荧光定量PCR技术及其在动物传染病定量检测中的应用

荧光定量PCR是近年发展起来的一 种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核 酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR 技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量 PCR的核心。目前报道的荧光探针主要有 TaqMan、Amplisensor、分子信标、Lightcycler 以及在这4种探针基础上发展起来的其他荧 光探针。各种荧光探针在定量PCR中的作 用是识别和报告特定核酸。这些荧光探针与 相应的靶分子杂交时经历一个自发荧光形成 或消失的构象变化,只有与完全互补的靶核 酸杂交时才会出现这种变化,当靶核酸存在 碱基错配或缺失时,荧光探针就不会与之杂 交,也不会出现荧光的变化。在检测时根据 这种荧光变化来确定检测中特定核酸的存在 和量的多少。荧光探针用于定量PCR不但 提高了PCR的检测灵敏度,还能在同一封闭 管中对模板进行准确定量检测,特别适合特 定核酸扩增的实时监测。荧光定量PCR用 于动物传染病的诊断,不但能定量检测病原 体感染的强弱和在机体内的分布,还具有灵 敏、快速、省力的特点。     

核酸探针技术及其在大肠杆菌诊断中的应用

核酸探针又称基因探针,是随着分子生物学及分子遗传学的深入发展而产生的一种新的检测技术。与常规的实验室检测方法相比,核酸探针技术具有高度特异、敏感、快速、简便等优点。近几年,基于探针只能和靶细菌等的 DNA 杂交,而不与其它 DNA 杂交的原理,已将探针技术作为一种有效的检测手段,应用于细菌、病毒、疟原虫、钩端螺旋体等的鉴定和分类,并收到一定效果。     

实时荧光定量PCR技术研究进展及应用

实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术.它利用荧光实时检测PCR反应,具有灵敏度高、特异性强、节约时间等优点.文章就常用的4种方法,即DNA结合染色、水解探针、分子信标和杂交探针的原理和特点进行介绍,同时综述了荧光定量PCR技术在实践中的应用.     

核酸探针和PCR技术在食品检验中的应用

核酸探针技术和多聚酶链反应( Polymerase chain reaction,PCR)技术是近年来发展起来的两种高新生物技术。本文着重介绍了核酸探针技术和 PCR技术的原理及其在食品检验中的应用。同时提出了这两种技术在食品检验中尚存在的问题以及解决的办法 ,并对其在食品检验中的应用前景作了展望。     

核酸探针检验技术在兽医诊断中的应用

随着核酸探针制备、杂交与标记技术的不断深入发展和探针诊断试剂的商品化、核酸探针诊断技术在兽医诊断领域得到了日益广泛的应用。本文拟就核酸探针在病原体的检测、微生物分型与致病微生物鉴定、细胞培养中污染微生物检验、食品检验及致病机理研究几个方面的应用做了介绍。     

荧光定量PCR技术及其应用研究进展

荧光定量PCR是近年发展起来的一种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量PCR的核心.荧光定量PCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应争特点,是对原有PCR技术的革新,扩大了PCR的应用范围.论文综述了FQ-PCR技术的原理、FQ-PCR实时定量检测系统及其应用.     

基因探针技术在大肠杆菌诊断中的应用

基因探针又称核酸探针,它是随着分子生物学及分子遗传学的深入发展而产生的一种新的检测技术。与常规的实验室检测方法相比,基因探针技术具有高度特异、敏感、快速、简便等优点。近几年来,基于探针只能和靶细菌等的DNA杂交,而不与其它DNA杂交的原理,已将探针技术作为一种有效的检测手段,应用于细菌、病毒、疟原虫、钩     

核酸探针技术在检测ETEC各种毒力致病因子中的应用

核酸探针技术是80年代初期发展起来的一种基因诊断技术,它与以往诊断方法如细菌分离鉴定法.生化试验鉴定法和免疫学鉴定法相比,具有特异性强、敏感性高和简便快速的特点,因而得到了迅速的发展和广泛的应用.该技术在建立之初便用于检测大肠杆菌.迄今,用于检验各种大肠杆菌的基因探     

核酸探针技术在禽病研究中的应用

核酸探针技术是近几年来随着分子生物学技术的迅速发展而建立起的一种新的检测技术,它灵敏度高,特异性强,且快速方便,开辟了临床诊断技术的新领域,广泛应用于疾病的诊断、病原体相关性研究等。在禽病研究中,核酸探针用于诊断疾病、比较毒株和研究病原菌感染机制方而的不少研究。在抗病育种方而,已将其作为导入的目的基因的主要检测手段之一。本文仅就核酸探针技术在禽病研究中的应用做一简述。     

PCR结合斑点杂交技术检测禽多瘤病毒方法的建立及应用

鹦鹉幼雏病是由禽类多瘤病毒(APV)引起的多种鹦鹉雏鸟死亡的急性病毒性传染病,严重危害鹦鹉养殖业的健康发展。为提高分子生物学方法检测APV的敏感性和特异性,对APV基因片段进行克隆和序列分析,设计合成1对特异性引物,以VP1基因为模板,经PCR扩增获得731 bp的核苷酸DNA,并用DIG标记,制备用于检测APV的特异性核酸探针;对制备的探针进行灵敏度检测,同时与普通PCR进行敏感性比较;使用制备的探针,对经分离鉴定和制备保存的其他7种禽病毒核酸进行特异性检测;用该核酸探针,对疑似感染APV的鹦鹉病料进行斑点杂交检测,并对鉴定为阳性的APV进行全基因组扩增和序列分析。结果显示:该探针可检测到2 pg量的APV特异性核酸片段;仅APV-VP1阳性核酸显色,呈现阳性反应,而阴性核酸和其他7种禽病毒核酸均不显色,呈阴性反应。结果表明:建立的核酸斑点杂交检测方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于临床初步诊断。本方法的建立为我国开展APV分子流行病学调查及其感染的临床诊断提供了技术支撑。     

鸭圆环病毒核酸探针的制备与应用

用地高辛标记鸭圆环病毒（DuCV）全基因组克隆制成核酸探针,与鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒（DHV-Ⅰ）的cDNA、鸭瘟病毒（DPV）的DNA和DuCV的DNA进行斑点杂交以检测核酸探针的特异性,结果该探针只与DuCV的DNA杂交呈阳性。敏感性结果表明,该探针对DuCV的最低检出量约为5PgDuCV的DNA。应用该探针对从山东、江苏、四川等地采集的196只鸭病料,共980份脏器的组织DNA进行检测,结果个体阳性率为33．2％（65／196）,在各脏器中法氏囊和肝脏中DuCV检出率较高,检出率分别为52．3％和49．2％。同时对上述样品进行PCR检测,核酸探针检测与PCR检测2种方法的符合率为87．5％。结果表明,制备的DIG标记的核酸探针特异性强、敏感性高,适合对DuCV进行诊断和流行病学调查。     

肽核酸在微生物检测中的应用

正核酸是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一,在遗传信息传递中发挥着重要的作用,核酸序列分析对阐释生命活动具有重要意义。寡核苷酸探针可用于微生物等的核酸序列检测和分析,但应用寡核苷酸探针检测核酸序列时存在一些不足与缺陷,如其抵御核酸酶降解的能力较弱、杂交分子的解链温度低、     

DIG核酸探针检测病鸡羽髓MDV的研究

拔取病鸡含羽髓的羽毛,用免疫琼扩试验检测,检出率为80％;将病鸡羽髓经超声波处理、SDS和蛋白酶K裂解、经酚和氯仿抽提后,用乙醇沉淀病毒核酸,用我们研制的以Digoxigenin标记的MDV核酸探针检测,检出率为100％。结果表明,核酸探针是检测MDV灵敏特异的方法。     

鸭圆环病毒诊断技术研究进展

针对鸭圆环病毒病毒诊断,目前已经建立了PCR、Real Time PCR、电镜观察、核酸探针技术、间接ELISA方法等方法.     

用地高辛标记核酸探针检测鹅细小病毒的研究

从带有鹅细小病毒(GPV)NSI基因的重组质粒pMD18T-NS1用限制性内切酶EcoRI和BamH1双酶切回收1880bp大小片段,并制备出地高辛标记的GPV核酸探针。其标记效率达到0．01pg／μl。特异性检测结果表明,该探针能与GPV不同毒株核酸发生特异性杂交,而与对照的DPV、GPPV等病毒的核酸杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对GPV的最低检出量为0．0224pg。该探针对不同方法处理的GPV感染病料进行检测,均出现杂交阳性。表明所研制的标记探针用于GPV的检测足可行的。     

检测病菌的一种新方法：—DNA探针技术

DNA 探针(又称基因探针或核酸探针)是指能识别被检核酸中特异性碱基序列的带有标记的一小段单链 DNA(或RNA)分子,即一个可与被检测的核酸序列进行互补的带有标记的单股核酸片     

核酸探针的制备及其使用技术

由于限制性内切酶的发现以及重组DNA技术的新进展,使得可以合成核酸探针(Nucleic Acid Probe)进行疾病的诊断和病原的检测。因为标记的核酸探针可以通过相应的碱基配对原则和与其具有同源或部分同源性的核酸序列发生杂交反应,特异性相当高,是一种重要的辅助性病毒诊断方法。     

核酸技术在禽病诊断中的应用

近年来 ,随着分子生物学发展 ,禽病诊断水平有了很大提高。禽病的实验室诊断技术已从常规的病毒分离鉴定以及抗原、抗体的免疫学检测 ,进入到可对病原微生物的基因序列和结构直接进行测定的分子生物学水平。核酸技术是分子生物学技术的一部分 ,它包括聚合酶链反应 ,核酸探针及限制性内切酶酶切片段分析和核酸序列测定。核酸技术的核心是根据病原体的遗传物质ＲＮＡ或ＤＮＡ进行鉴别定性 ,其目的是检测病原体 ,同时鉴定血清型、亚型或基因型 ,核酸序列分析定性的水平是其他方法不可比拟的。核酸技术具有高灵敏性、高特异性等优点 ,目前该技术…     

口蹄疫病毒核酸试纸条检测方法的建立

本研究通过核酸探针与免疫层析相结合的方法,建立了一种简单、敏感、特异的检测口蹄疫病毒的方法。试验利用RT-PCR方法获得口蹄疫病毒3D核苷酸片段,在引物中设计了灵敏度高、特异性好的核酸探针--生物素和地高辛,使扩增产物结合探针。利用胶体金的放大原理将链霉亲和素与金颗粒形成胶体金混合物,从而与RT-PCR产物中的生物素探针结合。硝酸纤维素膜上端标记生物素化山羊抗兔IgG作为指控条带,下端标记抗地高辛抗体以捕获RT-PCR产物中的地高辛探针。组装金标试纸条,检测RT-PCR产物,结果表明该核酸试纸条可以检测到 0.3×10^-3~3×10^-3 μg/μL,敏感性高于琼脂糖凝胶电泳,两种方法的符合率高,核酸试纸条检测方法是一种敏感性高、成本低且费时短的新型检测方法。该方法为口蹄疫病毒检测提供了一种新的思路。     

DIG核酸探针检测病鸡羽髓MDV的研究

拔取病鸡含羽髓的羽毛，用免疫琼扩试验检测，检出率为８０％；将病鸡髓经超声波处理、ＳＤＳ和蛋白酶Ｋ裂解、经酚和氯仿抽提后，用乙醇沉淀病毒核酸，用我们研制的以Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的ＭＤＶ核酸探针检测，检出率为１００％，结果表明，核酸探针是检测ＭＤＶ灵敏特异的方法。