仔猪小肠优势乳酸杆菌断奶前后全肠道演替及其比较代谢组学研究

本试验旨在研究仔猪小肠优势乳酸杆菌在断奶前后的全肠道数量变化，并对部分优势乳酸杆菌的代谢差异进行了比较代谢组学研究。试验用梯度稀释培养法，分离21日龄哺乳仔猪的小肠优势乳酸杆菌。此外，试验选取24头体重为（7.00±0.50） kg的21日龄断奶长×大二元杂交去势公猪，随机分为4组，每组6个重复，每个重复1头猪。分别于21、24、28和35日龄时，每组随机选择1头仔猪屠宰，采集胃、空肠、回肠、盲肠和结肠内容物，用荧光定量PCR法定量分析胃肠内容物样品中的不同种类乳酸杆菌数量。另外，选取3株优势乳酸杆菌进行比较代谢组学分析。结果表明：试验分离获得了5株仔猪小肠优势乳酸杆菌分别为：食淀粉乳杆菌（Lactobacillus amylovorus）、罗伊氏乳杆菌（Limosilactobacillus reuteri）、约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）、黏液乳杆菌（Limosilactobacillus mucosae）和唾液乳杆菌（Ligilactobacillus salivarius）。断奶后，仔猪胃肠内的乳酸杆菌数量降低，并随着日龄的增加逐渐恢复，但均未达到...     

罗伊氏乳杆菌LR1对断奶仔猪血清生化指标和肠道营养物质转运载体mRNA表达的影响

本试验旨在研究罗伊氏乳杆菌LR1对断奶仔猪血清生化指标和肠道营养物质转运载体mRNA表达的影响。选取144头初始体重为(6.49±0.01) kg的21日龄杜×长×大断奶仔猪,随机分为3组,每组8个重复,每个重复6头。对照组饲喂基础饲粮,抗生素组饲喂基础饲粮+100 mg/kg喹乙醇+75 mg/kg金霉素,罗伊氏乳杆菌组饲喂基础饲粮+5×1010CFU/kg罗伊氏乳杆菌LR1。试验期为14 d。结果显示:1)与对照组相比,饲粮添加抗生素显著提高了血清葡萄糖(GLU)的含量(P0.05),且显著降低了血清尿素氮(UN)的含量(P0.05)。2)与对照组相比,饲粮添加罗伊氏乳杆菌LR1显著提高了十二指肠胃动素(MLN)和空肠胆囊收缩素(CCK)的mRNA表达量(P0.05);饲粮添加抗生素显著提高了十二指肠MLN的mRNA表达量(P0.05)。3)与对照组相比,饲粮添加罗伊氏乳杆菌LR1显著提高了十二指肠Na+依赖性谷氨酰胺载体2(ASCT2)、阳离子氨基酸运载体1(CAT1)、小肽转运体1(PepT1)和空肠中性和碱性氨基酸转运载体(rBAT)以及空肠与回肠y+L氨基酸转运体1 (y+LAT1)的mRNA表达量(P 0.05);饲粮添加抗生素显著提高了空肠y+LAT1、CAT1、PepT1和空肠与回肠哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的mRNA表达量(P0.05)。4)与对照组相比,饲粮添加罗伊氏乳杆菌LR1显著提高了十二指肠小肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、乙酰辅酶A羧化酶α(ACCα)、脂肪酸合成酶(FASN)和十二指肠与空肠脂肪酸结合蛋白3(FABP3)以及十二指肠、空肠与回肠过氧化物体增殖物激活受体γ(PPARγ)的mRNA表达量(P0.05);饲粮添加抗生素显著提高了空肠ACCα的mRNA表达量(P0.05)。5)与对照组相比,饲粮添加罗伊氏乳杆菌LR1显著提高了空肠和回肠钠-葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)的mRNA表达量(P0.05);饲粮添加抗生素显著提高了十二指肠SGLT1、钠-葡萄糖协同转运蛋白3(SGLT3)的mRNA表达量(P0.05)。综上所述,饲粮中添加5×1010CFU/kg罗伊氏乳杆菌LR1对断奶仔猪的肠道营养物质转运具有良好的促进作用,表现为促进断奶仔猪肠道物理消化和化学消化,促进小肽、氨基酸及脂肪酸吸收转运,增强脂肪酸的合成。罗伊氏乳杆菌LR1在替代猪饲用抗生素方面具有巨大潜力,可用于开发新型猪饲料抗生素替代物。     

猪源罗伊氏乳杆菌GL001的分离与益生特性研究

为了给猪源益生菌制剂的研究与开发提供更多理论依据,从小型巴马猪粪便中分离获得罗伊氏乳杆菌GL001,对该分离菌株的生长特性、产酸性能、模拟胃肠道环境下的耐受能力、药物敏感性及动物安全性进行检测。结果显示：罗伊氏乳杆菌GL001能迅速进入对数生长期,在16 h达到最高生长点后,pH值也相应变平稳;罗伊氏乳杆菌GL001在模拟的胃液环境中,1.5 h的存活率为93.84%,3 h后为88.41%;对0.3%的胆盐环境耐受性强;罗伊氏乳杆菌GL001对阿莫西林、链霉素、多西环素、氧氟沙星敏感,但对青霉素不敏感;细菌的上清液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用;大鼠安全性试验表明,分离的罗伊氏乳杆菌GL001对雌鼠、雄鼠的生长和脏器指数均无影响,大鼠脏器没有细菌异位情况。研究表明,分离得到的罗伊氏乳杆菌GL001可作为潜在饲用益生菌进一步研究。     

鸡肠道内乳酸菌的分离鉴定及体外抑菌试验

为获得鸡肠道内抑菌效果好、适应性强的乳酸菌,从健康鸡小肠内容物中分离乳酸杆菌,并对其进行生化鉴定。结果成功从鸡小肠中分离出6株细菌。通过革兰氏染色和生化鉴定,发现这6株细菌分别是微小乳酸菌(L.minor)、约氏乳杆菌(L.johnsonii)、弯曲乳杆菌(L.curvatus)、肠乳杆菌(L.intestinalis)、嗜酸乳杆菌(L.acidlophilus)、植物乳杆菌(L.plantarum)。对分离到的6株乳酸菌进行体外抑菌试验,结果表明肠乳杆菌(L.intestinalis)对大肠杆菌有一定的抑菌作用。该研究为后期开发益生菌制剂奠定了一定的基础。     

奶牛阴道乳杆菌抗菌物质的体外特性

采用牛津杯法测定4株乳杆菌(罗伊乳杆菌、格氏乳杆菌、约氏乳杆菌和唾液乳杆菌)对致病菌的抑菌活性,使用含有3,3,5,5-四甲基联苯胺和辣根过氧化物酶的MRS琼脂培养基测定乳杆菌产过氧化氢能力,最后通过蛋白类排除试验、抑菌物质热稳定性试验、有机酸排除试验和过氧化氢(H_2O_2)排除试验分析4株乳杆菌主要的抗菌物质。结果显示:4株菌株均具有良好的抗菌活性,约氏乳杆菌和唾液乳杆菌能够产生H_2O_2;约氏乳杆菌主要的抗菌物质为有机酸,罗伊乳杆菌、格氏乳杆菌和唾液乳杆菌主要抗菌物质除了有机酸外,仍可以产生细菌素。结果表明:罗伊乳杆菌、格氏乳杆菌和唾液乳杆菌可以作为防治奶牛子宫内膜炎的益生菌使用。     

罗伊氏乳杆菌在畜禽生产中应用的研究进展

罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)是专性异型发酵乳酸杆菌,主要定植在人和动物肠道中,具有抑制病原菌、改善肠道环境、调节肠道菌群、降低血清胆固醇含量等诸多优良益生功能,是广泛应用于食品、药品和饲料添加剂的一类重要微生物。本篇综述主要介绍了罗伊氏乳杆菌的生物学特性、生理功能和其在畜禽生产中的应用及其作用机制,并对未来研究方向和发展前景进行了展望。     

罗伊氏乳杆菌的抑菌能力及其对肉仔鸡盲肠内容物菌群的影响

试验随机选用体重、健康情况基本一致的1日龄AA白羽肉仔鸡720羽,按体重相近、性别比例相同原则随机分为空白组、抗生素组、菌粉组、上清液组、发酵液组,每组6个重复,每个重复24羽鸡,试验期42 d,以期研究罗伊氏乳杆菌的抑菌性能及其对肉仔鸡盲肠内容物菌群的影响。试验结果显示:罗伊氏乳杆菌DBN-JP发酵液对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的抑菌能力与0.02%硫酸黏菌素差异不显著;80℃加热15 min对罗伊氏乳杆菌DBN-JP发酵液的抑菌能力影响不显著;与空白组相比,菌粉组、发酵液组或上清液可抑制肉仔鸡盲肠内容物中大肠杆菌和沙门氏菌,提高乳酸杆菌数量;与抗生素组相比,菌粉组和发酵液组盲肠内容物中乳酸杆菌数显著升高,发酵液组盲肠内容物中沙门氏菌数量与抗生素组相比差异不显著。综上所述,在肉仔鸡日粮中添加罗伊氏乳杆菌DBN-JP菌粉、发酵液、上清液可抑制病原菌生长、调节盲肠内容物菌群,具有替代抗生素的潜力。     

鸡源高黏附乳酸菌的分离筛选及主要生物学特性研究

研究旨在筛选高黏附特性的鸡源乳酸菌，评价其主要生物学特性。试验应用MRS琼脂培养基从SPF鸡十二指肠、盲肠及小肠分离菌株，通过形态学观察、生理生化试验进行初步筛选，随后采用ERIC-PCR与16S rRNA基因序列分析相结合的方法对分离菌株进行种属鉴定，并对分离鉴定的乳酸菌株进行黏附能力、耐酸与耐胆汁特性、生长曲线、体外传代能力等生物学特征进行分析。结果显示：在34株分离菌株中鉴定到9种基因型，其中7株为罗伊氏乳杆菌、2株为约氏乳杆菌。菌株编号为C7的罗伊氏乳酸杆菌对HT-29细胞黏附率为（32.3±1.67）%，显著高于商品化乳酸乳球菌MG1363株和乳杆菌BNCC182567株以及除S3株外的其他分离株（P<0.05）；在pH2.0～5.0条件下存活率均高于100%，在40%与60%新鲜鸡胆汁作用下存活率分别为（116.67±11.89）%和（102.33±10.87）%，在体外连续传代10代仍能保持良好的活力。结果表明分离获得的C7分离株为罗伊氏乳酸杆菌，具有高黏附特性、耐酸与耐胆汁特性，该菌株为研究益生菌制剂及口服疫苗表达载体奠定了初步基础。     

含1,2-丙二醇青贮玉米微生物菌群分析

为了研究袋式青贮玉米与窖式青贮玉米微生物群集的差异,同时分析与发酵产物中1,2-丙二醇相关的微生物,试验采用全株玉米进行袋式青贮以及窖式青贮。袋式青贮在3,7,14,28,56,120天开封,采样;窖式青贮选择3个500 t级别的半地上式青贮窖,贮藏120 d后每个青贮窖选择8个采样点进行采样。使用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)方法检测微生物区系并进行聚类分析。结果表明:袋式青贮玉米发酵过程中微生物区系无变化,在其中检测到类肠膜魏斯氏菌(W.paramesenteroides)、魏斯氏菌(W.confusa)、肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)、植物乳杆菌(L.plantarum)、短乳杆菌(L.brevis)和乳酸乳杆菌(L.lactis)。青贮窖不同位置微生物菌群具有一定差异,耐酸乳杆菌(L.acetotolerans)、植物乳杆菌(L.plantarum)和布氏乳杆菌(L.buchneri)为3个青贮窖共通菌,同时还检测到了屎肠球菌(E.faecium)、巴氏醋杆菌(A.pasteurianus)、罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)、面包乳杆菌(L.panis)、嗜麦芽窄食单胞菌(S.maltophilia)和类肠膜魏斯氏菌(W.Paramesenteroides)。说明袋式青贮微生物菌群与窖式青贮微生物菌群具有一定差异,窖式青贮中检测到了一些在袋式青贮中不常见的乳酸菌;青贮窖中1,2-丙二醇的生成可能与耐酸乳杆菌(L.acetotolerans)、巴氏醋杆菌(A.pasteurianus)、罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)、面包乳杆菌(L.panis)和布氏乳杆菌(L.buchneri)有关。     

三株乳酸杆菌的分离鉴定与益生特性研究

本研究通过分离鉴定猪肠道内乳酸杆菌并对其益生特性进行比较分析,旨在为乳酸杆菌在仔猪饲粮中的应用提供科学依据。试验选取健康猪粪便,利用选择性培养基进行厌氧培养和单克隆纯化,共获得三株乳酸杆菌,通过生化鉴定、16Sr RNA基因序列测定和同源性分析,确定分离菌株分别为植物乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌;采用牛津杯法、活菌计数法和细胞试验等研究三株乳酸杆菌体外抑菌活性、黏附性及竞争性黏附猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的益生特性。结果表明:与对照组相比,三株乳酸杆菌培养上清液的抑菌圈直径(P0.01)和抑菌效果(P0.01)差异均极显著,并且以植物乳杆菌培养上清液的抗菌效果为最佳;三株乳酸杆菌均可黏附于IPEC-J2细胞,并且以植物乳杆菌黏附IPEC-J2的菌数为最多;与对照组相比,三株乳酸杆菌对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞均具有抑制作用(P0.01),并且以植物乳杆菌抑制黏附的效果最好。     

玉米、豆粕和麦麸抽提物对4株猪源乳酸杆菌耐酸能力的影响

采用模拟胃酸环境,检测饲料原料玉米、豆粕和麦麸抽提物对4株猪源乳酸杆菌耐酸性能的影响。结果表明:在pH 2.5模拟胃酸环境中处理3 h,约氏乳酸杆菌JJB3、SNZ10,罗伊氏乳酸杆菌MNZ8、KNZ4分别经90、30、60 min和30 min完全失活。添加豆粕和麦麸抽提物后,4株乳酸杆菌在pH 2.5模拟胃酸环境中处理3 h后活菌数没有显著变化。玉米抽提物只对JJB3具有很好的保护作用,可以延长SNZ10和KNZ4在酸性环境中的存活时间30 min,对MNZ8 30 min的成活率有一定的提高作用,但是不能延长它的存活时间。进一步的单因子分析表明,葡萄糖浓度变化显著影响乳酸杆菌的耐酸性,游离氨基氮含量对乳酸杆菌成活率几乎无影响。证明饲料原料豆粕和麦麸抽提物作为载体对4株乳酸杆菌耐酸性具有很好的保护作用,可作为提高乳酸杆菌制剂成活率的过瘤胃保护剂。     

Survival and persistence of Lactobacillus plantarum 4.1 and Lactobacillus reuteri 3S7 in the gastrointestinal tract of pigs

Lactobacillus sp. are important inhabitants of the intestines of animals. They are also largely used as probiotics for both humans and animals. To exert beneficial effects, lactobacilli have to survive through the gastrointestinal transit. Based on bile-salt resistance, pH tolerance, antimicrobial activity and heat resistance, Lactobacillus plantarum 4.1 and Lactobacillus reuteri 3S7 were previously selected and used as probiotic additives in pelleted feeding trials. Both strains were fed to pigs (sows and piglets) at a cell number of ca. 10(10) viable cells per day. A polyphasic approach, comprising growth on selective media, Biolog System analysis, 16S rRNA gene sequencing and RAPD-PCR typing, was used to identify and differentiate L. plantarum 4.1 and L. reuteri 3S7 from other faecal Lactobacillus sp., L. plantarum 4.1 and L. reuteri 3S7 had the capacity to survive during the gastrointestinal transit and were found in the feaces at a cell number of 6-8 log cfu/g. Their persistence was shown after 6 days from the administration. Compared to untreated pigs, the administration of L. plantarum 4.1 and L. reuteri 3S7 significantly (P<0.05) decreased the population of Enterobacteriaceae. Besides, the beta-glucuronidase activity of all pigs decreased of ca. 23.0% during administration. The findings of this study showed that L. plantarum 4.1 and L. reuteri 3S7 have the potential to be used as probiotic additives in pelleted feed for pigs.     

功能性益生菌菌种的选育和益生性研究

本研究从新疆、内蒙古分离到30株乳酸杆菌和乳酸球菌,经过鉴定并选择发酵性能较好的菌种进行进一步的研究。经过对益生乳杆菌人工胃肠液耐受性、胆盐耐受性、胆固醇降解能力等益生特性的研究,得出植物乳杆菌BN-3、BN-5、罗伊氏乳杆菌AL3、鼠李糖乳杆菌AL20具有较好的益生特性。     

Study and use of the probiotic Lactobacillus reuteri in pigs:a review

Probiotics are living microorganisms that provide a wide variety of health benefits to the host when ingested in adequate amounts.The bacterial strains most frequently used as probiotic agents are lactic acid bacteria,such as Lactobacillus reuteri,which is one of the few endogenous Lactobacillus species found in the gastrointestinal tract of vertebrates,including humans,rats,pigs and chickens.L reuteri is one of the most well documented probiotic species and has been widely utilized as a probiotic in humans and animals for many years.Initially,L reuteri was used in humans to reduce the incidence and the severity of diarrhea,prevent colic and necrotic enterocolitis,and maintain a functional mucosal barrier.As interest in alternatives to in-feed antibiotics has grown in recent years,some evidence has emerged that probiotics may promote growth,improve the efficiency of feed utilization,prevent diarrhea,and regulate the immune system in pigs.In this review,the characteristics of L reuteri are described,in order to update the evidence on the efficacy of using L.reuteri in pigs.     

植物乳杆菌的研究进展

植物乳杆菌来源广泛,作为益生菌家族的一员,其具有调节肠道菌群平衡、参与机体免疫应答和降低胆固醇水平等多种益生功能,在食品工业中有着广泛应用。本文综述了植物乳杆菌的益生功能机制并列举了代表性菌株,对植物乳杆菌在乳品领域的应用发展限制因素进行阐述,同时提出了目前的常见解决方法,为植物乳杆菌在实际中的应用提供参考。     

酸奶中乳酸杆菌分离鉴定及其与女性生殖道感染有关的生理生化特性研究

对国内外市售酸奶中添加的乳酸杆菌益生菌进行分离鉴定,对其产H2O2量及与宫颈癌HeLa细胞黏附能力进行分析,并初步判定酸奶中的乳酸杆菌是否对女性生殖道健康具有潜在的保健作用.实验共分离鉴定出10株乳酸杆菌,其中,嗜酸性乳杆菌5株、干酪乳杆菌1株、瑞士乳杆菌1株、鼠李糖乳杆菌1株、植物乳杆菌1株和德式乳杆菌1株.只有瑞士乳杆菌产H2O2量较高且与HeLa细胞的黏附作用较强,其余乳酸杆菌产H2O2的能力偏低.大部分国内外市售酸奶产品中添加的益生菌不具备抑制女性生殖道感染有关的生理生化特性,只有瑞士乳杆菌可能对女性生殖系统的健康具有保护作用.     

猪源约氏乳酸杆菌JJB3和枯草芽孢杆菌JS01对仔猪肠道分泌型免疫球蛋白A和菌群的影响

本文旨在研究不同来源的益生素对仔猪分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和主要肠道菌群的影响.选取初生仔猪72头,分别饲喂猪源约氏乳酸杆菌JJB3和枯草芽孢杆菌JS01,检测粪样SIgA和主要肠道菌群.结果表明:采用双抗夹心ELISA方法检测粪样SIgA,不同处理组仔猪的SIgA水平没有显著差异,随日龄增加而降低,但是,益生素可以延缓仔猪断奶前抗体水平下降的速度,约氏乳酸杆菌的效果优于枯草芽孢杆菌.35日龄时,对照组大肠杆菌数量显著高于约氏乳酸杆菌组(P<0.05);在7、14和29日龄时,试验组梭菌的数量显著高于对照组(P<0.05);在7和21日龄时,约氏乳酸杆菌处理组消化球菌显著高于对照组(P<0.05);约氏乳酸杆菌组的肠球菌数量只是在29日龄显著高于对照组(P<0.05);试验组乳酸杆菌的数量只是在7日龄显著高于对照组(P<0.05);双歧杆菌在不同处理组之间都没有显著差异.添加这2种益生素均可以显著提高仔猪日增重和降低腹泻指数(P<0.05).该试验结果说明这2种益生素虽然对初生仔猪肠道SIgA没有显著影响,但是能增加肠道厌氧菌的数量,并有效控制仔猪腹泻和提高仔猪日增重.     

Evaluation of an intestinal Lactobacillus reuteri strain expressing rumen fungal xylanase as a probiotic for broiler chickens fed on a wheat-based diet

1. This study was conducted to evaluate the feasibility of using a transformed Lactobacillus reuteri Pg4 strain harbouring a rumen fungal xylanase gene as a probiotic supplement in a wheat-based poultry diet. 2. A total of 400 broiler chicks was allocated to two treatment groups with or without supplementation with 10(6) colony forming units (cfu)/g of transformed L. reuteri Pg4 in a wheat-based regimen to investigate the performance, intestinal microflora populations, digesta viscosity and excreta ammonia concentrations in these broiler chickens. 3. Supplementation of the wheat-based diet with transformed L. reuteri Pg4 decreased intestinal viscosity, caecal coliform population, and increased body weight gain and ileal villus height and crypt depth from 0 to 21 d of age. It also decreased excreta ammonia concentrations, and increased the caecal total volatile fatty acid (VFA) and lactic acid concentrations from 0 to 21 d and 22 to 37 d of age. 4. Further, it was demonstrated that 40% of the Lactobacillus cells randomly isolated from the digesta of the ileum and caecum of the supplemented group possessed xylanase secretion capability. 5. It appears reasonable to assume, therefore, that the derived benefit is a result of the organism surviving, and the associated performance of some function in the intestinal tract which benefits gut health.     

Collagen (Cn-I) binding by gut lactobacilli.

Four gut Lactobacillus strains displaying the features which make them particularly promising for the preparation of probiotic products were investigated together with 5 fresh isolates and one collection strain of Lactobacillus plantarum for their ability to bind type I collagen (Cn-I). Immobilised Cn-I in microtitre plates was bound only by 3 strains of gut lactobacilli from piglets and the collection strain Lactobacillus plantarum LHI 10 from Prague in range of A570nm readings 0.114-0.221. Six strains (isolates from turkeys and a calf) did not bind Cn-I (A570nm < 0.1) in this assay. An influence of cultivation medium on Cn-I binding was significant (P < 0.001) in all four adherent strains. Significantly higher (P < 0.001) binding of Cn-I was observed for Lactobacillus casei L 81 and Lactobacillus plantarum LHI 10 grown on solid medium (MRS agar) than for MRS broth-grown cells, however, Lactobacillus plantarum L 5 and Lactobacillus fermentum L 435 expressed significantly (P < 0.001) higher Cn-I binding during cultivation in MRS broth. The specificity of the binding was confirmed because the Cn-I binding by lactobacilli after their preincubation with this protein was completely abolished. Three selected inhibitors (fucoidan, heparan sulphate and hyaluronic acid) significantly (P < 0.001) reduced Cn-I binding by the Lactobacillus plantarum L 5 strain. Following up on some earlier strain characteristics, these results suggest that the selected piglets lactobacilli are also able to bind Cn-I and therefore should antagonize collagen niche colonization by various enteropathogens when used for probiotic purposes.     

植物乳杆菌的益生特性及其在乳制品中的应用

植物乳杆菌（Lactobacillusplanrarum）能通过胃并定植于肠道,发挥调节肠道菌群、免疫调节、降低血清胆固醇、降血压和抗氧化等益生作用。此外,由于植物乳杆菌的益生特性,国内学者申请了诸多关于植物乳杆菌菌株专利。同时,近年来有关植物乳杆菌分子多样性的研究也充分开展。另外,植物乳杆菌还被广泛应用于乳制品生产,包括功能性酸乳、发酵豆乳、干酪、功能性乳酸菌饮料等乳制品中。