ch IFN-γ试验鸡的血清HI抗体水平显著高于未使用r Ch IFN-γ试验鸡(P0.05);用H9亚型禽流感病毒攻击后,使用r Ch IFN-γ试验鸡排毒率显著低于未使用r Ch IFN-γ试验鸡(P0.05),说明r Ch IFN-γ具有佐剂的活性。     

重组鸡干扰素对E.tenella卵囊免疫后肠上皮组织结构的影响

取AA肉鸡,在其7日龄和14日龄时分别给予柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊进行首免和二免,并同时肌肉注射5 000 U重组鸡γ干扰素(rCh IFN-γ)后,于21日龄以同源E.tenella攻虫。试验结果表明,rCh IFN-γ协同球虫活卵囊免疫可减少由于球虫病造成的体质量下降,降低OPG值和肠道病变记分,提高抗球虫指数(AC I);同时还发现,rCh IFN-γ能够显著增加肠道绒毛高度、肠隐窝深度、刷状缘厚度(=α0.05)。由此表明,rCh IFN-γ可以减轻由于球虫感染所造成的肠道黏膜损伤,促进肠道的吸收功能,进而减轻球虫病所造成的增重损失,对球虫活卵囊疫苗的免疫有一定的免疫增强效果。     

复方中西药合剂治疗鸡球虫病试验研究

为找到防治黑龙江省延寿县鸡球虫病的有效药物,本试验所采用复方中药、复方中西药、西药对人工感染的鸡柔嫩艾美耳球虫雏鸡进行试验研究,通过对试验鸡的肠道病变记分、血便记分、免疫器官指数、抗球虫指数、氧化与抗氧化指标等的测定,评价其治疗效果。结果表明:复方中西药合剂治疗组的效果最好,雏鸡存活率达到100%,相对增重率为92%,抗球虫指数为186,肠道病变记分结果和血便记分结果最低,连续用药3d,对鸡球虫病疗效确切,且中药浓度为0.75 g/mL时治疗效果最佳。该研究为中西药联合用药治疗鸡球虫病提供了科学依据。     

内源性NO在雏鸡球虫感染中的作用

以腹腔注射途径给予感染柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella)雏鸡细菌脂多糖 (L PS)和地塞米松 (Dex) ,用铜离子活化镉还原法检测血清 NO- 2 水平 ,并通过测定 NBT阳性细胞百分率、雏鸡增重、免疫器官的脏器系数、OPG值以及盲肠病变记分等指标 ,探讨了 NO在雏鸡感染球虫过程中的作用。试验结果表明 ,与空白对照组相比 ,给予 L PS可使 NBT阳性细胞百分率明显升高 (P<0 .0 1) ,并使盲肠病变及球虫感染引起的增重下降有所减轻 ,这提示 L PS对雏鸡具一定的保护作用 ;而给予 Dex不仅降低了感染雏鸡血清 NO- 2 的水平、NBT阳性细胞百分率、增重和胸腺的脏器系数 ,还增加了 OPG值和盲肠病变记分 ,说明在雏鸡感染球虫过程中 ,Dex会减少 NO的生成 ,并使雏鸡抗球虫免疫力下降。     

重组鸡IL-2的抗球虫作用

鸡白细胞介素2(Ch IL-2)是一种重要的细胞因子,对Ch IL-2的抗球虫作用做了初步研究,分别在14日龄和21日龄给实验雏鸡胸部肌肉注射不同剂量的重组Ch IL-2蛋白,28日龄口服接种1×105个活球虫卵囊,结果表明,重组Ch IL-2蛋白能降低相对卵囊产量、减少盲肠病变、提高相对增重。其中以注射250μg重组Ch IL-2蛋白的试验组抗球虫效果最好,相对卵囊产量为23.26%,盲肠病变记分分别为0.4,相对增重率为97.80%,综合抗球虫指数(AC I)达到192.8。抗球虫效果良好,明显的优于其他试验组。     

鸡球虫苗(LCV-2号)对笼养及平养鸡的免疫效果

在试验条件下,研究了鸡球虫苗(LCV-2号)对笼养和平养鸡的免疫效果.笼养鸡免疫试验比较了笼养鸡空白对照组、攻虫对照组、免疫不攻虫组、免疫攻虫组试验期间的相时增重率、存活率、平均每克粪便卵囊(OPG)值、攻虫后第8天的肠道病变和综合抗球虫指数.结果表明,免疫不攻虫组、免疫攻虫组攻虫后没有鸡只死亡;免疫不攻虫组相对增重率最高,为97.74%,显著(P<0.05)高于免疫攻虫组和攻虫对照组(89.72%和69.85%);攻虫对照组攻虫期间平均OPG值最高,为1.26×105,而免疫攻虫纽仅为5.813×104;攻虫后第8天肠道平均病变计分,空白对照组0分,攻虫对照组、免疫不攻虫组及免疫攻虫组分别为4、1、2分;4组抗球虫指数(ACI)依次为200、62.18、192.74和178.76.平养鸡免疫试验,比较了平养鸡空白对照组、不免疫不攻虫组和免疫攻虫组(2组在同1个圈)的平均OPG值、相对增重率、攻虫后第8天的肠道病变.结果表明,和免疫攻虫组鸡群一起饲养的不免疫不攻虫组鸡群增重较快,相对增重率为99.39%,而免疫攻虫组鸡群为91.67%,但差异不显著;攻虫后第8天训检肠道平均病变计分,空白对照组0分,不免疫不攻虫组和免疫攻虫组分别为1、3分;攻虫期间免疫攻虫组鸡群平均OPG为6.025×105、不免疫不攻虫组也达3.675×105,免疫期间分别为7.5×104、3.5×104;3组ACI依次为200、193.39和175.76.从总体看,LCV-2安全性高,对笼养鸡和平养鸡都有较强的免疫效果,且对平养鸡的效果优于笼养鸡.     

复方苦参对鸡球虫病疗效研究

通过人工感染柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊,制备鸡球虫病模型,考察复方苦参的临床疗效。将90只15日龄试验鸡随机分为6组,分别为中药治疗组(高、中、低)、西药治疗组、感染组和空白组。攻虫后第4天开始给药,中药组给予相应浓度的苦参药液1 m L,西药组用百球清,按说明书给予相应剂量,连续3 d,1次/d。对试验鸡肠道病变记分、血便记分、免疫器官指数、抗球虫指数、氧化及抗氧化指标进行测定,评价其治疗效果。结果显示,中剂量组复方中药治疗效果最好,存活率达到100%,相对增重率为92%,抗球虫指数为186,肠道病变记分结果和血便记分结果最低。复方苦参能够提高感染柔嫩艾美耳球虫病雏鸡抗氧化能力,使雏鸡血清和组织中的CAT、NOS、SOD、GSH-Px活性增强,NO、MDA含量降低。提示复方苦参对鸡柔嫩艾美耳球虫病疗效确实,优于百球清,连续用药3 d可有效治疗鸡球虫病,中药生药浓度为0.75 g/m L时治疗效果最佳。     

L-NMMA对鸡球虫早熟弱毒疫苗免疫鸡增重的影响

为了研究鸡球虫早熟弱毒疫苗对免疫鸡增重的影响及一氧化氮合成酶抑制剂(L-NMMA)对免疫鸡增重和免疫效果的影响。取40只SPF雏鸡,分为空白对照组(C1、C2)和单剂量重复接种组(T1、T2),T1、T2组按推荐免疫剂量单剂量重复接种鸡球虫早熟弱毒疫苗,C1和T1、C2和T2分别于二次接种后第7、14天逐只空腹称重,剖检记录十二指肠、空肠和盲肠病变记分,取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃、肌胃、十二指肠、空肠和盲肠进行病理组织学检查。另选取40只SPF雏鸡,分为空白对照组C20、攻毒对照组T21、免疫对照组T22和免疫加药组T23,T22和T23按推荐免疫剂量两次免疫鸡球虫早熟弱毒疫苗,T23在免疫的同时腹腔注射L-NMMA,二免后第14天T21、T22和T23均接种鸡球虫混合强毒,测定SPF雏鸡平均增重、相对增重、肠道(十二指肠、空肠和盲肠)病变记分、病变记分减少率(RLS)、血便记分、死亡率及卵囊产量等指标。结果显示,接种组的平均增重显著低于未接种组(P<0.05),接种组的十二指肠、空肠和盲肠有轻微病变且黏膜上皮细胞均有不同程度损伤和脱落;免疫加L-NMMA组一免、二免后及攻毒后试验鸡的平均增重均极显著高于免疫攻毒对照组(P<0.01),且与空白对照组鸡的平均增重无显著差异(P>0.05),且免疫对照组和免疫加药组肠道病变记分和卵囊产量无显著差异(P>0.05)。说明鸡球虫早熟弱毒疫苗对雏鸡肠道有轻微损伤,且对鸡增重有一定影响;L-NMMA可降低鸡球虫早熟弱毒疫苗对试验鸡增重的影响,且不影响疫苗的免疫效果。     

L-NMMA对鸡球虫早熟弱毒疫苗免疫鸡增重的影响

为了研究鸡球虫早熟弱毒疫苗对免疫鸡增重的影响及一氧化氮合成酶抑制剂(L-NMMA)对免疫鸡增重和免疫效果的影响。取40只SPF雏鸡,分为空白对照组(C1、C2)和单剂量重复接种组(T1、T2),T1、T2组按推荐免疫剂量单剂量重复接种鸡球虫早熟弱毒疫苗,C1和T1、C2和T2分别于二次接种后第7、14天逐只空腹称重,剖检记录十二指肠、空肠和盲肠病变记分,取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃、肌胃、十二指肠、空肠和盲肠进行病理组织学检查。另选取40只SPF雏鸡,分为空白对照组C20、攻毒对照组T21、免疫对照组T22和免疫加药组T23,T22和T23按推荐免疫剂量两次免疫鸡球虫早熟弱毒疫苗,T23在免疫的同时腹腔注射L-NMMA,二免后第14天T21、T22和T23均接种鸡球虫混合强毒,测定SPF雏鸡平均增重、相对增重、肠道(十二指肠、空肠和盲肠)病变记分、病变记分减少率(RLS)、血便记分、死亡率及卵囊产量等指标。结果显示,接种组的平均增重显著低于未接种组(P0.05),接种组的十二指肠、空肠和盲肠有轻微病变且黏膜上皮细胞均有不同程度损伤和脱落;免疫加L-NMMA组一免、二免后及攻毒后试验鸡的平均增重均极显著高于免疫攻毒对照组(P0.01),且与空白对照组鸡的平均增重无显著差异(P0.05),且免疫对照组和免疫加药组肠道病变记分和卵囊产量无显著差异(P0.05)。说明鸡球虫早熟弱毒疫苗对雏鸡肠道有轻微损伤,且对鸡增重有一定影响;L-NMMA可降低鸡球虫早熟弱毒疫苗对试验鸡增重的影响,且不影响疫苗的免疫效果。     

柔嫩艾美耳球虫AMA1基因DNA疫苗的免疫保护效果

本研究旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1(Apical membrane antigen 1,Et AMA1)基因的DNA疫苗对雏鸡柔嫩艾美耳球虫人工感染的免疫保护效果。将Et AMA1基因和鸡IFN-γ基因插入真核表达载体p CAGGS中,分别构建了真核表达重组质粒p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ。将重组质粒p CAGGS-Et AMA1转染进293T细胞中,经间接免疫荧光和Western blot实验鉴定,观察其在体外表达情况。将p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ于7日龄和14日龄腿部肌肉注射免疫雏鸡,21日龄人工感染1×104个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,第29日龄时处死试验鸡,以平均增重、卵囊产量和病变记分来评价重组质粒的免疫保护效果。结果显示,p CAGGS-Et AMA1转染的293T细胞出现明显的红色荧光;两种真核表达重组质粒免疫组鸡的平均增重与未攻虫组的平均增重差异不显著,不具有统计学意义,而未免疫攻虫组则与未攻虫组在增重方面差异具有显著统计学意义;免疫组鸡相较于未免疫攻虫组在病变记分方面显著下降;免疫组的卵囊减少率分别为67.43%和72.89%;p CAGGSEt AMA1-IFN-γ组在增重、盲肠病变记分和卵囊减少率方面都优于p CAGGS-Et AMA1组,但差异不具有统计学意义。表明构建的2种重组质粒对雏鸡柔嫩艾美耳球虫感染有一定的免疫保护效果。     

姜黄素肠道修复剂对鸡球虫病疫苗免疫效果的影响

为研究姜黄素肠道修复剂对鸡球虫病疫苗免疫效果的影响,在球虫疫苗免疫时加入姜黄素肠道修复剂,通过观察测定免疫组鸡群的精神状况、首免卵囊排泄量、疫苗反应期的肠道病变记分和增重以及免疫后21 d攻虫的保护效果进行综合评价。结果显示:在免疫期,姜黄素实验组鸡只的精神状况良好,首免卵囊量排泄正常,疫苗反应期的肠道病变记分和增重比未加姜黄素实验组的要好些;21 d攻虫后,姜黄素实验组的相对增重高于未加姜黄素实验组,但差异性不显著(P0.05),而且姜黄素实验组的肠道病变记分和粪便记分均低于未加姜黄素实验组。试验表明,姜黄素在球虫疫苗免疫过程中能够修复肠道损伤、提升肠道健康,对球虫疫苗免疫具有较好的辅助性作用。     

重组鸡γ干扰素对E.tenella卵囊免疫后肠上皮组织结构的影响

取AA肉鸡，在其7日龄和14日龄时分别给予柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）孢子化卵囊进行首免和二免，并同时肌肉注射5000U重组鸡γ干扰素（rChIFN-γ）后，于21日龄以同源E．tenella攻虫。试验结果表明，rChIFN-γ协同球虫活卵囊免疫可减少由于球虫病造成的体质量下降，降低OPG值和肠道病变记分，提高抗球虫指数（ACI）；同时还发现，rChIFN-γ能够显著增加肠道绒毛高度、肠隐窝深度、刷状缘厚度（α=0．05）。由此表明，rChIFN-γ可以减轻由于球虫感染所造成的肠道黏膜损伤，促进肠道的吸收功能，进而减轻球虫病所造成的增重损失，对球虫活卵囊疫苗的免疫有一定的免疫增强效果。     

堆型艾美耳球虫早熟株与强毒株致病性和繁殖力的比较

为了比较堆型艾美耳球虫（E．acervulina）早熟株与强毒株的致病性和繁殖力情况,通过测定接种 E．acervulina 早熟株与强毒株后鸡只的精神状态、临床症状、增重、病变记分和卵囊产量,表明早熟株的排卵囊高峰出现在第5天,比强毒株提前1 d,早熟株的繁殖力是强毒株的85．8％;早熟株感染后对鸡只增重的影响较小,接种剂量在2．40×104个卵囊／羽之内时,相对增重率均大于90．0％,早熟株组鸡的肠道病变记分显著低于同剂量的强毒株组的肠道病变记分（P ＜0．05）。由此认为,该早熟株符合球虫早熟株的低致病性特性,可用于鸡球虫病早熟苗的制备。     

增效助悬剂对堆型艾美耳球虫活卵囊免疫效果的影响

为检验本课题研制的球虫疫苗免疫增效助悬剂对疫苗免疫效果的功效。通过测定免疫攻毒鸡的相对增重率、死亡率、病变记分、卵囊减少率等来观察和分析鸡球虫病疫苗免疫增效助悬剂对疫苗免疫产生期的影响。结果显示,与饮水对照组相比,增效助悬剂组的相对饮水率为105.89%;一次免疫,增效剂免疫组和免疫对照组鸡群已能对大剂量强毒株攻击产生保护力,但病变记分均≥1,相对增重未达到80%,未达到良好免疫效果;二次免疫,增效剂免疫攻毒组于二免后第6天产生良好免疫保护,免疫对照组于二免后第7天达到良好免疫效果。表明球虫疫苗免疫增效助悬剂不影响雏鸡饮水,且使用该助悬剂可缩短免疫产生期。     

复方中草药与鼠李糖乳杆菌共发酵产物对鸡球虫的治疗效果研究

为探究复方中草药与鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus, L. rhamnosus)共发酵产物对鸡球虫病的治疗效果,本研究将复方中草药(青蒿、常山、白头翁、仙鹤草、槐花、黄芩、甘草)与L. rhamnosus共发酵12h,患球虫病雏鸡灌服共发酵产物,连续用药5日,观察雏鸡临床症状,并检测各组雏鸡的相对增重率,盲肠病变记分,盲肠病理切片,每克粪便卵囊值(OPG),并计算各组药物抗球虫指数(ACI)。结果显示,服用复方中药发酵制剂后的感染球虫的雏鸡体重显著上升,与对照组差异显著(P＜0.05)。此外,发酵产物可以明显减轻盲肠病理变化,同时可以降低受感染雏鸡卵囊的排出量。发酵产物组的ACI为130.59,达到中等抗球虫水平。复方中草药与L. rhamnosus共发酵提高了中药对鸡球虫病的治疗效果,为益生菌中药发酵治疗球虫病奠定基础。     

复方中草药与鼠李糖乳杆菌共发酵产物对鸡球虫病的治疗效果研究

为探究复方中草药与鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus,L.rhamnosus)共发酵产物对鸡球虫病的治疗效果,将复方中草药(青蒿、常山、白头翁、仙鹤草、槐花、黄芩、甘草)与L.rhamnosus共发酵12 h,患球虫病雏鸡灌服共发酵产物,连续用药5 d,观察雏鸡临床症状,并检测各组雏鸡的相对增重率,盲肠病变记分,制作盲肠病理切片,计算每克粪便卵囊值(OPG)及各组药物抗球虫指数(ACI)。结果表明,服用复方中药发酵制剂后的感染球虫的雏鸡体重显著高于对照组(P0.05);发酵产物可以明显减轻盲肠病理变化,同时可以降低受感染雏鸡卵囊的排出量;发酵产物组的ACI为130.59,达到中等抗球虫水平。复方中草药与L.rhamnosus共发酵提高了中药对鸡球虫病的治疗效果,为益生菌中药发酵治疗球虫病奠定了基础。     

绞股蓝内生真菌JY25胞外多糖对蛋雏鸡生长性能和肠黏膜免疫功能的影响

试验旨在探讨绞股蓝内生真菌JY25胞外多糖(JY25P)对蛋雏鸡生长性能和肠黏膜免疫功能的影响。将300羽健康的1日龄三黄蛋雏鸡,随机分为5组(每组设3个重复,每个重复20羽):Ⅰ组为灌服无菌水的空白对照组;Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组分别为灌服0.04%、0.08%和0.12%JY25P的试验组;Ⅴ组为灌服0.08%黄芪多糖的阳性对照组。结果表明:1)与Ⅰ组相比,Ⅳ组蛋雏鸡平均日增重显著提高了15.86%(P0.05),料重比极显著降低了24.13%(P0.01)。2)与Ⅰ组相比,试验各阶段,Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组均能显著提高蛋雏鸡血清中新城疫抗体效价(P0.05)。3)与Ⅰ组相比,在15日龄和20日龄,Ⅳ组可以极显著增加肠黏膜白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)含量(P0.01),而对分泌型免疫球蛋白A(SIg A)和IFN-γ/IL-4的影响不显著(P0.05)。结果提示:灌服0.12%JY25P能改善蛋雏鸡的生长性能,提高特异性新城疫抗体效价,增强非特异性肠黏膜IL-4和IFN-γ的分泌,同时维持机体的免疫平衡,因此,该多糖具有较好的应用前景。     

柔嫩艾美耳球虫YL株的生物学特性

用1×103个柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)杨凌株(YL)孢子化卵囊感染7日龄雏鸡,对其潜隐期、最早孢子化时间、卵囊形态及大小、孢子囊大小等生物学特性进行测定。另外,对9、11及13日龄的鸡分别经口感染1×103个E.tenella YL株孢子化卵囊,对肠道病变记分、平均增重、死亡率、血便排放情况等几项指标进行测定,研究同一剂量E.tenellaYL株孢子化卵囊对不同日龄鸡的致病性。结果表明,11日龄的鸡感染后相对增重减少17.7%,病变记分平均达3.0分,9日龄组和13日龄组相对增重分别降低12.0%和17.3%,病变记分分别为2.5分和2.6分。同时测得E.tenella YL株的潜隐期为110h,最短孢子化时间为17h,卵囊大小为22.3~27.7μm×17.1~23.0μm,孢子囊大小为9.9~13.6μm×6.2~7.4μm。     

和缓艾美耳球虫致病性研究

对新分离的和缓艾美耳球虫进行了致病性研究.结果表明,21日龄雏鸡感染1000个和5000个孢子化卵囊未见异常表现,肠道未发现肉眼可见的病理变化.20 000个卵囊感染可引起轻微病变,100 000个和500 000个卵囊感染能产生较明显的致病作用,与对照组相比增重分别为70.3%和56.8%.根据肠道病变记分标准,肠道有明显可见的病变,所有试验鸡均未出现死亡.     

中药加味麻杏石甘汤对传染性支气管炎病毒感染雏鸡的保护作用及其机制分析

为研究中药组方加味麻杏石甘汤对人工感染传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)雏鸡的保护作用及其作用机制,将240只15日龄雏鸡随机分为6组:健康对照组、IBV接种组、利巴韦林治疗组及加味麻杏石甘汤高、中、低剂量治疗组。IBV接种组及各治疗组雏鸡的接种病毒量为3×10-5.68EID50/0.3 mL,于攻毒后48 h进行治疗,剂量分别为0.01%利巴韦林和0.6%、0.4%、0.2%加味麻杏石甘汤。ELISA方法检测各组雏鸡血清中细胞因子γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)与白介素4(interleukin 4,IL-4)含量。结果显示:IBV接种组雏鸡血清中IL-4水平显著升高,IFN-γ水平显著降低;经过药物干预治疗以后,血清中IL-4水平降低,IFN-γ水平提高。各药物治疗组之间,中药高、中剂量组IFN-γ水平高于低剂量组和利巴韦林组,IL-4水平较之偏低。可见,加味麻杏石甘汤可使IBV感染雏鸡血清中IFN-γ含量上调,IL-4含量下调,其保护机制可能是通过改善IBV感染导致的Th1/Th2失衡而起作用。