流行性造血器官坏死病病毒抗原捕获ELISA建立

使用差速离心浓缩的病毒免疫山羊,获得高免血清并提取IgG,即为抗流行性造血器官坏死病病毒(EHNV)多克隆抗体。利用纯化的EHNV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经有限稀释法亚克隆,获得杂交瘤细胞株。将杂交瘤接种小鼠诱生腹水获得单抗3A4。以抗EHNV多克隆抗体为捕获抗体,单抗3A4为检测抗体,使用HRP标记的羊抗鼠IgG作为酶标二抗,建立了EHNV的抗原捕获ELISA方法。该方法可检出103TCID_(50)的病毒液上清和0.0056!g的MCP重组蛋白。对纯化的GCRV、IHNV、IPNV、VHSV及SVCV病毒液进行检测,结果均为阴性,未发现交叉反应。本研究建立的EHNV抗原捕获ELISA方法,具有敏感、特异和重复性好的特点。通过应用于人工感染样品和临床样品的检测进一步证实了本检测方法的实用性。     

鼠痘病毒的分离鉴定及检测方法的研究

本实验采用自然感染鼠痘材料,以细胞培养、动物接种分离出一株病毒91-KMPV。通过人工发病、临床病理观察、病毒的电镜观察、多种细胞培养、细胞传代和多次复归本动物、毒力毒价、稳定性试验以及血清学和病毒理化特性试验等证明所分离病毒是痘病毒科正痘病毒属小鼠传染性脱脚病病毒。应用分离到病毒制备抗原及标准血清,建立了HA和HI等检测方法。为该病的监测净化提供一项简便准确的检测方法。     

水貂阿留申病病毒CIEP抗原结合蛋白初探

以水貂阿留申病病毒对流免疫电泳(CIEP)细胞抗原为材料,经酶印迹(Westemblotting)测定,水貂阿留申病病毒CIEI细胞抗原与多克隆阳性血清反应,分子量为60000,50000和25000,而与CIEP阴性的抗水貂阿留申病病毒的单克隆抗体(Y—2—9)反应,分子量为60000,50000.因此初步确定水貂阿留申病病毒CIEP细胞抗原决定族位于分子25000蛋白上.     

用免疫过氧化物酶技术显示死产仔猪的鼠弓形体抗原

现已公认人、幼犬、羔羊、小鼠、牛和猪有先天性弓形体病,其确诊基于弓形体的分离和血清学检查。最近几位学者成功的应用过氧化物酶——抗过氧化物酶方法在福尔马林固定、石蜡包埋的人组织和小动物组织切片上显示了鼠弓形体。本文旨在描述用免疫过氧化物酶技术显示死产和活产仔猪的鼠弓形体抗原。 4块死产仔猪和1块活产仔猪的福尔马林固定、石蜡包埋的组织块来自日本的两个弓形体病爆发区(表1),冲绳的病例由T.Shi-     

应用免疫对流电泳检测家蚕质型多角体病毒(CPV)

对流电泳法(Electro syneresis 以下简称ES 法)是琮脂凝胶内扩散法的一种。它是利用蛋白质带电不同,在通过电流时产生泳动,含于兔血清中的抗体移向阴极一面,而抗原则移向阳极一面,以致在注有抗原、抗体的小孔间形成白色沉降带,以此可检测抗原的存在。应用ES 法可迅速而正确地诊断家蚕的病毒病。中国农业科学院蚕业研究所及浙江农科院蚕桑研究所都已分别报导过家蚕质型多角体病毒(CPV)免疫对电流电泳的试验报告。我们也应用这一方法进一步进行了对家蚕质型多角体病毒检测     

河南省南阳地区黄牛狂犬病防制研究

由河南省南阳地区患“怪叫病”黄牛脑组织分离鉴定了5株狂犬病病毒,建立了检测狂犬病病毒抗原的夹心间接斑点酶联免疫吸附试验、检测狂犬病病毒抗体和中和抗体的夹心阻断酶联免疫吸附试验和微量免疫酶试验.应用所建立的方法,结合小鼠中和试验,对疫区牛、马、猪、羊、犬、猫、鸡、鼠和蝙蝠9种动物的1138份血清标本进行了检测,结果发现阳性率达12.65%,其中疫点内牛、猪、犬、猫和鼠的阳性率更高,为20%左右.根据动物群中较高阳性率,亦即隐性感染动物的存在,提出了南阳地区黄牛狂大病除因疯犬或带毒犬咬伤所致者外,可能还有因其他动物如鼠等咬伤甚至非咬伤感染途径的存在.在确定病性以及上述流行病学调查的基础上,实施了以管(制)、免(疫)、灭(扑杀)为中心的综合防制措施,经3年的工作,收到了明显的防制效果.     

日本乙型脑炎病毒小鼠脑内分布研究

为定位检测日本乙型脑炎病毒(JEV)在试验小鼠脑内分布情况,本研究建立了JEV的小鼠感染模型,取发病死亡小鼠的脑组织制作石蜡切片,利用抗JEV单克隆抗体,采用免疫酶组化方法对抗原进行组织学定位检测。试验结果表明,所建立的间接免疫酶组化方法灵敏度高,特异性好,证明了JEV选择性感染神经元,抗原阳性表达主要集中在脑干、神经节及大脑皮质。     

浅析影响口蹄疫O型液相阻断ELISA实验的因素

正液相阻断ELISA,是检测口蹄疫病毒抗体的国际标准,敏感性高,特异性强,判定结果客观,主要用于检测抗体,评价FMD疫苗的免疫效力,也就是疫苗免疫动物的抗强毒攻击能力。目前,民乐县动物疫病预防控制中心广泛采用ELISA法检测口蹄疫免疫抗体,评价免疫效果,为全县动物疫情预警提供有效依据。1 ELISA实验基本原理ELISA是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,过程包括抗原(抗体)吸附在固相载体上称为包被,加待测抗体(抗原),再加相应酶标记抗体(抗原),生成抗原(抗体)-     

鼠痘病毒的分离鉴定及检测方法研究

实验小鼠是科学研究中最常用、最经济的一类实验动物。鼠痘(Mousepox)即小鼠脱脚病(Ectromelia),则是实验小鼠的一种高度接触性传染病。本病在世界各地的实验鼠群广泛流行,死亡率达95％。1992年,国家科委下达的实验动物微生物检测标准中,明确规定实验用鼠必须排除鼠痘病毒感染。为促进实验动物病毒病的研究,为使用于科研工作的实验动物早日达到标准化,我们对鼠痘病毒的病原形态、理化特性以     

猪对传播流行性出血热作用的研究

应用IFA和免疫酶染色法(IEA)分别对家猪屠宰工人和饲养员及其猪肺组织和血清检测流行性出血热(EHF)病毒抗原与抗体(抗-EHF),结果屠宰工人和饲养员EHF隐性感染率随着工龄和接触时间的增加而上升,呈正相关关系(r=0.95;0.98)。特别是EHF病毒抗原阳性猪的饲养员抗-EHF率高达20％(2/10),而EHF病毒抗原阴性猪饲养员未见感染(0/50);不同疫区猪带毒率和抗-EHF阳性率均为EHF高发病区>中发病区>低发病区;非疫区未见感染。就此认为,在EHF疫区不应低估猪传播EHF的作用,及其流行病学意义,应引起足够重视。     

检测狂犬病病毒抗原的夹心间接Dot—ELISA的建立和应用研究

本研究建立了检测狂犬病病毒抗原的夹心间接斑点酶联免疫吸附试验(SI-Dot-ELISA).本法检出狂犬病病毒抗原的最低浓度为:0.01IU/mL的标准抗原,1:100000 (相当于20 LD_(50))的狂犬病病毒CVS株和鹿8202株的鼠脑悬液,1:400(相当于7906TCID_(50)/mL)的狂犬病病毒SAG株的细胞培养物.对多种健康动物的组织、健康细胞培养物以及犬瘟热病毒、犬腺病毒等检测均为阴性.用SI—Dot—ELISA、夹心间接ELISA(SI—ELISA)和小鼠脑内接种3种方法,检测了388份材料,检出的阳性份数分别为173、171和179,经统计学处理,3种方法在狂犬病病毒抗原的检测上,可以相互代替.甲醛灭活病毒不影响本方法的检测,而加入氢氧化铝胶后的病毒悬液则不能用本法检测.本法适用于狂犬病的诊断、流行病学调查、疫苗效价的测定和实验研究中病毒抗原的测定.     

用ELISA法测定开放饲养鼠群四种病毒抗体的初步报告

为检测开放饲养鼠群有无感染鼠肝炎(MHV)鼠痘(Ect.)仙台病毒(Sendai)和淋巴球脉络丛脑膜炎(LCM)等四种病毒性疾病,在我国我们首先应用了ELISA法测定这四种病毒性抗体。检测鼠群来自北京市三个单位送检的开放饲养小鼠,每个单位20～180只不等,采用SPF小鼠的四种病毒抗体的正常OD值是:Sendai为0.125,Ect为0.135,MHV为0.112,LCM为0.130,乘以2.1倍,作为判定血清学阳性的对照,以阻断试验作验证,用免疫粘附血凝试验(IAHA),单扩血溶(SRH)和血凝抑制试验(HI)作比较,在被检的鼠群中检出的阳性率MHV为25.5％,Sendai为20.24％,Ect为2.7％,LCM为3.4％。     

应用qRT-PCR方法检测鼠痘病毒在小鼠不同组织中的差异分布

鼠痘(mouse pox)是由鼠痘病毒(Ectromelia virus,ECTV)感染实验小鼠引起的一种毁灭性、烈性传染病,为SPF小鼠必须排除的病原之一。本研究基于ECTV主要核蛋白P4b基因片段建立了实时定量PCR方法(real-time quantitative PCR,qRTPCR),用于检测C57BL/6小鼠感染ECTV后心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和皮肤中的病毒载量,并用病理组织学观察验证了qRT-PCR方法的特异性和可靠性。结果表明,所建立的qRT-PCR方法能够准确检测小鼠感染后d5和d7不同组织的病毒载量,d5不同组织中病毒载量低于d7,与病理组织学检测结果一致。本研究建立的qRT-PCR检测方法且具有较高的灵敏性、特异性和可靠性,可用于ECTV感染细胞和组织器官中病毒载量、分布和消长动态的定性定量检测。     

疫情血清学监测的技术支持

血清中和试验 动物受到病毒感染后,体内产 生特异性中和抗体,并与相应的病 毒粒子呈现特异性结合,因而阻止 病毒对敏感细胞的吸附,或抑制其 侵入,使病毒失去感染能力。中和 试验是以测定病毒的感染力为基 础,以比较病毒受免疫血清中和后 的残存感染力为依据,来判定免疫 血清中和病毒的能力。 酶联免疫吸附试验(ELISA) ELISA 是酶联免疫吸附剂测定 的简称。它是继免疫荧光和放射免 疫技术之后发展起来的一种免疫酶 技 术 。 　　　　　　原理 ELISA 的基础是抗原或抗体的 固相化及抗原或抗体的酶标记。结 合在固相载体表面的抗原或…     

犬瘟热病毒间接免疫酶组化检测方法的建立

为对犬瘟热病毒(CDV)进行组织定位检查,本实验利用犬瘟热抗CDV单克隆抗体(MAb),采用间接免疫酶组化法对6只人工感染的比格犬肠组织的病毒抗原进行定位检测。结果表明,利用犬瘟热抗CDV MAb建立的间接免疫酶组化方法具有较高的特异性和灵敏性,可原位检测病犬肠组织中CDV抗原的分布,其抗原的阳性表达主要在小肠绒毛和李氏隐窝的上皮细胞胞浆内,表明CDV主要侵害小肠的粘膜上皮组织。     

盐酸克伦特罗人工抗原及抗体的制备

为了制备盐酸克伦特罗(CL)人工抗原及抗体,试验采用重氮化法将盐酸克伦特罗与经过活化的牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别偶联,合成免疫抗原(CL-BSA)和检测抗原(CLOVA),经紫外光谱扫描对偶联物进行鉴定;用免疫抗原免疫BALB/c小鼠制备盐酸克伦特罗多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体效价。结果表明:盐酸克伦特罗人工抗原合成成功,制备的鼠源多克隆抗体效价达1∶64 000,该抗体可用于下一步试验。     

旋毛虫ES抗原致鼠胸腺淋巴细胞凋亡的初步研究

本试验首次以体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞为实验对象,加入旋毛虫(Trichinella spiralis)肌幼虫ES抗原做刺激物,通过(AO/EB)双荧光染色法和流式细胞术对鼠胸腺淋巴细胞的凋亡水平的检测,进而证明旋毛虫肌幼虫ES抗原能够诱导鼠淋巴细胞发生凋亡.     

圆支清疫苗中猪圆环病毒2型对猪肺炎支原体的免疫增强作用

用相同量猪肺炎支原体(Mhyo)和不同量猪圆环病毒2型(PCV2)混合后的4组疫苗分别免疫BALB/c小鼠、新西兰大耳白兔和健康仔猪,测定小鼠、兔和仔猪血清中PCV2和Mhyo抗体水平,并在仔猪二免后进行Mhyo济南系强毒攻击。结果:小鼠和兔免疫疫苗后产生的Mhyo抗体水平随着疫苗中PCV2抗原含量的增加而提高。仔猪免疫疫苗后,ELISA与IHA检测结果都显示Myho抗体水平随着疫苗中PCV2抗原含量的增加而提高;Mhyo攻毒后肺部病变程度也与疫苗中PCV2抗原浓度呈负相关。以上结果说明PCV2、Mhyo二联疫苗中PCV2全病毒抗原对Mhyo免疫有增强作用,且随着PCV2全病毒抗原含量的增加,Mhyo的免疫保护效果也随之增强,这个结果提示了PCV2抗原对Mhyo抗原的免疫效果有促进作用。     

酶标SPA抑制染色法检测貉细小病毒的研究——(Ⅰ)酶标SPA抑制染色法试验程序的确立

应用感染貉细小病毒(RPV)的72h猫肾传代细胞(F_(81))制做细胞抗原片。利用超迷离心结合蔗糖密度梯度离心法提纯RPV病毒作为免疫用抗原,制备了豚鼠抗RPV高免血消。在酶标SPA染色法的基础上测得高免血清最佳工作范围为160~×、320~×、640~×;PPA的最佳工作效价为40~×;被检样品与标准阳性血清作用最佳温度为37℃,时间为60min。确立了酶标SPA抑制染色法的试验程序。并对有关试剂保存有效期进行了试验测定。     

MD病毒抗独特型抗体的研制

制备鸡马立克氏病病毒(MDV)抗独特型抗体(Ab2),探讨Ab2模拟抗原诱导免疫应答的能力.用MDV免疫SPF鸡,分离提纯鸡抗MD-IgG(Ab1),Ab1免疫BALB/C鼠,用鼠脾细胞与SP2/0细胞制备Ab2杂交瘤细胞株,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,经克隆、纯化2×株抗MDV独特型抗体杂交瘤细胞株(6E5,7A12),其中6E5培养上清、腹水ELISA效价分别为4000×、10000×,免疫20 d攻毒,具有抗MDV感染保护.