NKB及其受体NK3R基因在发情周期不同阶段小鼠下丘脑-垂体-卵巢中的表达研究

为了揭示NKB/NK3R调控雌性哺乳动物生殖激素分泌的作用机制,试验将40只6～8周龄雌性小鼠按照发情周期不同阶段分类,处死后采集丘脑、垂体和卵巢组织,提取RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测发情周期各阶段小鼠下丘脑、垂体和卵巢中NKB、NK3R基因的相对表达量并进行比较分析。结果表明：在发情前期和发情期,小鼠NKB基因的相对表达量均为垂体最高,卵巢居中,下丘脑最低;在发情后期,小鼠NKB基因的相对表达量为下丘脑最高,垂体居中和卵巢最低;在发情间期,小鼠NKB基因的相对表达量为下丘脑最高,卵巢居中,垂体最低。NK3R基因的相对表达量在发情前期、发情期、发情后期和发情间期的趋势一致,均为下丘脑最高,垂体居中,卵巢最低。各组织中,NK3基因的相对表达量均为发情前期最高,发情期居中,发情后期和发情间期较低。在下丘脑中,发情周期不同阶段NK3R基因的相对表达量差异不大;在垂体和卵巢中,NK3R基因的相对表达量均为发情后期最高,发情间期居中,发情前期和发情期较低。提示NKB/NK3R可能参与了雌性哺乳动物发情周期各阶段生殖激素的合成与分泌。     

SHU 9119对小鼠发情周期中Ghrelin表达的影响

为了研究SHU9119与ghrelin之间的潜在的生理学关系,本试验选择4周龄的C57BL/6小鼠下丘脑和卵巢组织为研究材料,对小鼠发情周期中SHU9119介导的ghrelin mRNA在下丘脑和卵巢部位表达水平进行研究。结果表明,正常生理条件下小鼠间情期下丘脑保持较高水平的ghrelin mRNA表达,而在卵巢内其表达水平相对较低;腹腔注射SHU9119(50μg/kg体重)可极显著抑制下丘脑中ghrelin mRNA的表达(P<0.01),同时显著促进小鼠间情期卵巢Ghrelin mRNA的表达(P<0.05)。然而,SHU9119并未引起小鼠发情前期、发情期和发情后期ghrelin mRNA表达量的显著差异。上述结果表明,SHU9119可能通过MC4R系统调节间情期小鼠ghrelin的变化,而不参与其他性周期ghrelin mRNA表达量的相关调控。     

转化生长因子βⅠ型受体基因在敖汉细毛羊不同组织及发情时期卵巢中的表达分析

试验旨在探究转化生长因子βⅠ型受体(transforming growth factor-beta receptorⅠ,TGF-βRⅠ)基因在敖汉细毛羊中的组织表达情况,以及在不同发情时期卵巢中表达量的变化规律,为探讨其与绵羊发情的关系奠定基础。以24只季节性发情的敖汉细毛羊为研究对象,分为乏情期、发情间期、发情前期和发情期4组,每组6只。首先利用实时荧光定量PCR检测其发情期甲状腺、下丘脑、垂体、卵巢、肾上腺、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、肌肉12个组织中TGF-βRⅠ基因的表达情况,其次对4个不同发情时期卵巢TGF-βRⅠ基因的表达量变化进行研究。结果显示,TGF-βRⅠ在各组织中均有表达,在卵巢和甲状腺中表达量最高,极显著高于其他组织(P0.01);在下丘脑、垂体、胰腺、肾上腺、脾脏和肺脏组织表达量较高,显著高于心脏、肝脏、肾脏和肌肉组织(P0.05)。卵巢中TGF-βRⅠ基因在发情前期表达量最高,极显著高于其他3个时期(P0.01),发情间期表达量最低,极显著低于其他3个时期(P0.01)。综上所述,卵巢组织中TGF-βRⅠ基因在发情前期时可能对排卵前卵泡的成熟起促进作用。     

发情周期不同阶段KiSS-1和GPR54 mRNA在小尾寒羊卵巢上表达规律的研究

研究发情周期不同阶段KiSS-1和GPR54 mRNA在小尾寒羊卵巢中的表达规律,为从分子水平阐明小尾寒羊多胎性的奠定基础。将12只雌性小尾寒羊随机分为4组,分别处于发情前期、发情期、发情后期和间情期,每组3只,颈动脉放血致死后采集卵巢,采用实时荧光定量PCR技术研究发情周期不同阶段母羊卵巢上KiSS-1和GPR54基因的表达规律。结果表明:母羊发情周期各阶段卵巢上均有KiSS-1和GPR54基因表达;发情期母羊卵巢KiSS-1基因的表达量显著提高(P<0.01),比发情后期、间情期和发情前期分别提高了1.0、1.7倍和1.4倍,发情周期不同阶段GPR54基因在卵巢上的表达量无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,发情期母羊卵巢上KiSS-1基因的表达量极显著高于发情周期其他阶段,提示卵巢上KiSS-1表达可能参与母羊排卵过程的调节。     

大鼠发情周期中子宫内肥大细胞和组织胺含量变化的观察

采用阴道涂片法鉴定大鼠所处的发情阶段,应用甲苯胺蓝染色观察肥大细胞(MC)在大鼠发情周期不同阶段子宫内的分布、形态和数量的变化规律,应用荧光分光光度计检测大鼠发情周期不同阶段子宫内组织胺(HA)的含量变化。结果显示,在大鼠发情周期中,MC在子宫内不同部位内的分布存在明显的差异,数量依次为:子宫角子宫体子宫颈。大鼠子宫各部位在发情周期各阶段内MC的数量依次为:发情后期(ME)发情前期(PE)发情间期(DE)发情期(E),子宫角内不同生理阶段MC的数量之间差异极显著(P0.01);子宫体、子宫颈内发情后期与发情期内MC数量差异极显著(P0.01),发情间期与发情前期内MC数量差异不显著(P0.05)。子宫各部位在发情周期各阶段内HA的含量依次为:发情后期(ME)发情前期(PE)发情间期(DE)发情期(E),子宫角中的HA含量在发情后期明显高于其他3个时期(P0.05),子宫体和子宫颈内HA含量在发情周期各阶段中差异均不显著(P0.05)。研究表明,根据阴道细胞类型的变化来确定大鼠发情周期的各阶段是可行的。大鼠子宫内MC的数量及形态随发情周期阶段的变化而改变,对子宫的局部免疫具有重要的作用。发情周期子宫内HA含量的变化与MC的变化一致,MC主要通过释放HA发挥调节子宫尤其是子宫角的局部免疫水平的作用,在一定程度上,可以将子宫角组织中MC的数量作为HA含量的指标。     

策勒黑羊发情周期不同阶段卵巢LNC-010801和LNC-008562表达规律的研究

为研究策勒黑羊卵巢组织发情周期LNC-010801和LNC-008562 LncRNA表达规律,以策勒黑羊为实验材料,采集发情周期不同阶段卵巢组织并提取总RNA,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术,分别对LNC-010801和LNC-008562进行检测。结果表明:LNC-010801和LNC-008562在策勒黑羊发情周期不同阶段卵巢组织中均有表达,呈现动态变化趋势。LNC-010801在发情前期表达量最高,显著高于发情期(P0.05)和发情后期(P0.05);LNC-008562在发情期表达量最高,显著高于发情前期(P0.05)和发情后期(P0.05),极显著高于发情间期(P0.01)。这一研究结果可为后续策勒黑羊多胎性状的分子调控机理研究奠定基础。     

湖羊HPG轴组织中LRH-1表达定位分析

为深入了解肝受体类似物-1(Liver Receptor Homolog-1,LRH-1)蛋白在湖羊下丘脑-垂体-卵巢轴组织中的表达分布,本研究应用免疫组织化学和酶联免疫吸附测定方法检测了湖羊母羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫组织中LRH-1的表达。结果表明:LRH-1免疫阳性颗粒在下丘脑和垂体组织的分泌细胞、卵巢卵泡颗粒细胞、输卵管黏膜上皮分泌细胞和子宫腺细胞中均有分布;随湖羊发情周期的变化,下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫组织中LRH-1蛋白表达量差异显著,除下丘脑组织在发情期与间情期间存在显著差异(P0.05)外,其他组织在各阶段间均存在极显著差异(P0.01);发情后期,下丘脑和卵巢组织中LRH-1蛋白表达量相对最高;间情期,输卵管组织中表达量相对最高;发情前期,垂体和子宫组织中表达量相对最高。结果显示,LRH-1蛋白的表达与湖羊HPG轴各组织功能存在相关性。     

转化生长因子βⅠ型受体基因在敖汉细毛羊不同组织及发情时期卵巢中的表达分析

试验旨在探究转化生长因子βⅠ型受体（transforming growth factor-beta receptorⅠ,TGF-βRⅠ）基因在敖汉细毛羊中的组织表达情况,以及在不同发情时期卵巢中表达量的变化规律,为探讨其与绵羊发情的关系奠定基础。以24只季节性发情的敖汉细毛羊为研究对象,分为乏情期、发情间期、发情前期和发情期4组,每组6只。首先利用实时荧光定量PCR检测其发情期甲状腺、下丘脑、垂体、卵巢、肾上腺、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、肌肉12个组织中TGF-βRⅠ基因的表达情况,其次对4个不同发情时期卵巢TGF-βRⅠ基因的表达量变化进行研究。结果显示,TGF-βR Ⅰ在各组织中均有表达,在卵巢和甲状腺中表达量最高,极显著高于其他组织（P<0.01）;在下丘脑、垂体、胰腺、肾上腺、脾脏和肺脏组织表达量较高,显著高于心脏、肝脏、肾脏和肌肉组织（P<0.05）。卵巢中TGF-βRⅠ基因在发情前期表达量最高,极显著高于其他3个时期（P<0.01）,发情间期表达量最低,极显著低于其他3个时期（P<0.01）。综上所述,卵巢组织中TGF-βRⅠ基因在发情前期时可能对排卵前卵泡的成熟起促进作用。     

Smad1基因在敖汉细毛羊发情不同时期卵巢中的表达规律研究

为了探索Smad1 mRNA及其蛋白在敖汉细毛羊不同发情时期卵巢中表达量的变化规律,试验采用实时荧光定量PCR、免疫组化方法分析绵羊不同繁殖状态下(乏情期、发情间期、发情前期、发情期)Smad1基因在卵巢中mRNA表达量的变化规律及卵巢中该基因蛋白的表达,并进行图像分析。结果表明:发情期Smad1基因表达量最高,极显著高于其他三个时期(P0.01);发情前期Smad1基因表达量显著高于乏情期和发情间期(P0.05)。在绵羊不同发情时期Smad1蛋白主要表达于乏情期原始卵泡、次级卵泡的颗粒细胞、发情间期次级卵泡的卵泡膜细胞,在发情前期与发情期卵泡中未见表达。卵巢中Smad1基因可能促进黄体溶解,对卵泡发育、卵子的成熟以及释放起作用,与绵羊发情的启动有一定关系。     

牦牛发情周期中卵巢卵泡发育状况的组织学观察

运用组织学技术对36头处于发情周期的健康成年母牦牛卵巢卵泡的结构与发育状况进行了观察。结果表明，牦牛发情周期中卵巢卵泡发育的组织结构与其他牛基本相似。每对卵巢中原始卵泡数和生长卵泡数在发情前期、发情期、发情后期和发情间期之间差异不显著（P〉0．05）；发情前期的囊状卵泡数与发情期、发情后期和发情间期之间差异不显著（P〉0．05），发情期和发情后期均与发情间期差异显著（P〈0．05）。闭锁生长卵泡数在4个时期之间差异不显著（P〉0．05）；发情期的闭锁囊状卵泡数与其他3期之间差异极显著（P〈0．01），发情前期和发情间期均与发情后期差异显著（P〈0．05）。各级卵泡的闭锁形式各有特点。在生长卵泡、囊状卵泡及相应闭锁卵泡的卵泡膜中均见到了胶原纤维和网状纤维。     

BAD基因在敖汉细毛羊发情不同时期卵巢表达规律及对生殖激素的影响

本实验研究旨在探究BAD基因在敖汉细毛羊中的不同发情时期卵巢中表达量的变化规律以及对生殖激素的影响,为探讨其与绵羊发情的关系奠定基础。首先利用放射免疫方法测定敖汉细毛羊血液中促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)和孕激素(P_4)的浓度,然后利用qRT-PCR检测乏情期、发情前期、发情间期和发情期卵巢BAD基因的表达量变化。结果表明:卵巢中BAD基因在发情前期的表达量极显著高于乏情期、发情期和发情间期(P0.01),在发情期的表达量极显著高于乏情期和发情间期(P0.01),乏情期和发情间期的表达量基本相同(P0.05);E_2和LH浓度在BAD基因表达量最高的发情前期维持较高水平,P_4的浓度维持较低水平。综上可知,BAD基因的表达可能促进了E_2和LH浓度升高,抑制了P_4产生,进而影响细毛羊发情,可为绵羊发情的研究提供借鉴。     

Smad2基因在敖汉细毛羊不同发情时期卵巢中的表达分析

Smad2基因是Smads蛋白家族的成员之一,Smad家族中的信号分子对绵羊的繁殖、卵泡发育有重要影响。本实验选取24只3~4岁健康空怀敖汉细毛羊,采用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织化学技术,测定Smad2基因在绵羊不同发情时期(乏情期、发情间期、发情前期、发情期)的表达量并分析其在卵泡中表达规律。结果表明:Smad2基因m RNA和蛋白均在绵羊发情前期表达量最高,m RNA水平极显著高于乏情期、发情间期和发情期(P0.01);而发情前期蛋白水平极显著高于乏情期和发情期(P0.01),虽高于发情间期,但差异不显著(P0.05);Smad2蛋白主要在卵巢颗粒细胞、卵泡膜细胞以及卵母细胞表达。据此,Smad2基因可能会促进敖汉细毛羊的发情启动。     

发情周期不同阶段牦牛子宫中黄体生成素受体的表达变化

为研究发情周期不同阶段牦牛子宫中黄体生成索受体(LHR)的定位及表达变化,笔者利用免疫组织化学SP法分别检测发情期、发情后期、间情期和发情前期牦牛子宫中LHR的表达,并进行光密度值分析.结果表明,LHR免疫阳性产物在牦牛子宫腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和肌层平滑肌细胞中均有表达;腺上皮细胞、基质细胞和肌层平滑肌细胞中LHR在发情前期和发情期表达最弱,发情后期表达增加,间情期表达最强(P＜0.05);子宫内膜血管平滑肌细胞中LHR的表达在发情期最强,间情期最弱(P＜0.05);血管内皮中LHR在发情期和发情前期表达很强,发情后期和间情期显著下降(P＜0.05).结果表明LHR参与了发情周期不同阶段牦牛子宫功能变化的调控.     

甘加藏羊发情周期腺垂体和血浆中GTH含量动态变化

为了探讨甘加藏羊发情周期腺垂体和血浆中FSH和LH含量动态变化规律及排卵的关系。选取2.5~5岁,健康未孕雌性甘加藏羊30只,采集发情周期各阶段和乏情期腺垂体和血浆,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定发情前期、发情期、发情后期、间情期及乏情期腺垂体和血浆中FSH和LH的含量。结果表明,甘加藏羊发情周期内腺垂体FSH浓度在发情期(6.873IU/L)和发情后期(6.863IU/L)较低,与间情期最大(8.228IU/L)差异显著(P<0.05),发情前期又降低(8.096IU/L);腺垂体LH浓度发情期(9.39IU/L)和发情后期(9.585IU/L)较低,间情期最大(10.629IU/L),发情前期(9.7325IU/L)降低,各时期差异不显著(P>0.05);发情周期内血浆中FSH浓度在发情前期(2.599IU/L)达到峰值,其他时期均较低,发情前期与其他时期差异显著(P<0.05);血浆LH浓度在发情期(3.866IU/L)达到峰值,发情后期(3.179IU/L)和间情期(3.292IU/L)降低,各时期差异不显著(P>0.05);并且FSH和LH在发情周期内均出现4个波峰:乏情期腺垂体和血浆中FSH和LH的浓度均低于发情周期内FSH和LH各自的基础值。FSH和LH含量在垂体和血浆的这些差异性应该是两者协同调控藏羊发情和排卵的主要原因。     

5个繁殖候选基因在香猪卵巢和子宫中的差异表达

本实验旨在明确香猪卵巢转录组测序筛选出的5个候选基因是否对卵巢和子宫有直接的调节作用。采用荧光定量PCR方法,检测发情与未发情期香猪卵巢和子宫中SLPI、INHA、SERPINE1、MSMB和PTGFR基因的组织差异表达。结果表明:SERPINE1基因在不同时期和不同组织中的表达变化不明显;与未发情期相比,INHA基因在发情期香猪卵巢中的表达水平极显著升高(P0.01),SLPI基因在发情期香猪卵巢和子宫中的表达水平分别显著(P0.05)和极显著上升(P0.01),MSMB基因在发情时期卵巢和子宫中的表达量显著降低(P0.05),INHA、PTGFR基因在发情期子宫中的表达量明显减少(P0.05)。结果提示,INHA、SLPI、MSMB基因对香猪卵巢和子宫都有调节作用,而PTGFR仅对子宫有调控作用。     

小鼠卵巢EGFR表达检测及EGF提高小鼠超数排卵效果研究

在检测发情周期不同阶段小鼠卵巢表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的基础上,利用小鼠卵巢组织学、胚胎回收与胚胎体外培养方法,研究超数排卵前腹腔注射表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠超数排卵效果的影响。结果显示:(1)EGFR在卵巢内主要定位于腔前卵泡、有腔卵泡的颗粒细胞和卵丘细胞,间情期、发情前期和发情期小鼠卵巢EGFR阳性反应均强于发情后期。(2)对发情前期和间情期小鼠按照每克体质量5、10、20、40ng的EGF进行腹腔注射,24h后注射孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)进行超数排卵处理。发情前期小鼠在EGF注射后24h,卵巢切面已有较多的有腔卵泡分布,而间情期小鼠直到PMSG注射后24h,卵巢切面上才可观察到较多的腔前卵泡和有腔卵泡,且发情前期和间情期小鼠卵巢切面上有腔卵泡数量呈EGF剂量依赖性增多。(3)小鼠注射20ng/g EGF预处理24h,超排配种后见栓鼠的2-细胞胚胎回收数最高(P0.05);当EGF剂量超过40ng/g时,胚胎回收数降低;发情前期各组小鼠2-细胞胚胎回收数均低于对应EGF注射剂量间情期小鼠组的。(4)各组2-细胞胚胎体外囊胚发育率无显著性差异(P0.05)。研究结果表明,小鼠卵巢组织中EGFR定位于腔前卵泡、有腔卵泡的颗粒细胞和卵丘细胞,间情期、发情前期和发情期小鼠卵巢EGFR阳性反应均强于发情后期的;超排前24h腹腔注射20ng/g EGF,可获显著提高间情期和发情前期小鼠的超数排卵效果,并且不影响胚胎的发育潜能。     

从下丘脑室旁核向背肩胛棕色组织发送投射的谷氨酸能神经元的鉴定

谷氨酸能神经元可抑制摄食并防止肥胖。有证据表明,在缺乏囊泡型谷氨酸转运蛋白2(VGlut2)的小鼠中,重新表达专一蛋白1(SIM1)神经元上的VGlut2可降低采食。然而,VGlut2神经元的位置和轴突投射尚不清楚。因此,本试验探寻了向背肩胛棕色脂肪组织(IBAT)发送神经元投射的上游脑区,检测了VGlut2和黑皮质素4型受体(MC4R)神经元的脑内定位,确认了胰淀素(amylin)对于VGlut2和MC4R免疫阳性神经元表达的调控作用,拓展了VGlut2神经元发送神经支配的大脑区域。结果显示,PVN^VGlut2神经元向IBAT发送密集的神经支配信号。在前皮质杏仁核(ACo)、纹状体(CPu)和海马齿状回(DG)发现VGlut2与MC4R共定位。amylin注射显著促进PVN^VGlut2::MC4R(P=0.004 8)免疫阳性神经元表达,提示VGlut2与MC4R涉及amylin的调节过程。PVN^VGlut2神经元向下丘脑腹内侧核(VMH)、外侧下丘脑(LH)、中脑导水管周围灰质(PAG)和蓝斑(LC)核团发送神经元投...     

BDNF与TrkB蛋白在小鼠子宫和着床前胚胎中表达规律的研究

为了研究BDNF与TrkB蛋白在小鼠发情周期和妊娠早期子宫、输卵管及着床前胚胎中的表达规律,试验采用免疫组织化学方法检测BDNF与TrkB蛋白在子宫和输卵管中的表达,采用免疫荧光技术检测着床前不同发育阶段胚胎中蛋白的表达,并利用图像分析软件对两种蛋白在着床前胚胎中的表达强度进行定量分析。结果表明:BDNF与TrkB蛋白在发情周期及妊娠3.5天和4天子宫腔上皮、子宫腺上皮和血管内皮细胞中表达,在发情周期子宫内膜固有层基质细胞中不表达,但在妊娠3.5天和4天子宫蜕膜细胞中表达,发情前期、发情期和发情后期BDNF蛋白的表达强度高于发情间期;BDNF与TrkB蛋白在妊娠2天输卵管黏膜上皮和血管内皮细胞中表达;两种蛋白在着床前胚胎各发育阶段都有表达,在囊胚期达到最高水平。说明BDNF和TrkB蛋白通过旁分泌或自分泌途径对子宫、输卵管尤其是着床前胚胎发育发挥调控作用。     

甘加型藏羊发情周期阴道细胞变化规律

采用阴道涂片法,观察了8只甘加型藏羊连续2个发情周期阴道细胞涂片,统计分析了发情周期不同时期阴道细胞种类、形态变化特点及其所占比例。结果显示:甘加型藏羊发情周期阴道涂片中主要有副基底层上皮细胞、中间层上皮细胞、表层上皮细胞、不完全角化上皮细胞、完全角化上皮细胞、白细胞和细胞碎片。发情期角化细胞所占比例最高,显著高于发情前期、发情后期和间情期(P0.05);发情前期表层上皮细胞所占比例显著高于其他三个时期(P0.05);间情期和发情后期白细胞所占比例显著高于发情前期和发情期;中间层上皮细胞在各时期所占比例差异不显著(P0.05)。结果表明:根据涂片中阴道细胞种类和各类细胞所占比例的变化特点可以简便、快速准确地鉴定和区分甘加母羊发情周期的不同阶段,阴道凃片是高效、准确的发情鉴定方法。     

发情周期中山羊子宫和输卵管内肥大细胞及组织胺含量的变化

应用改良甲苯胺蓝染色法和透射电镜技术观察了山羊发情周期4个阶段肥大细胞（MC）在子宫和输卵管内的分布、形态及数量变化规律,用荧光测定改良法检测了子宫和输卵管组织中组织胺（HA）含量。结果显示：MC呈圆形、椭圆形或梭形,在子宫内主要分布在肌层,子宫外膜中零星散在,内膜中散在分布于固有层的子宫腺和血管周围,子宫阜和内膜上皮中未发现。输卵管内MC在黏膜皱襞、肌层和外膜中均有分布。MC在发情后期有明显的脱颗粒现象。发情周期中子宫及输卵管MC数量变化为：MC（发情后期）〉MC（发情前期）〉MC（间情期）〉MC（发情期）,子宫肌层MC数量各组间差异极显著（P〈0．01）,子宫固有层和输卵管内无显著变化。子宫角内HA含量在发情后期与其它时期有显著变化（P〈0．05）,子宫体、子宫颈和输卵管的变化不明显（P〉0．05）。