内蒙古呼和浩特地区牛源致病性大肠杆菌的血清型、毒力基因检测及耐药性分析

为鉴定内蒙古呼和浩特地区奶牛肠道致病性大肠杆菌(E.coli)分离株的血清型、毒力基因和耐药性,本研究分别采用接种小鼠试验、玻片凝集试验、PCR方法及药敏纸片法测定E.coli分离株的致病性、血清型分布、8种毒力基因及对20种抗生素的敏感性。结果表明,从内蒙古奶牛场采集的100份粪便样品中鉴定出50株致病性E.coli(50%)。定型的24株致病性E.coli的血清型共10种,以O18、O146和O152为优势血清型,共14株,占定型菌株的58.3%。50株致病性E.coli中,毒力基因irp2、eae A、stx1、stx2和hly A的检出率分别为100%、50%、14%、10%和8%。另外,所有血清型菌株对受试的抗菌药物呈多重耐药性,并且均耐受青霉素、四环素、多西环素、利福平、复方新诺明和阿莫西林6种抗生素,而且全部含有毒力基因irp2。本研究结果为牛源致病性E.coli病的防控和临床用药提供了实验依据。     

鸡致病性E.coli地方株血清型的鉴定、毒力基因及致病性检测

为了研究河北秦皇岛地区鸡致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)地方流行株的优势血清型、毒力基因和致病性,本研究采用常规鉴定方法和16SrRNA PCR方法,从采集自河北秦皇岛地区不同养鸡场的83份病鸡组织中分离鉴定出56株E.coli。人工感染1日龄雏鸡试验表明,46株分离株为致病性E.coli。采用玻片凝集试验、PCR方法分别测定致病性E.coli分离株的血清型分布和16种毒力基因携带情况。结果显示,定型的42株致病性E.coli分离株包括11种血清型,以O7 8、O89、O142及O1为优势血清型;46株致病性E.coli分离株中以irp2、fuyA、ompT、Iss a、iutA、iroN和hlyF毒力基因检出率较高,在89.1%~100.0%,其他毒力基因检出率为22.0%~72.0%。选择优势血清型代表株QH1(O78)、QH1(O89)、QH1(O142)和QH1(O1)人工感染1日龄雏鸡,计算半数致死量(LD50),确定其致病性。结果表明,QH1(O78)株致病性最强,对1日龄雏鸡的LD50为3.16×106 CFU/mL;对14,49日龄雏鸡的LD50分别为1.07×107,5×108 CFU/mL。本研究为河北秦皇岛地区鸡致病性E.coli地方流行株防控提供试验依据。     

致狐狸肺炎大肠杆菌血清鉴定与毒力基因检测

为了确定狐狸肺炎源致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)流行血清型与毒力基因的携带情况并分析其相关性,2016—2017年采集河北省部分地区患肺炎死亡的狐狸的肺脏、心血等组织142份中分离到了105株E.coli,且RT-PCR检测犬瘟热病毒为阴性,人工感染小鼠致病性试验结果显示105株分离菌株中77株为致病性E.coli。采用玻片凝集试验和PCR方法分别检测77株致病性E.coli血清型和毒力基因,结果显示:77株致病性E.coli有9种血清型,其中以O1、O8、O78、O12为流行的优势致病血清型,77株致病性E.coli携带14种不同毒力基因,以irp2、fyuA、papC、fimC、iucD^a、colv、hlyF、ompT 8种毒力基因检出率较高,在32.5%～98.7%之间,其余毒力基因检出率较低。狐狸肺炎源致病性E.coli的优势血清型携带的毒力基因较多,至少携带9种毒力基因,流行的优势血清型与毒力基因之间具有一定的相关性。狐狸肺炎源E.coli流行血清型代表株TS(O1)1、QH(O8)2、QH(O78)3、TS(O12)4均对狐狸很强的致病性。本试验为狐狸肺炎源致病性E.coli防控提供了参考依据。     

致蛋鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌分子分群、耐药表型及耐药基因型检测与分析

为分析邢台和秦皇岛地区致蛋鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌(E.coli)分离株的分子分群情况及耐药表型和耐药基因型之间的相关性,本研究采用PCR法和96孔板微量肉汤稀释法分别对临床分离的42株致鸡卵黄性腹膜炎E.coli的系统进化分群、耐药基因和12种抗菌药物耐药表型进行检测。结果显示,42株分离菌株中属于A、B1、B2、D群的分别有7株、9株、14株、12株,以B2+D群流行为主;42株分离菌株对12种抗菌药物耐药性严重且呈现多重耐药性,其中对阿莫西林-克拉维酸、磺胺间甲氧嘧啶、多西环素等9种药物耐药率在45.24%以上,对其它药物耐药率在19.04%～38.10%,耐12种、9种抗菌药物分离菌株最多,分别占分离菌株的19.05%、16.67%;42株分离菌株中耐药基因tetA、Sul1、TEM、Sul2、mcr-1、floR、SHV、tetR检出率在59.52%以上,其它耐药基因检出率为14.29%～38.10%;ESBLs类、四环素类、喹诺酮类、头孢菌素类、磺胺类、多肽类和酰胺醇类7类抗菌药物的耐药表型和耐药基因型符合率在52.6%以上,其中酰胺醇类、多肽类的耐药表型与耐药基因型符合率为100%。本实验为致蛋鸡卵黄性腹膜炎E.coli防控及临床用药提供参考。     

河北地区鸡源致病性大肠杆菌毒力基因检测与耐药性分析

为分析河北地区鸡源致病性大肠杆菌(E.coli)毒力基因的携带情况及其与耐药性的相关性,本研究采用PCR方法和K-B纸片法,测定了2013年~2016年从河北省蛋鸡场分离的104株致病性E.coli的19种毒力基因及其耐药性情况。结果显示,从104株致病性E.coli中检出16种不同的毒力基因,总检出率为84.2%(16/19),其中毒力基因irp2、fyuA、ompT、iucD~a、colv、tsh的检出率均在90%以上,毒力基因iroN、fimC、papC、hlyF、ECs370、ECs3737的检出率在62.5%~88.5%,iucA、astA、vat和iss毒力基因的检出率均低于60%,Ler、eaeA和sfa毒力基因未检出;E.coli分离菌株对20种抗菌药物呈现出多重耐药性,其中耐11~14种抗生素最多,占总分离菌的50.96%(53/104),对四环素、阿莫西林、氨苄西林、复方新诺明有较高的耐药率,分别为99.04%、96.15%、92.31%、91.35%;采用SPSS18.0软件统计学方法分析显示,分离的104株鸡致病性E.coli携带的毒力基因和耐药性两者之间不存在明显的相关性。本研究为河北地区鸡致病性E.coli的防控提供科学依据。     

林麝肺源致病性大肠杆菌分离鉴定及毒力基因PCR检测

为鉴定引起林麝肺炎的病原,本研究采用常规鉴定方法和16S rRNA PCR方法从94份患肺炎的林麝肺组织病料中分离鉴定出30株大肠杆菌(E.coli)分离株。小白鼠感染试验表明,30个分离株均为致病性E.coli,对小白鼠的致死率为100%。通过PCR方法检测这30株林麝肺源致病性E.coli分离株的10种毒力基因结果表明,其中ompA毒力基因检出率为80%,显著高于其sat(36.67%)、vat(26.67%)和iucDa(23.33%);而neuC、sitD ep.a、sfa/focCD、afa/draB、iha和sitD chr.毒力基因的检出率均为阴性。结果提示结合常规鉴定方法,16SrRNA PCR可作为临床快速检测林麝肺源致病性E.coli的有效方法。对林麝肺源致病性E.coli毒力基因的检测及鉴定,为进一步研究林麝肺源致病性E.coli的致病机理奠定了基础,同时为防治林麝E.coli性肺炎提供了依据。     

云南撒坝猪源大肠杆菌优势血清型强毒力岛的检测及其致病性

为研究撒坝猪大肠杆菌强毒力岛(HPI)的致病性,对撒坝猪致病性大肠杆菌进行了分离和血清型鉴定,获取优势血清型,采用PCR检测HPI,进行同源性比较,并通过耐药性试验和致病性试验对分离菌株与HPI的相关性进行分析。结果显示:分离得到101株大肠杆菌,确定血清型84株,其中O_3、O_4、O_(24)为优势血清型;HPI阳性率为88.64%,与GenBank登录的参考序列同源性比较大于99.3%;氨基糖苷类药物耐药性试验结果显示分离菌株普遍耐药,而HPI阳性株耐药性强,并检出含aac(3)-Ⅱa基因12株,含有aac(6′)-Ⅰb基因21株;致病性试验表明含irp2的菌株致病性强,而具有fyuA-irp2基因簇的菌株致病性更强。结果表明:HPI对大肠杆菌的毒力有增强作用。     

致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌的分离与16SrDNA的鉴定

从鹅卵黄性腹膜炎临床病例中采集样品,分离病原进行一系列生化鉴定,共分离得到7株致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌,编号为E0238、E0239、E0240、E0453、E0454、E0241、E0245。O血清型鉴定分属于O2、O21、O37、O1、O24、O24、O148。利用16SrDNA扩增试剂盒对随机选取的3株细菌进行PCR扩增,并将PCR产物序列与GenBank中的E.coli16SrDNA进行序列比对,结果显示分离细菌与大肠杆菌的同源性达99%以上。     

宠物源大肠杆菌的血清型和毒力基因及耐药性调查

为研究宠物源致病性大肠杆菌(Escherichia coli)的血清型、毒力基因和耐药性之间的相关性,本研究由健康和患病犬、猫直肠拭子样品中分离177株E.coli,并采用玻片凝集法鉴定其血清型,结果显示分离株中定型菌株135株,分别属于20个不同的血清型,其中O1、O2和O8为主要的流行血清型。PCR方法检测11种毒力相关基因,并采用琼脂稀释法测定分离菌株对14种抗菌药的敏感性,结果表明3个血清型的菌株拥有相似的耐药表型,但毒力基因谱不同。62%的分离菌株携带fimH基因,并且毒力基因组合iroN+hlyF、iroN+fimH和traT+sitA比较流行。55%的O1血清型携带fimH基因,并且多数耐受四环素、多西环素、头孢噻吩和庆大霉素;20.8%的O2血清型菌株携带traT和sitA基因;50%的O8血清型携带traT和fimH基因。3个血清型分离菌株多数对安普霉素和阿米卡星敏感。     

肉鸡源致病性大肠埃希菌中β-内酰胺类抗生素耐药基因的检测

为了解大型肉鸡养殖场致病性大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)对β-内酰胺类抗生素中的头孢菌素类抗生素的耐药性变化,以及β-内酰胺酶耐药基因的携带情况及耐药基因与耐药性的相关性,从陕西省的部分规模化养鸡场的病、死鸡中分离鉴定并保存108株致病性E.coli。采用K-B药敏纸片法检测致病性E.coli分离株对7种β-内酰胺类药物的药敏性,PCR方法检测3种β-内酰胺酶耐药基因,用DNA Star软件对获得的耐药基因序列与GenBank中的相关序列进行比对。结果显示,鸡源致病性E.coli分离株对头孢派酮、头孢他啶、头孢噻肟、头孢唑啉、头孢曲松、头孢呋肟、头孢噻吩的耐药率分别为83.3%、18.5%、72.2%、92.6%、88.9%、90.1%和95.7%。三重以上耐药菌株占88.9%。β-内酰胺酶基因tem和ctx-m的检出率分别为98.1%和74.1%,未检测到shv基因。结果表明,快大型肉鸡致病性E.coli对β-内酰胺类抗生素的耐药性普遍存在,以多重耐药为主。耐药基因tem和ctx-m的检出率与其耐药性呈正相关。     

鸡源致病性大肠杆菌的耐药基因PCR检测

鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli,E.coli)某些血清型菌株所引起的一类疾病的总称,是危害养鸡业主要细菌性疾病。大肠杆菌血清型众多,且易产生耐药性。鸡致病性大肠杆菌的耐药性与本身携带的耐药基因具有一定的相关性。本实验临床分离5株鸡致病性大肠杆菌,用PCR方法对其四环素类药物的耐药基因tetA和tetB分布进行了检测,结果显示,临床分离5株鸡致病性大肠杆菌均携带检四环素类药物的耐药基因tetA和tetB检出率均为100%,因此,证实了说明临床分离5株鸡致病性大肠杆菌对四环素类药物存在很强的耐药性。     

仔猪腹泻致病性大肠杆菌分型鉴定及耐药性分析

为了解贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌流行情况及耐药性变化,本研究运用凝集试验、PCR和药敏纸片琼脂扩散法等方法对分离的78株致病性大肠杆菌进行血清型、毒力基因及耐药性分析。结果显示,78株致病性大肠杆菌以O138、O87血清型为主,占定型菌株的60.8%;其中62株致病性大肠杆菌检出毒力基因,检出率为79.5%,可分为8种毒力基因类型,分属肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)和肠聚集性大肠杆菌(EAEC),毒力基因eaeA、elt和escV检出率较高,分别为38.5%、28.2%和21.8%;分离到的致病性大肠杆菌对β-内酰胺类药物高度耐药,均为多重耐药株,耐药种类可达8种以上。结果表明,当前贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌的毒力基因检出率较高且基因型复杂,耐药性严重。本试验结果可为规模化养猪场防控仔猪腹泻提供基础资料及理论依据。     

牛乳房炎致病性大肠埃希氏菌耐药性、毒力基因与生物被膜分析

为分析宁夏、甘肃部分地区奶牛乳房炎致病性大肠埃希氏菌(E.coli)耐药性、耐药基因、毒力基因、生物被膜及系统发育分型，对临床乳房炎奶牛乳样中分离鉴定的54株E.coli用肉汤稀释法、聚合酶链反应(PCR)和结晶紫染色法，对其进行耐药性、耐药基因、毒力基因、系统发育分型及生物被膜检测。结果表明，54株E.coli对头孢噻肟耐药率高达100%,对氨苄西林、四环素、氟苯尼考、庆大霉素、头孢吡肟、替加环素、恩诺沙星，耐药率依次为74.07%、57.40%、24.07%、18.51%、11.11%、11.11%、5.56%,对美罗培南均表现为敏感；β-内酰胺类耐药基因中bla_CTX基因检出率最高94.44%,bla_TEM基因检出率为33.33%;四环素类耐药基因中tetB检出率为55.56%,tetA、tetC检出率为1.85%、3.7%,耐药基因高检出率与耐药性表现一致。毒力基因检测结果显示，菌毛黏附素fasA为31.48%,α溶血素hlyA为16.67%,志贺毒素stx1为7.4%;系统发育分型结果显示A型是该地区主要的流行菌株，其携带毒力因子的...     

仔猪腹泻致病性大肠杆菌分型鉴定及耐药性分析

为了解贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌流行情况及耐药性变化,本研究运用凝集试验、PCR和药敏纸片琼脂扩散法等方法对分离的78株致病性大肠杆菌进行血清型、毒力基因及耐药性分析。结果显示,78株致病性大肠杆菌以O138、O87血清型为主,占定型菌株的60.8%;其中62株致病性大肠杆菌检出毒力基因,检出率为79.5%,可分为8种毒力基因类型,分属肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）和肠聚集性大肠杆菌（EAEC）,毒力基因eaeA、elt和escV检出率较高,分别为38.5%、28.2%和21.8%;分离到的致病性大肠杆菌对β-内酰胺类药物高度耐药,均为多重耐药株,耐药种类可达8种以上。结果表明,当前贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌的毒力基因检出率较高且基因型复杂,耐药性严重。本试验结果可为规模化养猪场防控仔猪腹泻提供基础资料及理论依据。     

水貂源致病性大肠杆菌生物被膜形成能力、耐药性及毒力岛基因检测与分析

为探索水貂肠道致病性大肠杆菌(E.coli)生物被膜(BF)形成能力、耐药性、毒力岛基因分布及其之间可能存在的相关性,本研究对收集的临床分离鉴定的54株致病性E.coli,采用结晶紫染色定量法测定体外BF形成能力,K-B法药敏试验检测对10种常见抗菌药物的敏感性,PCR检测毒力岛代表基因。结果显示,54株E.coli BF形成阳性率为90.7%,以强阳性为主;分离株对氨苄西林、环丙沙星、青霉素和四环素的耐药率分别为100%、97.5%、92.5%和90%,对多黏菌素B的耐药率最低为17.5%,多数菌株呈现多重耐药,其中对6种以上抗菌药物耐药的占92.6%。毒力岛基因irp2和eae阳性率均为7.4%,未检测到SGI基因。这些分离株普遍具有较强BF形成能力,并呈现多重耐药性,BF形成能力与菌株对呋喃妥因、环丙沙星及氟苯尼考的耐药性呈正相关,但未发现和毒力基因分布率存在明显相关性。     

貉源多杀性巴氏杆菌分离、鉴定及特征分析

为了鉴定引起貉呼吸道疾病的病菌并分析其生物学特征，2018—2020年采集河北地区养殖场中患呼吸道疾病貉的咽拭子、病死貉肺脏心血等病料组织291份，采用分离培养、形态学观察、生化鉴定及PCR等方法对多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,PM)进行鉴定，采用人工感染小鼠试验、PCR方法和K-B药敏纸片法分别检测PM的致病性、荚膜血清型、毒力基因及耐药性，根据致病性、荚膜血清型和毒力基因携带情况选择代表株，并检测其半数致死量(LD₅₀)。结果显示，分离得到了163株PM,其中94株能引起小鼠的死亡，其死亡率在40.0%～100.0%之间；94株致病性PM属于4种血清型，以荚膜血清A型(31.9%),荚膜B型(25.5%),荚膜D型(37.2%)为优势流行血清型；94株PM毒力基因psl、exbD、exbB、fimA、oma87、tonB、sodA、fur、sodC、plpB、hgbA、hgbB、ompA、ompH、oxA、pfhA检出率在50.0%～100.0%之间，其他毒力检出率在34.0%～48.9%之间，致病性菌株与携带的毒力基因具有一定相...     

广东屠猪肉样品中大肠杆菌耐药性与毒力特征的分析

为分析广东地区屠猪肉中大肠杆菌(E.coli)药物敏感菌株的血清型、毒力基因和系统进化背景,本研究从屠猪肉样品中分离出112株E.coli,采用玻片凝集法鉴定血清型,琼脂稀释法测定10种抗菌药的敏感性,PCR方法检测7种毒力相关基因,多重PCR方法进行系统进化背景判定。结果显示,112株E.coli中,定型菌株95株,分别属于15种血清型,其中O65、O131、O8和O158为优势血清型。几乎所有菌株对氟苯尼考、多西环素和四环素高度耐药,而对头孢曲松高度敏感,其中多重耐药菌株多数耐5种以上药物,常见的多重耐药表型是氟苯尼考/氯霉素/多西环素/四环素/氨苄西林。PCR鉴定结果表明,含有毒力基因的菌株中38%至少具有两个毒力基因,其中EAST1+Stx2e和hlyF+Stx2e比较常见。比较常见的毒力基因为Stx2e和EAST1,STb基因仅在一株菌中检测到。多重PCR鉴定结果显示,屠猪肉样品中E.coli主要分布为共生型的A组和B1组。本研究为大肠杆菌病的控制和合理使用抗生素提供实验依据。     

鸡胚源大肠杆菌的分离鉴定及其致病性和耐药性分析

为了解鸡胚来源大肠杆菌的致病性和耐药性情况，本试验对山东省某白羽肉鸡孵化场6个不同批次种蛋孵化后随机抽检的174枚啄壳未出壳死胚的卵黄和胎粪进行了大肠杆菌分离。通过细菌培养、形态观察、生化试验方法鉴定大肠杆菌；通过小鼠攻毒试验和毒力基因PCR检测确定大肠杆菌分离株的致病性；利用纸片扩散法药敏试验检测大肠杆菌分离株的耐药性。结果显示，共分离鉴定大肠杆菌28株；小鼠攻毒试验结果显示，27大肠杆菌分离株对小鼠的致死率达到了50.0%以上，其中有24株超过了83.0%;在检测的14种毒力基因中，papA、papC、eaeA和vat四种基因未检出，fimC检出率最高(85.7%),另外9种毒力基因检出率介于3.6%～64.3%;菌株的致病性与携带的毒力基因数量大致呈正相关；耐药性检测结果显示，大肠杆菌分离株对10种抗菌药物具有不同程度的敏感性，耐药率介于17.9%～89.3%。结果表明，本试验分离的鸡胚源大肠杆菌绝大多数具有致病性，对临床常见抗菌药物存在不同程度的耐药。本试验结果为种鸡场加强大肠杆菌垂直传播的管理和控制以及临床用药的选择提供了参考依据。     

临床腹泻肉羊源大肠杆菌流行病学调查及耐药性分析

为了了解江苏省肉羊腹泻源致病性大肠杆菌毒力基因分布情况,并与相应的大肠杆菌O抗原型进行比较和分析其耐药性,试验采集江苏省部分地区24个肉羊养殖场临床腹泻样品75份,运用PCR技术、玻板凝集试验和药敏纸片琼脂扩散法对56株致病性大肠杆菌分离株进行毒力基因、血清型及耐药性分析。结果表明:56株分离株可分为11种不同毒力因子组合,O73为优势血清型。致病性大肠杆菌分离株对磷霉素、多黏菌素B比较敏感,敏感比例分别为85.71%、76.79%。耐药性最强的是强力霉素,耐药比例为94.64%;其次是四环素,耐药比例为78.57%。说明目前江苏省规模化肉羊养殖场致病性大肠杆菌的毒力基因检出率较高且基因型复杂,耐药性严重。     

四川阿坝州牦牛源溶血性大肠杆菌血清型鉴定及毒力相关基因检测

为了解牦牛源溶血性大肠杆菌血清型及毒力相关基因,本研究从四川阿坝州采集的牦牛鼻腔棉拭子中分离鉴定溶血性大肠杆菌,并通过玻板凝集结合试管凝集试验鉴定其血清型,采用PCR方法检测大肠杆菌的4个溶血素基因及其它7个毒力相关基因。结果显示,从临床健康的牦牛鼻腔中分离鉴定出74株溶血性大肠杆菌,分离率为19.2%(74/386)。O血清型鉴定结果显示,74株牦牛源溶血性大肠杆菌中已确定O血清型的菌株有60株,共24种O血清型,其余14株未能定型。PCR检测与溶血素相关的4个基因携带率分别为96.0%(hly A)、86.5%(hly E)、14.9%(ehly)和2.7%(ehx);有4种溶血素基因组合,分别为hly A~+(96.0%),hly E~+(86.5%),hly A/hly E双阳性(80.9%),ehx/hly E双阳性(2.7%);其它毒力相关基因的检出率分别为93.2%(irp2)、93.2%(fyu A)和2.7%(stx2);LT、STa、STb和K99基因未检出。研究结果表明,溶血性大肠杆菌存在于临床健康牦牛鼻腔内,血清型复杂且无优势血清型,大肠杆菌溶血素相关基因和高致病性毒力岛相关基因携带率高。本研究首次对四川阿坝州牦牛源溶血性大肠杆菌的血清型和毒力相关基因进行了研究,提示在牦牛中存在溶血性大肠杆菌的潜在威胁。