苜蓿基因组DNA提取和RAPD反应条件优选

采用CTAB法、N2-SDS法、SDS法和改进的CTAB法,提取苜蓿基因组DNA,比较其分离效果.结果表明,改进的CTAB法为最佳提取法.对RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验,建立适合苜蓿RAPD分析应用的体系组成为:反应液总体积25μL,14ng/μL模板DNA,2.5μL10x反应缓冲液,10碱基引物浓度0.1μmol/L,TaqDNA聚合酶1U,dNTP浓度0.3mmol/L,Mg²⁺浓度2.5mmol/L.PCR反应循环为:94℃4min,36℃30s,2℃1min;94℃30s,36℃30s,2℃1min,45个循环;2℃延伸10min.     

辽东栎基因组DNA提取方法比较与优化

针对辽东栎叶片组织中多糖含量高严重影响基因组DNA的提取问题,比较了改良SDS法、改良CTAB法1和改良CTAB法2等3种方法的处理效果。结果表明：用改良SDS法提取DNA多糖杂质多,易降解、褐化严重;用改良CTAB法1提取DNA难以去除植物组织中的多糖类杂质;而改良CTAB法2提取的DNA,杂质少,纯度高。     

不同方法提取雄蚕蛾蛋白质及提取工艺的优化

以雄蚕蛾干粉为原料,采用盐提蛋白法、碱提蛋白法这2种方法提取粗蛋白,并通过单因素试验分析影响因素,再通过正交试验获得盐法提蛋白和碱法提蛋白的最佳提取条件,最后结合两种方法的优化结果。用复合盐法—碱法提取雄蚕蛾蛋白质,并计算其蛋白质提取率、蛋白质含量。结果表明,盐法提取雄蚕蛾蛋白质,最优提取条件为盐浓度1.5%,料液比(g/mL)为1∶10,提取温度为40℃,提取时间为4.5 h,盐法提取率为44.36%,蛋白质含量为34.5%,提取因素的影响主次排列依次为料液比(g/mL)提取时间提取温度盐浓度;碱法提取雄蚕蛾蛋白质,最优提取条件为碱浓度2%,料液比(g/mL)为1∶8,提取温度为80℃,提取时间为4 h,碱法提取率为57.62%,蛋白质含量为47.69%。提取因素的影响主次排列依次为提取时间提取温度碱浓度料液比(g/mL)。复合盐法—碱法提取雄蚕蛾蛋白质,提取率为54.68%,蛋白质含量为49.12%。     

瑞氏木霉基因组DNA提取方法比较研究

采用4种常规DNA提取方法提取瑞氏木霉基因组DNA.结果表明EDTA-SDS法和冷冻研磨CTAB法更适合此真菌DNA的提取,试剂盒提取的总DNA纯度和浓度比较高,但是价格昂贵,冷冻研磨SDS法提取的DNA浓度不高,不适合分子生物学操作的要求.     

两种桑树基因组DNA提取方法的比较研究

以8份广西桑树种质资源为材料,比较了改良的CTAB法和植物基因组DNA试剂盒法(离心柱)提取桑树基因组DNA的效果.结果表明:两种方法都能得到桑树样品清晰的DNA电泳条带,DNA纯度高,改良的CTAB法提取的DNA浓度在308.70μg/mL～384.30μg/mL之间,平均值是331.45μg/mL;植物基因组DNA...     

瑞氏木霉基因组DNA提取方法比较研究

采用4种常规DNA提取方法提取瑞氏木霉基因组DNA。结果表明:EDTA-SDS法和冷冻研磨CTAB 法更适合此真菌DNA的提取,试剂盒提取的总DNA纯度和浓度比较高,但是价格昂贵,冷冻研磨SDS法提取的 DNA浓度不高,不适合分子生物学操作的要求。     

多花胡枝子基因组DNA提取与RAPD反应体系优化

以多花胡枝子干种子、萌发种子及开花期叶片三种材料提取基因组DNA,其中开花期叶片用CTAB法提取、干种子和萌发种子用SDS法提取的DNA均用于RAPD研究。结果表明,叶片基因组DNA的RAPD扩增最佳反应体系是:DNA模板用量为75ng,Mg²⁺浓度2.1mmol/L,dNTP浓度200μmol/L,随机引物浓度为0.2pm/μL,10×buffer2.5uL,TaqDNA聚合酶1.5个单位,反应总体积25uL;扩增反应程序:94℃预变性3min;94℃变性30s,36℃退火30s,72℃延伸1min,循环45次,72℃延伸10min。     

Optimization of experiment conditions with ISSR-PCR reaction system in Anemone obtusiloba

本研究以改良的CTAB法提取的甘肃合作钝裂银莲花（Anemone obtusiloba）基因组DNA为模板,通过正交和单因素试验,探讨引物浓度、聚合酶浓度、Mg^2＋浓度、dNTPs浓度和模板浓度对银莲花ISSRPCR扩增的影响。结果表明,钝裂银莲花1SSRPCR最佳反应体系：总体积20μL,模板浓度20ng,聚合酶2U,Mg^2浓度2．5mmol·L^-1,dNTPs浓度0．3mmol·L^-1,引物浓度0．4mmol·L^-1,引物UBC807退火温度为51℃。     

钝裂银莲花ISSR—PCR反应体系优化

本研究以改良的CTAB法提取的甘肃合作钝裂银莲花（Anemone obtusiloba）基因组DNA为模板,通过正交和单因素试验,探讨引物浓度、聚合酶浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度和模板浓度对银莲花ISSR PCR扩增的影响。结果表明,钝裂银莲花ISSR PCR最佳反应体系：总体积20 μL,模板浓度20 ng,聚合酶2 U,Mg2+浓度2.5 mmol·L-1,dNTPs浓度0.3 mmol·L-1,引物浓度0.4 mmol·L-1,引物UBC807退火温度为51 ℃。     

盐胁迫对醉马草和高羊茅种子萌发及幼苗生长的影响

采用质量分数分别为0.1%、0.3%、0.5%、0.7%和0.9%的盐溶液处理带内生真菌醉马草(Achnatherum inebrians)、不带内生真菌醉马草、高羊茅(Festuca arundinacea)品种‘侠客岛’(Island)和‘猎狗6号’(Hound 6)种子,测定发芽率、发芽势、活力指数、苗高、胚根长等指标,并建立相关函数方程确定4份种质材料对NaCl的耐受值,探讨单盐NaCl对4份种质材料种子萌发和幼苗生长的特性,明确种子萌发阶段及幼苗生长阶段对单盐NaCl胁迫的耐受程度并进行综合耐盐性评价。结果表明,与对照组相比,高羊茅品种‘侠客岛’和‘猎狗6号’的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、苗高、胚根长随着盐浓度的升高而降低,根冠比则与之相反。轻度盐胁迫(0.1%和0.3%)对于两种醉马草种子萌发和幼苗生长等有促进作用(P 0.05)。种子萌发阶段的带菌醉马草、不带菌醉马草、‘侠客岛’和‘猎狗6号’的耐盐适宜浓度分别为0.70%、0.60%、0.37%和0.49%;耐盐半致死浓度分别为0.98%、0.72%、0.46%和0.61%;耐盐极限浓度分别为1.02%、0.91%、0.61%和0.87%。幼苗阶段的带菌醉马草、不带菌醉马草、‘侠客岛’和‘猎狗6号’的耐盐阈值分别为1.23%、1.01%、0.44%和1.09%。综合耐盐性为带菌醉马草高羊茅‘猎狗6号’不带菌醉马草高羊茅‘侠客岛’。     

广西桑树品种全基因组DNA提取方法研究

以广西桑树品种芽为材料,以CTAB法提取其基因组DNA,并用紫外光谱吸收、凝胶电泳、ISSR等方法进行鉴定。研究结果表明:提取的DNAA260/A280比值在1.85～1.98之间,得率约为0.167～0.432μg.mg-1,提取的DNA可用于PCR分析。     

东北林蛙基因组DNA不同提取方法的比较

为了研究不同方法提取东北林蛙基因组DNA的纯度差异,试验以东北林蛙为研究对象,采用高盐浓度抽提法、苯酚/氯仿抽提法、十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB法)、十二烷基磺酸钠法(SDS法)提取基因组DNA,进行PCR验证。结果表明:4种提取方法均能获得完整的基因组DNA,可以用于PCR扩增。高盐浓度抽提法提取的DNA纯度和制得率最高,成本低,安全系数高,操作简单,能够满足提取大量DNA的需求;其他3种方法需使用有毒、有害的有机试剂且时间较长。     

黄颡鱼不同组织DNA提取方法研究

本研究探索从活体黄颡鱼样本提取DNA。取黄颡鱼的尾鳍,背鳍,肝脏,血液,胡须样品,加入蛋白酶K,55℃消化至透明,采用Tris-酚的方法提取DNA。此外,用氯化钠的方法提取胡须DNA作为比较。酚法提取结果肝脏DNA含量138ng/μL,OD值2.1,胡须DNA含量70ng/μL,OD值为1.83,血液含量为65ng/μL,OD值1.7,背鳍含量48ng/μL,OD值为1.6,尾鳍含量22ng/μL,OD值1.53。氯化钠法的胡须DNA含量105ng/μL,OD值1.83。DNA含量肝脏>胡须>血液>背鳍>尾鳍。Tris-酚提取时采取黄颡鱼的胡须较好,以氯化钠对胡须提取DNA,表明采用微量氯化钠效果好。     

外源脱落酸对醉马草内生真菌共生体幼苗建植过程的影响

醉马草为多年生禾本科草本植物,广泛分布于我国西北干旱-半干旱草原,其与内生真菌形成的互惠共生体具有较强的抗逆性,在自然生境中具备一定的竞争力。种子萌发及幼苗生长是植物生活史最重要的时期,决定植物未来的竞争力。通过发芽和盆栽试验,以携带(endophyte-infected, E+)和未携带(endophyte-free, E-)内生真菌的醉马草为材料,设置5个不同脱落酸(ABA)浓度,研究外源喷施ABA对醉马草内生真菌共生体幼苗建植过程的影响。结果表明:2.0 mg·L~(-1)的ABA浓度对醉马草种子的发芽率、胚芽长、胚根长有显著的促进作用;1.0 mg·L~(-1)的ABA浓度较CK组对醉马草的净光合速率、根冠比、根表面积、根直径、根体积和根头数有显著的促进作用,但当ABA浓度为4.0 mg·L~(-1)时表现为抑制作用。上述结果说明内生真菌具有对外源ABA的利用能力,但这与外源ABA的浓度有很大关系。     

从白羽王鸽的血液中提取基因组DNA方法的比较研究

禽类血液中的蛋白质含量较高,用传统方法提取其血液中的基因组DNA比较繁琐、纯度不高,而且提取的产物中有大量蛋白质残留。本研究采用改良的CTAB法从白羽王鸽全血中提取全基因组DNA,并以传统的酚-氯仿抽提的方法和TAKARA公司基因组提取试剂盒法作对照。结果表明：qCTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到2．00,浓度达到了144．67ng/μL,完全可以满足PCR扩增限制酶切等实验的要求。     

桑天牛成虫肠道细菌基因组DNA的提取及PCR反应体系优化

为了建立一套适用于桑天牛肠道细菌多样性研究的PCR反应体系和程序,采用改良的十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法提取桑天牛成虫肠道细菌基因组DNA,通过L16(45)正交组合试验和单因素梯度试验对MgC l2、dNTP、随机引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA的浓度和退火温度、循环次数等影响PCR扩增的重要因素进行优化。试验结果表明,采用改良的CTAB方法提取的桑天牛成虫肠道细菌DNA质量较高,适宜于PCR扩增分析。25μLPCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为:10×Buffer 2.5μL,MgC l22.0 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,随机引物0.48μmol/L,TaqDNA聚合酶0.75 U,模板DNA 75 ng;退火温度60℃,循环次数30次。     

超声波提取牛奶中细菌DNA方法的优化

本试验通过采集乌鲁木齐燕儿窝种牛场2003年5月份所有泌乳奶牛的牛奶样品,使用不同超声波功率（0、100、120、140、160 W）处理后,采用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基磺酸钠（SDS）法提取牛奶中细菌DNA,并通过DNA浓度、纯度和细菌通用引物扩增16S rDNA的V6-V8区判定DNA的质量,筛选出提取牛奶中细菌DNA的最佳方法。结果表明,未使用超声波处理样品,直接采用CTAB、SDS法提取出的DNA无法扩增出细菌16S rDNA V6-V8区,而使用不同超声波功率（100、120、140、160 W）处理后能扩增出细菌16S rDNA V6-V8区,其中超声波功率140 W处理样品10 min并结合CTAB法提取牛奶中细菌DNA的浓度最高,为203.35 μg/mL。因此,超声波功率140 W处理样品并结合CTAB法提取牛奶中细菌DNA的方法最优,能满足从分子水平上进一步研究乳房炎相关细菌的要求。     

醉马草挥发油对多年生黑麦草种子萌发及幼苗生理变化的影响

以内生真菌侵染(E+)和未侵染的(E-)醉马草(Achnatherum inebrians)植株中提取的挥发油为材料,通过纸上芽床试验,研究其对多年生黑麦草(Lolium perenne)种子萌发和幼苗生长的影响。结果发现,醉马草挥发油对黑麦草种子萌发具有抑制作用,且受到的抑制作用随挥发油浓度的增加而增大。E+挥发油的抑制作用强于E-,当挥发油浓度达到300mg·mL-1时,黑麦草的发芽率、胚芽长、胚根长、鲜重和干重等均表现出显著差异(P0.05),过氧化物酶(POD)的活性是E+挥发油处理显著(P0.05)低于E-处理;但是超氧化物歧化酶(SOD)活性则是E+挥发油处理显著(P0.05)高于E-处理。醉马草挥发油提取液对黑麦草种子的萌发和幼苗膜脂过氧化酶有抑制作用,内生真菌的侵染增强了醉马草次生代谢产物的化感作用。     

盐胁迫对2种冷季型草坪草幼苗生长和生理特性的影响

探讨单盐NaCl对带菌(E+)醉马草(Achnatherum inebrians)、不带菌(E-)醉马草、高羊茅品种侠客岛(Festuca arundinacea cv.Island)和猎狗6号(F.arundinacea cv.Hound 6)幼苗生长及生理特性的影响,明确单盐NaCl对幼苗苗长、根长、根冠比、抗氧化酶、渗透调节物质和丙二醛(MDA)的影响.以E+醉马草(A1)、E--醉马草(A2)、高羊茅-侠客岛(A3)和高羊茅-猎狗6号(A4)为试验材料,分别采用质量分数为0.1％、0.3％、0.5％、0.7％和0.9％的NaCl溶液处理幼苗,测定苗长、根长、根冠比、脯氨酸(proline)和丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性,结合模糊隶属函数评价4种种质的耐盐性,采用主成分分析明确种质幼苗耐盐性的主要评价指标,并以种质幼苗相对胚根长为因变量,NaCl浓度为自变量进行曲线回归分析,确定4种种质的耐NaCl阈值.结果 表明:与对照组相比,幼苗苗长、根长随盐浓度的升高而降低,且重度盐胁迫(0.7％和0.9％)显著抑制幼苗生长(P＜0.05);0.1％和0.3％ NaCl盐胁迫可显著增加幼苗Na+/K+ (P＜0.05);幼苗体内Pro含量、POD和SOD活性随着盐胁迫程度增加呈现出先上升后下降的趋势,且重度盐胁迫(=0.7％)下3者较对照组呈现显著上升的趋势.幼苗体内MDA含量随盐浓度上升而上升,与对照组相比重度盐胁迫下MDA含量显著增加(P＜0.05).综合耐盐性从大到小依次为A1＞A2＞A4＞A3,POD和SOD活性、根长、proline含量为幼苗耐盐综合评价的主要指标.     

商陆口服液的提取工艺研究

为了确定商陆口服液的最佳提取工艺,本试验首先对商陆中商陆皂苷甲(Es A)的含量测定方法进行了研究,然后采用水煎法、水提醇沉法(乙醇终浓度分别为60%、70%、80%和90%)、减压干燥法、渗漉法(乙醇浓度分别为30%、50%、70%、80%和90%)4种提取方法,比较了各提取物中Es A的含量。结果表明:采用C18柱,蒸发光散射检测器进行检测;流动相为甲醇-0.4%冰醋酸溶液(70∶30);流速为1.0 m L/min;柱温为30℃;衰减值(Attenuation)为7;雾化温度(Neb)为45℃;蒸发温度(Eva)为60℃;进样量为10μL;Es A的线性范围在1.03~5.02μg,平均回收率为99.20%,用90%的乙醇渗漉提取效果好。说明Es A含量测定方法稳定可靠,可作为质量控制的指标,提取方法简单易行,提取率高。