瑞氏木霉基因组DNA提取方法比较研究

采用4种常规DNA提取方法提取瑞氏木霉基因组DNA.结果表明EDTA-SDS法和冷冻研磨CTAB法更适合此真菌DNA的提取,试剂盒提取的总DNA纯度和浓度比较高,但是价格昂贵,冷冻研磨SDS法提取的DNA浓度不高,不适合分子生物学操作的要求.     

冷冻原肠中细菌基因组DNA提取方法的建立

为建立冷冻原肠中细菌基因组DNA的直接提取法,采用震荡洗脱、金属网过滤和梯度离心相结合的方法,对2份冷冻原肠样品进行前处理;对经前处理后的原肠样品,采用酚/氯仿法提取细菌基因组DNA,然后进行琼脂糖电泳和OD_(260)/OD_(280)比值测定;以细菌基因组DNA为模板,用PCR技术扩增细菌16S rDNA并构建克隆文库,并从2个文库中各随机挑取3个菌落进行16S rDNA的PCR鉴定和DNA测序。结果显示:样品提取的DNA浓度、纯度较高,OD_(260)/OD_(280)比值介于1.8～2.0;挑取的6个菌落中,1个为阴性,剩余5个为阳性,为肠球菌属(Enterococcus)和魏斯氏菌属(Weissella)的5种细菌。结果表明,本研究提取的原肠细菌基因组DNA质量较好,可用于非培养法研究冷冻原肠中细菌的多样性。本研究解决了因缺乏原肠细菌基因组DNA提取方法,无法进一步应用现代分子生物学方法研究冷冻原肠细菌的多样性、菌群组成结构和动态变化等难题。     

水牛冷冻精液稀释液中添加复合V_B对精子品质的影响

在水牛冷冻稀释液中添加不同浓度的复合VB,检测其对水牛冷冻精液质量的影响。结果显示,在精液冷冻稀释液中添加3mL/100mL复合VB,可提高水牛精液冷冻复苏后的活力和顶体完整率,对精子的质膜完整性和DNA完整性影响不显著。结果表明,在冷冻稀释液中添加一定浓度的复合VB能够提高水牛冷冻精液质量。     

两种动物组织DNA提取方法的比较

本试验以猪耳组织为试验样本,采用酚-氯仿抽提方法[1]和DNA提取试剂盒方法进行DNA提取的对比试验,并通过核酸蛋白定量仪测量了DNA浓度和纯度,并进行了PCR扩增实验。试验表明,两种提取方法都可以进行PCR扩增试验,但采用试剂盒提取方法提取DNA可以直接进行PCR扩增,而酚-氯仿提取法需放置一段时间后效果好,并且采用试剂盒提取的DNA纯度高、速度快、节省耗材、结果稳定、重复性强,适合大量DNA提取试验。     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎冷冻保存技术按其进展分为缓慢冷冻法、快速冷冻法和玻璃冷冻法。玻璃化冷冻法又分为常规细管法和OPS法。本文综述了缓慢冷冻法、快速冷冻法以及玻璃化冷冻法的操作过程及所需的抗冻保护剂，并对各种方法的优缺点进行了初步分析。     

牛胚胎冷冻方法的应用研究

为研究使用常规冷冻法和OPS法对牛体内生产胚胎进行冷冻、保存及移植的效果,在阿克苏市进行了牛胚胎冷冻和移植试验.结果显示,这两种方法生产的冻胚解冻后的移植受胎率分别为28.89%和26.08%,差异不显著.对常规冷冻法和OPS法的冻胚生产费用进行比较.结果表明,OPS法冷冻胚胎比常规冷冻法的步骤简单、费用低,不需要专用...     

蒙古马肠道细菌总DNA提取方法的比较

本试验采集蒙古马新鲜粪便样品,采用酚－氯仿抽提法和2种细菌基因组DNA提取试剂盒法进行样品中细菌基因组DNA的提取。通过DNA浓度和纯度的测定,并将其作为模板扩增细菌16S rDNA V3区特异性片段对提取效果进行比较,从而找出更适合蒙古马粪便中细菌基因组DNA的提取方法。结果显示,3种提取方法得到的基因组DNA均能用于PCR扩增的模板,其中B试剂盒法提取的DNA数量较多,且纯度高,更适合用于提取蒙古马肠道微生物细菌基因组DNA及后续的蒙古马肠道微生物多样性等分子生物学试验。     

蛋白的不同提取方法对瘤胃酶活的影响

反刍动物瘤胃中酶的活性与瘤胃功能息息相关，为了筛选出合适的瘤胃酶提取方法，实验设计了6种活性蛋白提取方法，分别是超声破碎法、常温研磨法、冷冻研磨法、高压破碎法、反复冻融法和蛋白抽提法。结果表明：超声破碎和高压破碎这2种方法可以提取到总量和活性均高的纤维素酶，高压破碎法可以提取到较高淀粉酶总量的蛋白，常温研磨法可以提取到淀粉酶活性和蛋白酶活性较高的蛋白。说明不同的蛋白提取方法对瘤胃不同酶的总量和活性影响不同。     

从绵羊全血提取DNA的改进方法

以小尾寒羊冷冻全血为材料，介绍了提取DNA的改进方法。试验表明，提取的DNA纯度高，产量在正常范围之内，PCR扩增效果良好，可以用于分子遗传学实验。     

牛卵泡卵母细胞的体外成熟和冷冻保存

在简化牛卵母细胞体外成熟的基础上,观察了保护剂、平衡温度、预平衡方法、解冻方法以及冷冻方法对牛卵泡卵母细胞冷冻的影响。结果表明:在体外成熟培养液中添加26.2 mmol/L的NaHCO3和对屠宰场卵巢进行选择更能促进牛卵母细胞的体外成熟;无论是程序冷冻还是玻璃化冷冻,乙二醇(EG)与甘油(GLY)相比更能促进牛卵泡卵母细胞的冷冻效果;在程序冷冻中,冷冻液中添加0.1 mol/L蔗糖比添加0.3mol/L的蔗糖更能促进牛卵泡卵母细胞的冷冻;在玻璃化冷冻中,37℃和25℃的平衡温度比4℃更适合牛卵泡卵母细胞的冷冻;在10%、5%、1%的预平衡浓度之间,5%的预平衡浓度即可达到预平衡的效果;在解冻时,多步脱除保护剂更能保护冷冻的卵母细胞;比较了几种最小样本量(minimum size sample,MSS)玻璃化冷冻方法,解冻成熟培养后的成熟率,拉细毛细玻璃管冷冻法为(41.67±3.19)%,极显著高于未拉细毛细玻璃管冷冻法(glassmicropipette,GMP)的(30.19±1.93)%和固体表面冷冻法(solid surface vitrification,SSV)的(28.33±2.89)%(P<0.01)。     

牛凝固血基因组DNA提取方法的比较及优化

为筛选出一种从牛凝固血中高效获得基因组DNA的方法,本研究选择64个凝固血样,分别进行匀浆破碎和手动剪碎的预处理,结合酚-氯仿抽提和试剂盒提取方法,提取基因组DNA,并选择抗凝血作为参照,对试验耗时、DNA数量和质量进行比较。结果表明:通过对牛凝血块进行匀浆破碎预处理,不仅缩短了蛋白酶K的消化时间,而且获得了高质量基因组DNA,浓度和纯度均达到抗凝血提取效果(P0.05)。酚-氯仿提取法相比试剂盒法,虽然得到更多量的DNA,但是DNA质量下降,而且试验耗时增加。本研究证实,匀浆破碎预处理后的牛凝固血样可以作为高质量基因组DNA的样本来源,并可替代抗凝血,解决生产中抗凝血不易获得和采集的问题。     

天祝白牦牛基因组DNA提取方法的试验研究

以改进的Miller盐析法为基础方法,通过优化操作规程、改进操作步骤等手段,提取纯化了白牦牛抗凝全血样品中的基因组DNA,并对其纯度、浓度进行了检测分析.结果表明:该方法简便易行,所获基因组DNA纯度高,浓度适宜,适用于RAPD、RFLP等遗传多态性的分析研究.     

家蚕胚胎期单卵基因组DNA的快速抽提

本文对用磁珠法抽提家蚕单粒蚕卯基因组DNA进行了探讨。结果表明从催青24h后到收蚁前一天的单卵中所提取的DNA断裂少、纯度高，能够满足特异性引物或随机引物进行PCR扩增的需要。每粒卯可获得100ng以上的DNA，能够进行多次重复检测，完全能够满足蚕种鉴定及纯度检测的需要。     

鹌鹑肠道微生物总DNA的最佳提取方法

为了获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA,试验采用常规的饱和苯酚/氯仿法(方法一)、牛瘤胃DNA的提取法(方法二)和对上述两种方法进行优化后得到的肠道微生物DNA的提取法(方法三)对鹌鹑肠道微生物总DNA进行了提取,并对结果进行了比较。结果表明:应用方法一和方法二提取的DNA浓度比较低,电泳显示样品DNA条带没有方法三明亮;以方法三提取的肠道总DNA为模板,采用细菌通用引物,对其16S rDNA V3可变区进行PCR扩增,得到较清晰的图谱,条带整齐。说明采用方法三提取鹌鹑肠道微生物DNA较完整,可用于后续的分子生物学试验研究。     

本氏针茅ISSR-PCR反应体系的建立及引物筛选

以CTAB法提取的本氏针茅(Stipa bungeana Trin.)基因组DNA为模板,采用正交试验设计和单因素分析相结合的方法,对影响本氏针茅ISSR-PCR反应体系中的DNA、Taq酶、dNTPs、引物和Mg2+进行优化,旨在建立适合本氏针茅ISSR-PCR分析的最佳反应体系。结果表明,在20μL的反应体系中各组分的浓度分别为:DNA(20ng/μL)2.5μL、Taq DNA酶(5U/μL)0.1μL、dNTPs(2.5mmol/L)1.6μL、引物(10μmol/L)2.3μL、Mg2+(25mmol/L)1.4μL、10×Buffer 2.5μL、ddH2O 9.6μL。经过体系验证和引物筛选试验表明该体系适于本氏针茅遗传多样性分析,该体系的建立为本氏针茅种质资源遗传多样性研究提供了理论基础。     

栗蚕基因组DNA提取方法比较试验

栗蚕蛹中含有大量的脂肪和蛋白质类物质,这些物质易与DNA结合形成粘稠的胶状物,影响栗蚕基因组DNA的提取。针对上述问题,本研究采用十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(SDS-PK)消化法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取栗蚕基因组总DNA进行比较试验。结果表明:CTAB法提取的DNA产量高;SDS-PK法提取的DNA质量好。     

一种提取梨组织高质量基因组DNA的新方法

高质量DNA的提取是开展分子生物学研究的重要环节。针对梨组织中含有大量多糖、多酚等影响DNA提取质量的次生代谢产物的特点，本研究以梨叶片、果皮和果肉为材料，开发了一种新的基因组DNA提取方法——N-月桂酰肌氨酸钠法，并分别与常用的试剂盒及CTAB法进行比较分析。对三种方法提取DNA的总量、浓度及OD值等进行检测分析，结果表明：相比试剂盒及CTAB法，N-月桂酰肌氨酸钠法不需水浴加热，步骤少，操作简单，提取的DNA纯度、浓度均有较大提高，并且适用于大片段DNA的提取。因此，N-月桂酰肌氨酸钠法是一种可靠的高效获得梨基因组高质量DNA的新方法。     

全血中DNA的5种不同提取方法比较研究

比较几种从血液中提取DNA方法所需要的时间、样本量、提取的DNA纯度、产量以及成本等。结果表明,几种方法所提取的DNA质量都能达到分子生物学的试验要求,但在DNA的纯度、产量、试验时间和价格等方面存在差别。实验人员可根据自己的实验要求、实验室以及经济条件等选择适当的方法。     

采用改良CTAB法提取柞树(Quercus L.)基因组DNA

为了获得质量较高的柞树基因组DNA,采用经过改良的十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)提取法对几种常见柞树植物进行基因组DNA的提取,所得到的DNA样品经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,纯度较高,D260 nm/D280 nm为1.75~1.80,应用于SSR和RAPD标记分析时,可以获得较好的扩增片段。     

应用系统进化方法评估徐海鸡遗传资源

利用简化基因组SNPs数据分析徐海鸡及周边地方鸡种遗传多样性,为徐海鸡的保护和利用提供支持。收集徐海鸡等13个地方鸡种血液样品,提取基因组DNA,应用简化基因组测序技术进行SNP分型,获取群体遗传学参数,并以邻接法、最大似然法、贝叶斯法构建系统进化树。结果显示:徐海鸡基因组SNPs观测杂合度为0.18,期望杂合度为0.28,在受试地方鸡种中品种内遗传多样性属于中等程度。Mantel测试表明遗传距离与地理距离呈现正相关(P<0.05)。系统进化树显示多数地方鸡种间存在明显界限。研究表明:徐海鸡独立成枝,与其它地方鸡种存在遗传上差别;地方鸡种之间存在有限的基因流;与最大似然法、贝叶斯法相比,邻接法更适合利用简化基因组数据构建系统进化树。