抗幽门螺旋杆菌卵黄抗体的制备及其体外抑菌试验

试验以幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori，HP)全菌灭活抗原对150日龄伊沙褐壳母鸡进行首免，165日龄二免，180日龄三免，于首免后即开始收集鸡蛋，利用凝集实验测定卵黄中的抗体效价。结果表明：每间隔15天，采取两次加强免疫方法，可有效地引起免疫应答。母鸡在初免45d后，抗体效价可达到1：1024，同批样品在此水平可维持达60d以上(效价大于1：128)，然后抗体效价呈缓慢下降趋势，经130d后，抗体效价下降至1：8。体外抑菌实验表明，高免卵黄具有明显的抑制HP生长的活性。     

鸡新城疫Ⅱ系苗对不同日龄雏鸡首免试验

本次试验就雏鸡首免日龄进行探讨，选用三组雏鸡分别在1日龄、7日龄、14日龄进行首免试验。通过红细胞凝集抑制（HI）试验检测雏鸡母源抗体及免疫抗体效价（各组雏鸡母源抗体效价log^2的反对数值（本文以下相同）平均为22．33、21．33、20．67；各组雏鸡免疫后13天抗体效价平均分别为211．33、20．33、29．67），并结合免疫保护攻毒试验（保护率分别为1日龄；100％；7日龄：90％；14日龄：90％）,得出：本次试验雏鸡在母源抗体效严为22．33的1日龄进行首免最合适。     

近年来典型ND分离株的致病性和抗原性变异研究

8株ND分离株经过毒力测定(MDT小于47h；ICPI大于1．65)均属于NDV强毒，交互凝集抑制试验表明：分离株与C30和48株在HI效价上差1～3个滴度；攻毒试验表明不同毒株致病性明显不同；鸡胚中和试验则表明，La Sota单因子血清对分离株有中和作用，但中和滴度有明显差异。     

猪繁殖与呼吸综合征高免血清的制备与临床治疗试验

为筛选免疫效价高的疫苗,获得高免血清并进行临床治疗观察。本试验选用3种猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫健康新西兰大白兔,免疫后分别采血和分离血清,并用猪蓝耳病毒抗体PPA-ELISA检测试剂盒检测血清抗体效价,筛选出抗体效价较高的两种疫苗;免疫猪,制得高免血清对自然发病仔猪进行高免血清治疗试验。免疫兔试验表明,猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(CH-lR株)免疫后血清抗体效价最低,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)血清(简称高致病疫苗血清)抗体效价比猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(CH-la株)血清(简称灭活疫苗血清)低,用后两种疫苗免疫猪,血清抗体效价均能达到1∶1280。自然发病仔猪高免血清治疗试验显示,注射高致病疫苗血清对蓝耳病的治愈率为88%,灭活疫苗血清治愈率为76%。结果表明高免血清是无菌、安全的,所得两种血清可用于临床防治猪蓝耳病。     

产蛋鸡抗大肠杆菌F4菌毛的血清抗体和卵黄抗体消长规律的研究

从浙江省10多个规模化猪场采集仔猪断奶腹泻病料,分离致病性大肠杆菌。血清学和PCR方法鉴定菌毛型主要为F4和F18。挑取1株致病性和菌毛表达较强的F4阳性菌株,接种改良M inca培养基培养,热抽提法分离菌毛并纯化菌毛蛋白。将50只蛋鸡随机分5组,分别肌注1 mL免疫原/只:A组菌毛蛋白(250μg/只),B、C和D组菌毛蛋白(250,50,10μg/只) 弗氏佐剂,E组为空白对照。21 d加强免疫。定期采血分离血清,水稀释法和饱和硫酸铵盐析法分离卵黄抗体。ELISA法检测血清和卵黄抗体效价。结果表明,F4菌毛蛋白具有良好的免疫原性:在弗氏佐剂的辅助下,二免后21 d抗体效价达最高峰,血清和卵黄抗体效价分别为4.7 lg和4.4 lg,二免后56 d血清和卵黄抗体效价仍维持在4.0 lg;另外二免后21 d,10μg/只免疫剂量与50μg/只及250μg/只相比,诱导产生的卵黄抗体效价之间差异不显著(P>0.05)。     

西藏牦牛大肠埃希氏菌生物学特性的研究

本文对西藏牦牛大肠埃希氏菌进行培养特性、形态染色、鞭毛检查、血凝性、生化试验、血清型鉴定、抗原性、致病性等生物学特性研究,同时用大肠埃希氏菌标准菌种C83907做对照试验.结果表明,西藏牦牛大肠埃希氏菌在普通琼脂平板上可形成光滑型和粗糙型两种类型的菌落,在5%绵羊鲜血琼脂平板上无溶血现象;具有运动性,对家兔红细胞表现出强凝集,而对牦牛、绵羊、马、鸡、猪、鸭的红细胞不凝集,能发酵大多数糖类;其0抗原血清型为026、0142、0148和0158混合型;牦牛大肠埃希氏菌的培养物对家兔具有致病性,用牦牛大肠埃希氏菌油乳剂疫苗2次免疫家兔14 d后检测抗体效价,抗体效价≥2<8>.     

稚鳖白点病致病菌灭活疫苗的研制(一)--灭活疫苗在实验动物上的运用

用致病性气单胞菌灭活疫苗免疫小鼠,可使其获得对该致病菌的免疫保护。免疫后二周抗体凝集效价可达１６０;二次免疫比一次免疫的效果更好,其抗体凝集效价,在５２ｄ仍维持在１６０,而一次免疫的已降低到１０。     

抗猪繁殖与呼吸综合征病毒IgY的制备

利用猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）疫苗超量免疫母鸡,用水稀释法和硫酸铵沉淀法分离纯化IgY抗体,并用间接ELISA方法测抗体效价。结果表明：母鸡初次免疫后10d即有抗体产生,初次免疫75d后IgY效价可达1：10000,最高可达1：12800并能持续7-10d。IgY蛋白含量为10．64mg／mL蛋黄。IgY纯度达90％以上。     

猪链球菌Ⅱ型高免卵黄抗体粉的研制

试验用猪链球菌Ⅱ型CVCC606株制备疫苗免疫产蛋鸡,首免后7d检测到低水平的卵黄抗体,再经3次强化免疫,于末次免疫后7d卵黄抗体效价达到9log2,最高效价达到10log2,高水平卵黄抗体可维持到末次免疫后50d,随后出现下降。收集抗体效价大于9log2的高免蛋卵黄,经喷雾干燥成卵黄抗体粉,效价在10log2以上,卵黄抗体粉质量稳定,于室温(25℃)保存6个月抗体水平无明显降低。体外抑菌试验表明,高免卵黄抗体粉可有效抑制猪链球菌Ⅱ型CVCC606株和猪链球菌II型强毒分离株。高免卵黄抗体粉可有效预防猪链球菌Ⅱ型菌株对BALB/c小鼠的致死性感染。     

鸭短喙侏儒综合征精制蛋黄抗体的制备及应用效果评价

为了有效预防鸭短喙侏儒综合征,采用新型鸭细小病毒毒株（SD03株）制备了一种鸭短喙侏儒综合征精制蛋黄抗体。采用琼脂扩散试验和中和试验进行蛋黄抗体效价的测定,分析蛋黄抗体的消长规律,确定最佳免疫程序、收蛋时间和临床应用效价标准,并对制备的3批供试品进行临床应用效果评价。结果表明：该研究成功制备了一种鸭短喙侏儒综合征精制蛋黄抗体,该抗体琼扩效价和中和效价均在三免15 d达到高峰,分别为1∶64和1∶640,由此确定高免蛋收集时间为三免15 d;基础免疫完成后,最佳加强免疫时间为每隔30 d进行一次加强免疫,可使抗体效价一直维持在较高水平;确定了抗体琼扩效价≥1∶32或中和效价≥1∶320为临床应用效价标准。3批供试品临床应用试验结果表明,该鸭短喙侏儒综合征精制蛋黄抗体安全性好,对鸭短喙侏儒综合征有良好的预防和紧急预防效果。     

北京地区牛口蹄疫母源抗体水平及其疫苗免疫效果的调查研究

用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)方法对北京地区主要牛场进行口蹄疫(FMD)母源抗体、免前和免后抗体水平的调查，以探寻牛体内FMD抗体消长规律，制定合理的免疫程序，从而指导北京地区FMD的免疫。结果发现母源抗体水平在5日龄前小于1：32，5日龄开始上升，高水平抗体一直维持到75日龄，90日龄开始回落；加强免疫后抗体滴度大幅度升高，抗体效价离散度降低；用FMD疫苗免疫青年牛1次，21d和51d的抗体平均值都为1：256；成年母牛的分别为1：256和1：248；育成牛的分别为1：248和1：240。说明牛FMD首免的适宜日期为90日龄；适时的加强免疫有利于牛群抵抗FMD；FMD疫苗对育成牛、青年牛和成年母牛都有理想的免疫效果，对青年牛的免疫效果最好。     

表达小反刍兽疫病毒F蛋白的重组山羊痘病毒疫苗的研究

本研究利用gpt筛选基因和eGFP报告基因纯化筛选重组小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-F),并经过PCR鉴定.免疫荧光和蛋白印迹试验都证实重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞并表达PPRV F蛋白.以2×106PFU的rGPV-PPRV-F皮内注射免疫山羊3只,并于首次免疫后第28 d以相同剂量进行二次免疫.分别于一免后21 d和二免后14 d采血后分离血清进行病毒中和试验.结果表明,一免后21 d山羊痘病毒(GPV)中和抗体效价依次为1:40、≥1:80、≥1:80,PPRV中和抗体效价依次别为1:20、1:40、1:20,全部阳转;二免后14 d,GPV中和抗体效价≥1:80,PPRV中和抗体效价依次为1:20、1:80、1:40.本研究为小反刍兽疫重组山羊痘疫苗的产业化奠定了基础.     

不同首免时间对禽流感疫苗HI抗体消长影响的研究

通过HI试验,对雏鸭不同首免时间的禽流感灭活疫苗免疫效果进行监测,为更科学制定鸭免疫程序奠定基础。结果表明:(1)对照组鸭(E组)AI-H5母源抗体1d最高,达5.1log2,次日逐渐下降,于10d降至较低水平。AI-H5母源抗体于19d降至为2log2以下。(2)试验各组于免疫后10～12d抗体水平开始上升,于免疫后15～20d抗体水平达到高峰,并维持18～24d,之后呈缓慢下降趋势,于49d仍能检测到较高的抗体,由此说明,禽流感油乳剂灭活疫苗能诱导机体产生良好的免疫应答。(3)从不同首免时间进行禽流感疫苗免疫接种后的HI抗体效价比较来看,C组(15d首免组)HI抗体效价最佳,D组(20d首免组)HI抗体效价其次,B组(10d首免组)HI抗体效价第三,A组(5d首免组)HI抗体效价较差,因此,应根据雏鸭母源抗体水平选择适宜时间进行禽流感疫苗的首次免疫接种。     

应用高免卵黄抗体防治仔猪黄痢的研究

以K88^ 、K99^ 和987P^ ETEC活菌对初生未吃初乳的大白仔猪攻毒。发病后，采用口服型特异性高免卵黄抗体粉剂进行治疗。结果表明，ELISA效价为1：625和1：2500的高免卵黄抗体粉剂可有效治疗发病仔猪，治愈率为100％，对照组的死亡率分别为86％、100％和80％；ELISA效价为1：256的高免卵黄抗体粉剂治疗效果较差，试验组和对照组的仔猪发病率和严重程度无显著差异（P＞0．05）。本研究为仔猪黄痢的防治提供了一种新的有效手段。     

猪瘟-猪蓝耳病-猪圆环2型三联高免血清的制备

进行了制备猪瘟-猪蓝耳病-猪圆环2型三联高免血清的试验。试验采用三种疫苗对试验牛只进行多次免疫后,对其进行颈静脉采血和分离血清,并对所制备的高免血清进行无菌检验和安全性试验,通过间接ELSIA检测血清中的猪瘟、猪蓝耳、猪圆环病毒三种抗体的效价。结果显示,猪瘟、猪蓝耳、猪圆环病毒抗体效价分别达到1：2056、1：1280...     

黄芪多糖对肉鸡禽流感免疫效果的影响

研究黄芪多糖在禽流感(AI)灭活苗免疫过程中对肉鸡免疫效果的影响.18只1周龄肉雏鸡随机分为3组,每组6只鸡.所有肉鸡于2和6周龄分别进行AI灭活苗的首免和二免,胸肌注射,0.5 mL/羽.试验1组肉鸡每天口服高剂量黄芪多糖1 mL/羽；试验2组肉鸡每天口服低剂量黄芪多糖1mL/羽；对照组正常饲喂全价料.于试验始末称量肉鸡质量,测定脾和法氏囊指数；分别在首免前1d、首免后14和21d及二免后14和21d测定AI血凝抑制抗体的效果.结果表明:与对照组相比,试验1和2组肉鸡的体质量、脾和法氏囊指数均显著提高；二免后AI血凝抑制抗体的效价显著升高.在一定范围内高和低剂量的黄芪多糖都能使肉鸡增质量,显著提高肉鸡的主要免疫器官指数和AI血凝抑制抗体的效价.     

不同剂量猪瘟疫苗对仔猪免疫抗体效价的影响

从遵化市不同区域的12个养猪场选择20～30日龄的仔猪共240头,分为3组,每组80头。第1组、第2组、第3组的仔猪,分别注射1头剂、2头剂、4头剂猪瘟脾淋苗。一免后20d左右采血检测抗体水平。一免后30d用同等剂量疫苗二免,二免后20d左右采血检测抗体水平。结果表明,不同剂量的猪瘟疫苗一免后,免疫效果无明显差异,一免后20d抗体效价不能达到5log2的免疫保护水平。二免后20d,抗体效价远远高于5log2的免疫保护水平。     

水禽用H5亚型禽流感灭活疫苗对高致病性禽流感病毒流行毒株的免疫保护效果研究

为评价水禽用禽流感灭活疫苗(H5N2亚型,D7株)对2010年以后分离的高致病性禽流感病毒流行毒株的免疫保护效果,将该疫苗免疫3周龄SPF鸭后,21 d采血、分离血清测定HI抗体效价,同时用5株2010年以后分离的高致病性禽流感流行毒进行攻毒保护试验,攻毒后5d采集所有试验鸭喉头和泄殖腔拭子进行病毒分离.结果显示,该疫苗免疫SPF鸭21 d后的HI抗体效价的几何平均滴度达7.4log2,对5株高致病性禽流感病毒的攻击均可产生良好的免疫保护,并有效阻止病毒排泄.该疫苗的推广使用将对我国水禽高致病性禽流感的防控发挥重要作用.     

新城疫3组基因亚单位疫苗的免疫原性试验

将3个融合表达重组菌pGHN/DE3、pGF/DE3和pGF/E.coli复苏后进行酶切鉴定，确认无误后均经1mmol/L的TPTG诱导，然后分组3次免疫鸡。试验鸡血清经血球凝集抑制试验（HI）和微量细胞中和试验（SN）来检测HI抗体和SN抗体。结果表明：重组菌pGHN/DE3所生产的亚单位苗免疫鸡后，可激发较高的HI抗体，但激发的中和抗体较弱。与I系NDV常规疫苗相比，3个重组大肠杆菌基因工程苗所诱发的中和抗体效价较弱，对各组中起关键作用的中和抗体进行方差分析表明，3个基因工程菌所诱发的中和抗体与常规疫苗免疫组和基础免疫对照相比，差异显著，因此，尽管3种基因工程苗产生了中和抗体，但中和抗体效价上升缓慢，HI抗体效价上升较快。     

抗鸡白痢沙门杆菌病卵黄抗体粉饲料添加剂的研制

为了有效防治鸡白痢沙门杆菌病,试验采用吉林市郊区数家鸡场分离、鉴定的致病性鸡白痢沙门杆菌,经固体增菌培养纯化后用甲醛灭活,制成油佐剂灭活抗原免疫健康蛋鸡;当抗体效价达到1∶320倍时,收集免疫鸡所产蛋分离卵黄,减压,低温干燥,制成卵黄抗体细粉,对试验雏鸡采用预防量饲喂后进行强毒菌攻毒试验、强毒菌攻毒后治疗量的饲喂试验及小区域雏鸡饲喂试验。结果表明:卵黄抗体粉预防添加量为3%时,攻毒保护率可达73.3%;治疗添加量为5%时,治愈率可达66.67%;卵黄抗体添加组较同期普通饲养组总发病率降低7%,抗生素用量降低11%,增重率提高6%。