山东地区禽源致病性大肠杆菌氨基糖苷类药物耐药性及耐药基因的检测

采用K-B纸片法对224株大肠杆菌进行5种氨基糖苷类药物的药敏试验,采用微量肉汤稀释法进行庆大霉素和阿米卡星最低抑菌浓度（MIC）的测定,三重PCR法检测全部菌株氨基糖苷类钝化酶基因ant（3’’）-Ia、aac（6’）-Ib和aph（3’）-Ⅱa,普通PCR法检测16S甲基化酶基因。结果显示：山东省禽源大肠杆菌对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素和阿米卡星的耐药率分别为84.4%、57.1%、55.8%、46.9%和40.2%;3种钝化酶基因ant（3’’）-Ia、aac（6’）和Ib、aph（3’）-Ⅱa的检出率依次为49.6%、25.0%和22.8%,介导高水平耐药的16S甲基化酶基因RmtB的检出率为11.6%（26/224）,只有1株大肠杆菌检测到armA基因,没有检测到rmtA,且3种甲基化酶基因在低度耐药菌中检出率均为0;所检大肠杆菌中携带2种及2种以上耐药基因的菌株占33.5%（75/224）,有1株大肠杆菌同时携带4种耐药基因。结果表明,氨基糖苷类钝化酶及16S甲基化酶广泛存在于禽源大肠杆菌菌中,其耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关,部分菌株的耐药性与耐药基因的检出率不一致,表明还存在其他耐药机制。     

鸭圆环病毒核酸探针的制备与应用

用地高辛标记鸭圆环病毒（DuCV）全基因组克隆制成核酸探针,与鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒（DHV-Ⅰ）的cDNA、鸭瘟病毒（DPV）的DNA和DuCV的DNA进行斑点杂交以检测核酸探针的特异性,结果该探针只与DuCV的DNA杂交呈阳性。敏感性结果表明,该探针对DuCV的最低检出量约为5PgDuCV的DNA。应用该探针对从山东、江苏、四川等地采集的196只鸭病料,共980份脏器的组织DNA进行检测,结果个体阳性率为33．2％（65／196）,在各脏器中法氏囊和肝脏中DuCV检出率较高,检出率分别为52．3％和49．2％。同时对上述样品进行PCR检测,核酸探针检测与PCR检测2种方法的符合率为87．5％。结果表明,制备的DIG标记的核酸探针特异性强、敏感性高,适合对DuCV进行诊断和流行病学调查。     

鸭圆环病毒ORF3基因的克隆及序列分析

为了解鸭圆环病毒(DuCV)不同分离株ORF3基因变异情况及分析其同源性,本研究从临床病料中分离10株DuCV,扩增ORF3基因并测定其序列.通过与已知序列比对分析发现,DuCV ORF3基因分为两种基因型,大小分别为237 bp和297bp.ORF3基因同一基因型之间的核苷酸同源性为95.8％～100％,氨基酸同源性为88.6％～100％,而不同基因型之间的核苷酸同源性仅为87.8％～91.6％,氨基酸同源性仅为72.2％～81.0％.