应用PCR技术对广西规模猪场母猪流产病料主要疫病混合感染的流行病学调查

应用PCR和RT-PCR技术,对2005-2006年送检的广西22个规模猪场的母猪流产病料176份进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）混合感染情况的调查。结果,176份病料中检出CSFV阳性样品21份,阳性率11.9%,PRRSV阳性样品37份,阳性率21.0%,PRV阳性样品14份,阳性率8.0%,PPV阳性样品35份,阳性率19.9%;其中有45份样品存在不同程度的混合感染,混合感染阳性率达25.6%。结果表明,我区规模猪场母猪流产病料CSFV、PRRSV、PRV和PPV的感染和混合感染情况比较严重,提示广西近年来母猪发生繁殖障碍性疾病的病因与CSFV、PRRSV、PRV和PPVSV的感染密切相关,是今后广西规模猪场重点防范的主要疫病。     

广西猪繁殖与呼吸综合征病毒流行株的分子流行病学调查及防控策略

为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异情况和发展趋势,通过RT-PCR方法,对2015年1-8月份采自广西省各规模猪场的疑似样品进行PRRSV检测,并对阳性病料进行基因测序分析。结果显示:84份疑似样品中有40份检测为阳性,阳性率为47.6%,通过完整的ORF5基因序列遗传进化分析表明,广西地区流行毒株主要为美洲型PRRSV,且均与高致病性PRRSV高度同源。广西省各规模猪场毒株与2015年7月份采自广东肇庆某规模猪场的PRRSV分离毒株间的同源性均较低,经序列对比发现,广东肇庆分离毒株与美洲流行毒株NADC 30高度同源。结果表明,广西地区主要流行毒株为美洲型高致病性PRRSV毒株,且与美洲流行毒株NADC30同源性较低,但广东地区已出现美洲流行毒株NADC30,提示广西地区需加强对PRRSV流行及变异的监测,以及采取有效防控策略的必要性。     

广西猪繁殖与呼吸综合征病毒感染状况调查

采用RT-PCR技术,对2004年1月至2005年4月期间,广西13个市104个疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪场,无菌采取231头病、死猪的组织病料(肺脏、淋巴结、脾脏)进行了病毒检测。同时,对鉴定为PRRSV阳性的组织病料和猪场进行了猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,以确定猪群中PRRSV与PCV2、CSFV和PRV混合感染情况。结果从12个市的115份组织病料中检出PRRSV,病料的平均阳性率为49.78%(115/231),猪场的平均阳性率为61.54%(64/104),不同地市有一定的差异。PRRSV与PCV2、CSFV和/或PRV二重或多重混和感染的组织病料总数为53份,猪场总数为39个,混合感染的组织病料和猪场的总阳性率分别为22.94%(53/231)和37.50%(39/104)。混合感染的组织病料占PRRSV阳性组织病料的46.09%(53/115),混合感染的猪场占PRRSV阳性猪场的60.94%(39/64)。其中以PCV2和PRRSV混合感染的组织病料和猪场数最多。由此可见,PRRSV感染在广西猪场已普遍存在,与其他病毒混合感染现象逐渐趋向复杂化。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及流行病学调查

应用RT-PCR技术,对广西南宁、玉林、来宾、贵港、柳州、钦州、防城港、崇左、贺州、桂林、广东、海南部分地区等十几个地区发生疑似PRRSV感染的28个猪场送检的264份病死猪的肺脏、脾脏、淋巴结等病料进行猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的检测;共检测出94份阳性病料,阳性率为35.6%;同时利用PRRSV间接ELISA检测试剂盒检测了2005～2007年期间48个猪场875份血清样品,检测结果显示：有39个猪场感染了PRRSV,感染率为81.3%,有338份血清存在PRRSV阳性抗体,阳性率为38.6%。对阳性病料处理后接种Marc-145细胞,出现明显细胞病变（CPE）,继续扩大培养,收获并分离病毒,-70 ℃保存备用。流行病学调查结果表明,广西及周边地区普遍存在PRRSV的感染,且感染率较高,猪繁殖与呼吸综合征已经成为危害本地区养猪业的重要疫病。     

对部分不明原因高热发病猪场的主要疫病调查报告

2007年以来广西一些猪场出现不明原因高热发病和死亡率的现象,为了解其病因,我们应用PCR和RT-PCR技术,对来源于8个发病猪场的89份病料进行猪瘟病毒(CsFV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)猪伪狂犬病(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)的调查.结果发现89份病料中检出CSFV阳性样品8份,阳性率8.99%,PRRSV阳性样品43份,阳性率48.31%;PRV阳性3份,阳性率3.37%,PCV-2阳性24份,阳性率26.97%;同时存在CSFV、PRRSV、PRV和PCV-2不同程度的混合感染现象,其中PRRS和PCV-2混合感染最为严重,阳性率达7.87%.调查结果表明,我区部分不明原因高热的发病猪场均不同程度存在CSFV、PRRSV、PRV和PCV-2感染的现象,特别是PRRSV感染情况极为严重,提示PRRSV可能是我区一些猪场出现不明原因高热发病死亡的主要原因.     

2016—2018年广西猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查和PRRSV ORF5基因的遗传变异分析

为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行和变异情况,试验应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法对2016—2018年广西14个地区规模化猪场的1 564份主要脏器进行了PRRSV检测,选取部分阳性样品进行ORF5基因的扩增并进行序列分析。结果表明:共检测出PRRSV阳性样品467份,阳性率为29.9%。在广西14个地区规模化猪场送检的样品中均能检测到PRRSV。从年份上看,2016年的PRRSV阳性率最高,为43.9%;2017年为26.9%;2018年最低,为23.7%。获得的25条PRRSV ORF5基因序列中有1株与NADC30株同源性较高,1株与GM2株同源性较高,其余23株均与高致病性PRRSV同源性较高。在25株PRRSV中有21株与TJM、JXA1、HuN等高致病毒株亲缘关系较近,并位于同1个分支;2株处于经典株和变异株之间,分别形成2个分支;1株与NADC30株亲缘关系较近,位于同1个分支;1株与GM2株亲缘关系较近,位于同1个分支。PRRSV ORF5基因编码氨基酸序列分析结果表明,25个毒株均为毒力较强的野毒株。说明广西地区仍以高致病性PRRSV为主要流行毒株,但2018年新发现类NADC30毒株和类GM2毒株的流行。     

规模化养猪场猪瘟、猪生殖-呼吸综合征、猪伪狂犬病监测及原因分析

采用夹心ELISA对我省12猪场60份猪组织样品进行猪瘟抗原检测，其中阳性样50份，占83.3%，分布于10猪场。用PRRSV抗体ELISA对18猪场518份猪血清样品进行抗体检测，其中阳性样品213份，占41.1%，分布于13个猪场。用PRV-gpI-抗体ELISA对26个猪场514份猪血清样品进行抗体检测，其中阳性样品268份，占52.1%，分布于21个猪场。     

2015—2019年广西部分猪场病死猪5种病毒的抗原检测

为了解广西地区规模猪场猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）5种病原的感染情况,采用RT-PCR/PCR方法,对2015年3月—2019年3月采集自广西14个地市1 010个不同规模类型猪场的2 104份病料进行5种病原的核酸检测,并对检测结果进行统计分析。结果显示：2015—2019年5种病原在广西14个地市的规模猪场中均有检出,其中PRRSV、PEDV、PCV2检出率较高,分别为29.88%、27.75%和24.60%,与其他病原相比差异显著（P<0.05）,南宁、玉林、桂林、百色、柳州、贵港、崇左、北海等生猪主产区以及中小型猪场的病原检出率相对较高（P<0.05）;季节因素对PRRSV和PRV感染影响较大,分别在秋季和春季检出率显著增加（P<0.05）;混合感染现象较为普遍,以PCV2分别与PRRSV、CSFV和PRV的二重感染为主（P<0.01）。结果表明,广西生猪主产区以及中小型猪场的5种病原感染情况较为严重,尤其是PRRSV、PEDV和PCV2,需加强免疫,重点防控。本检测摸清了广西地区引起猪群发病的主要病毒性病原及其流行特点,对于广西地区主要猪病的重点防控提供了参考。     

华东地区部分猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒检测及其ORF5遗传变异分析

为了实时掌握猪场PRRSV的感染情况,对其遗传变异趋势进行跟踪分析,本文利用RT-PCR方法对2011—2013年采自苏北地区和上海浦东地区部分猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪的血清进行PRRSV检测,并对ORF5基因进行扩增测序,分析PRRSV ORF5的遗传变异情况。试验共采集样本328份,其中苏北某猪场258份,检测阳性样本为113份,浦东地区70份,阳性样本17份。每次检测选择一个样品进行ORF5测序分析。结果表明,本文所获得的15株分离株的ORF5序列与美洲型毒株氨基酸同源性为80.2%⁹9%,与欧洲型毒株同源性为53.4%99%,与欧洲型毒株同源性为53.4%⁶0.1%,均属于美洲型。进化树分析表明,有12个ORF5序列与高致病性PRRSV参考毒株同缘关系较近,其中包括苏北某猪场10份及浦东某猪场2份。结果显示,两猪场均存在PRRSV感染情况,且高致病性PRRSV与经典PRRSV并存,病毒ORF5中和表位都有变异发生,PRRSV的分布没有呈现明显的地域性差异。本试验为进一步研究华东地区猪场PRRSV感染情况及分子流行病学特征积累了有益资料。     

广西部分种猪场公猪精液中猪瘟和PRRS带毒情况的调查

应用RT-PCR技术,对广西部分种猪场的公猪精液328份进行猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)带毒情况的调查。结果,328份猪瘟病料中检出CSFV阳性样品55份,阳性率16.76%,PRRSV阳性样品38份,阳性率11.59%;其中有14份样品同时检出CSFV和PRRSV,混合感染阳性率达4.27%。结果表明,我区公猪精液CSFV和PRRSV带毒情况比较严重,提示近年来CSFV和PRRSV的发生与日趋复杂化可能与公猪精液带毒传播有关,为今后猪场对CSFV和PRRSV的控制与净化工作提供了科学依据。