疱疹病毒ICP22蛋白研究进展

疱疹病毒(herpesvirus)是一类有囊膜结构的双链DNA病毒,典型结构由双链DNA基因组、衣壳(capsid)、皮层(tegument)和囊膜(envelope)组成。其家族庞大,迄今共发现了100多种,分为甲型(α)、乙型(β)、丙型(γ)疱疹病毒亚科。疱疹病毒宿主分布极其广泛,可感染两栖类、禽类、哺乳类、灵长类和人类,主要侵害皮肤、黏膜以及神经组织,严重影响着人类及其他动物的健康。感染细胞蛋白22(infected cell protein 22,ICP22)是US1或其同源基因编码的多功能蛋白,可与细胞和/或病毒成分相互作用而广泛发挥作用,如参与病毒潜伏感染期的建立、与RNA聚合酶Ⅱ(RNA polymeraseⅡ, RNA PolⅡ)相互作用影响病毒和宿主基因转录、影响病毒诱导分子伴侣富集域(virus-induced chaperone-enriched, VICE)区域的形成以及子代病毒粒子的核出芽、涉及细胞凋亡、自噬与抗病毒反应等。本文就疱疹病毒US1及同源基因编码蛋白ICP22的研究进展作一综述,以期为深入开展ICP22与病毒和宿主蛋白相互作用参与病毒复制和致病过程中的机制研究提供参考,对动物疱疹病毒、特别是以ICP22作为靶标的新药研究具有一定的参考价值。     

疱疹病毒UL31基因及其编码蛋白研究进展

疱疹病毒是一类有囊膜的双链DNA病毒,基因组由长节段(L)和短节段(S)组成.UL31基因是基因组独特UL序列中的一个核心基因,具有典型的开放阅读框架,编码一种磷酸化蛋白.该蛋白与UL34蛋白相互作用,定位于细胞核边缘,与病毒核衣壳初期包膜形成有关,对病毒DNA的合成、包装和释放也有一定的作用.本文就UL31基因及编码蛋白的结构特点和基本功能等研究进展进行总结,以期为疱疹病毒UL31基因的深入研究提供指导.     

核酸疫苗的应用现状和发展前景

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因（DNA）与质粒重组后直接导入动物细胞内，并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。因此，核酸疫苗也称基因疫苗。它包括DNA疫苗和RNA疫苗，其中DNA疫苗由于不需任何化学载体，故又称裸DNA疫苗。同单链RNA相比，双链DNA具结构稳定、操作简单等许多优点，所以DNA疫苗比RNA疫苗更受学者们的青睐。１核酸疫苗在疾病防治方面的应用自１９９０年，Wolff发现DNA能直接诱导机体产生免疫应答以来，通过国内外学者的不断努力，…     

鸡传染性法氏囊病病毒VP3基因的克隆与原核表达

IBDV是一种无囊膜的双节段双股RNA病毒，属于双RNA病毒科（Birnaviridae），禽双链RNA病毒属（Avibirnavirus），IBDV基因组由A、B两个双链RNA节段组成，A节段编码VP2、VP3、VP4、VP5蛋白，B节段编码VPI蛋白。     

重组杆状病毒表达传染性囊病病毒结构蛋白对鸡有保护作用

传染性囊病病毒（IBDV）GS每株通过感染无特定病原体（SPF）鸡而分离获得。提取病毒RNA并进行琼脂精电泳，从凝胶中回收RNA大片段，做反转录获得cDNA。经过质粒构建和PCR扩增等，把编码IBDV结构蛋白的基因插入杆状病毒转移载体pBueBacl中，得昨LSBal。将后者与首着丫纹在纸核型多角体病毒（AcNP）DNA一起共转染草地夜纸（即响…删b呼p血）吐q细胞。并通过蚀斑纯化”得到合IBDV结构蛋白《VP2．VPg和VP4）全编码区的重组杆状病毒VIBD－7。。书将上述重组杆状病毒感染sfq细胞。可获得DDV前体蛋白。重组蛋白的抗原用免疫…     

ST细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

为了筛选与猪细小病毒（porcine parvovirus,PPV）结构蛋白VP2相互作用的宿主蛋白,深入研究病毒入侵及致病的分子机制,本试验建立了ST细胞酵母双杂交cDNA文库。采用RNeasy Min Kit提取ST细胞的总RNA,反转录合成cDNA第一链之后,通过SMART技术合成了双链cDNA,并利用同源重组的方法,构建了ST细胞的酵母cDNA文库。结果显示,文库滴度为8.1×10⁸ CFU/mL,插入的双链cDNA片段大小为250~1 000 bp,平均大小约为500 bp,文库的重组率为96%。此文库可用于筛选与病毒相互作用的ST细胞宿主蛋白,为进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础。     

伪狂犬病病毒US3基因编码丝/苏氨酸蛋白激酶功能的研究进展

伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)属于甲型疱疹病毒亚科水痘病毒属,其基因组约为150 kb,可分为独特长区、内部重复序列、独特短区以及末端重复序列。PRV US3基因位于其基因组的独特短区,属于复制非必须基因,是病毒的重要毒力基因,编码产物是丝/苏氨酸激酶。US3基因编码蛋白是一种多功能蛋白,可参与PRV逃避宿主免疫清除,抑制病毒介导的细胞凋亡,影响病毒粒子在细胞核质中的运输,调动感染细胞肌动蛋白骨架重排,诱导宿主细胞形态改变进而增强PRV在细胞中的传播能力,在病毒生命周期的多个阶段发挥作用。本文综述了PRV US3编码蛋白功能的研究进展,为PRV致病机制的研究提供了参考。     

DNA疫苗的特点及在不同动物中的应用

1特点 DNA疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗，是编码免疫原或与免疫原相关的真核表达质粒DNA（或RNA）。可经一定途径进入动物体内，被宿主细胞摄取后转录和翻译，表达出抗原蛋白，此抗原蛋白能刺激机体产生非特异性和特异性免疫应答反应，从而起到免疫保护作用。     

疱疹病毒致病机制的研究进展

<正>疱疹病毒属于疱疹病毒科疱疹病毒属成员,是一类较大的双链DNA病毒,其感染宿主广泛,主要侵害皮肤、黏膜以及神经组织,严重影响着人及其他动物的健康。根据疱疹病毒的基因结构、同源性以及相关特点,可将其分为α、β、γ等3个亚科。α-疱疹病毒亚科包括人疱疹病毒1型(herps simplex virus 1,HSV-1)、水痘-带状疱疹病毒 (varicellazoster virus,VZV)、马立克病毒 (Marek's disease vi     

猪外周血单个核细胞cDNA酵母表达文库的构建及与猪瘟病毒E2蛋白相互作用细胞蛋白的筛选

为研究猪瘟病-毒(CSFV)蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用,本研究通过SMART技术合成猪外周血单个核细胞(PBMC)双链cDNA,以携带与载体pGADT7-Rec重组位点同源序列的特异引物经long-distance PCR扩增双链cDNA.纯化双链cDNA并与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌株Y187,经同源重组构建PBMC cDNA酵母表达文库.以CSFV E2蛋白为诱饵进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证.结果显示筛选到17个与CSFV E2蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,基因注释(GO)分析表明这些蛋白分别参与免疫、代谢、细胞生长与增殖、生物调节等过程,为研究它们与CSFV E2的相互作用奠定了基础.     

Identification and characterization of Marek's disease virus serotype 1 (MDV1) ICP22 gene product: MDV1 ICP22 transactivates the MDV1 ICP27 promoter synergistically with MDV1 ICP4

A previous report [Virus Genes 6 (1992) 365-378] has shown that the US1 gene of Marek's disease virus serotype 1 (MDV1) encodes a homologue of herpes simplex virus type 1 infected cell protein No. 22 (ICP22). In the present study, we expressed and identified a product of the MDV1 US1 gene in chicken embryo fibroblasts (CEFs) with the aid of a recombinant baculovirus expressing a Flag epitope-tagged MDV1 US1 gene, under control of the SRalpha promoter (composed of the enhancer region of the simian virus 40 early promoter and the R region of the human T-cell leukaemia virus type 1 long terminal repeat). In CEF infected with the recombinant baculovirus, MDV1 ICP22 was specifically and efficiently expressed in the presence of n-butyric acid. The apparent M(r) of the expressed protein was 30,000. Reporter gene assays revealed that MDV1 ICP22 by itself transactivated an MDV1 ICP27 promoter/reporter construct weakly but specifically, and furthermore, worked synergistically with MDV1 ICP4 to efficiently up-regulate the MDV1 ICP27 promoter. MDV1 ICP22 may be a regulatory protein that stimulates viral promoters in co-operation with other viral regulatory proteins such as MDV1 ICP4.     

猪流行性腹泻病毒反向遗传学及其研究进展

猪流行性腹泻病毒（PEDV）是高度接触性肠道传染病猪流行性腹泻（PED）的病原,是有囊膜的单股正链RNA病毒,基因组全长约28 kb。2010年以来,PEDV G2型高致病性毒株不断发生变异,给全国乃至全球的养猪业造成巨大的经济损失。反向遗传学系统,即构建RNA病毒的全长感染性克隆。近年来,PEDV主要基于靶向RNA重组、BAC系统和体外连接3种方法来建立全长感染性cDNA克隆。文章简述了反向遗传学的原理和方法。靶向RNA重组利用冠状病毒RNA的高同源重组的特点来实现病毒的拯救;BAC系统利用pBeloBAC11载体克服PEDV基因组中含有的毒性序列所导致的cDNA在高拷贝质粒中不稳定的困难;体外连接技术主要利用PEDV基因组本身存在的限制性内切酶的酶切位点或通过改造的酶切位点在体外将病毒分片段地连接成全长的cDNA克隆。另外,文章还总结了近年来基于反向遗传学技术的PEDV相关的研究进展。PEDV反向遗传学是研究PEDV病毒基因组结构功能及设计减毒活疫苗的有效工具,利用反向遗传学技术探究S基因等毒力相关基因,探究其突变或缺失对病毒致病机制的影响,揭示PEDV毒力衰减的分子机制,有望设计出具有良好免疫原性且避免毒株返毒和重组减毒活疫苗。总之,PEDV反向遗传学是研究PEDV基因组结构及功能、病毒宿主相互作用及致病机制的一种重要方法,同时也是设计PEDV减毒活疫苗一种合理有效的途径。     

流感病毒的核蛋白是一种多功能RNA结合蛋白

流感病毒核蛋白 (NP)的主要功能是使病毒基因组衣壳化 ,以便 RNA转录、复制和病毒子装配。本综述的目的是说明 NP不仅是一种RNA结合的结构蛋白 ,而且作为病毒与宿主细胞之间的一种关键的配体分子而起作用 ,通过病毒和细胞的大分子之间相互作用来发挥其功能 ,包括 RNA、NP、病毒 RNA依赖的 RNA聚合酶和病毒基质蛋白。 NP也与细胞多肽相互作用 ,细胞多肽包括肌动蛋白、细胞核输入和输出装置所需的成分和细胞核 RNA解旋酶     

Recombinant DNA probe for serotype-specific identification of bluetongue virus 17

The double-stranded RNA genome from 117 field isolates of bluetongue virus (BTV) serotypes 10, 11, 13, and 17 was blotted onto nitrocellulose paper and hybridized with a radioactively labeled cloned copy of DNA genome segment 2 of BTV-17. Viral RNA from BTV prototype strains 2, 10, 11, 13, and 17 were used as controls. The probe hybridized only with the viral RNA from prototype BTV-17 virus and field isolates of BTV-17. There was no cross hybridization with field isolates of BTV serotypes 10, 11, and 13. A complementary DNA probe developed from genes coding for BTV serotype specificity was effectively used in a slot-blot hybridization system for efficiently characterizing the viral serotype.     

马立克病病毒编码的miR-M4-5p调控宿主靶基因的筛选及鉴定

血清1型马立克病病毒（MDV-1）感染引起的鸡马立克病（MD）一直以来被认为是研究病毒诱导肿瘤发生机制的理想模型。此前研究发现，MDV-1编码的miR-M4-5p是宿主癌基因miR-155的病毒同源物，从基因组中敲除miR-M4-5p可显著降低MDV-1的致病性和致瘤性，表明miR-M4-5p可能是MDV-1诱导肿瘤发生的重要调控因子。为进一步揭示miR-M4-5p的调控机制，以CEF细胞总RNA反转录产物cDNA为模板，利用hybrid-PCR技术构建了miR-M4-5p的候选靶基因文库。通过基因克隆、PCR鉴定及序列比对分析，获得128个候选基因序列，有73个基因的3'-UTR存在miR-M4-5p的潜在结合靶点，其中23个3'-UTR结合靶点与miR-M4-5p完全互补配对。通过双荧光素酶报告试验和qRT-PCR分析，对miR-M4-5p与3'-UTR的体内外相互作用以及候选靶基因的表达水平进行分析和验证，最终鉴定DPT、TMEM230和DCLK1为miR-M4-5p调控的宿主靶基因。本研究为后续进一步阐明miR-M4-5p在MD肿瘤发生中的调控机制奠定了重要基础。     

宿主蛋白ANP32A对流感病毒功能影响的研究进展

流感病毒是一类危害人和动物健康的RNA病毒,其在宿主细胞内的有效复制离不开宿主蛋白酸性核磷蛋白32家族成员A （ANP32A）和病毒RNA聚合酶的协助和支持。病毒RNA聚合酶由3种蛋白PB1、PB2和PA组成,且ANP32A与病毒RNA聚合酶的最强相互作用需要这3种蛋白的共同参与。ANP32A是酸性富含亮氨酸的核磷蛋白32（ANP32）家族成员,其被确认为支持细胞核中病毒RNA聚合酶活性的关键宿主因子,对流感病毒的复制具有重要的作用。ANP32A的物种特异性差异决定了病毒RNA聚合酶的宿主范围：独特的33个氨基酸序列存在于禽类ANP32A （avANP32A）,而在哺乳动物ANP32A中缺乏此氨基酸序列。avANP32A中特有的33个氨基酸序列能增强ANP32A的功能,从而增加禽源特征流感病毒聚合酶活性。禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）不能有效利用较短的ANP32A （即缺乏独特33个氨基酸序列的ANP32A）,因而哺乳动物ANP32A无法支持禽源特征聚合酶活性,然而在人ANP32A （huANP32A）中插入这33个氨基酸能促进其对AIV聚合酶的支持作用。此外,流感病毒的适应性突变也能增强AIV在哺乳动物中的传播力和致病性。AIV适应哺乳动物时往往会发生E627K突变,以增强其在哺乳动物中的复制能力。作者主要介绍了宿主蛋白ANP32A对流感病毒复制、转录的影响和流感病毒发生适应性突变的作用机制,简要论述了ANP32A与聚合酶的相互作用对流感病毒跨物种感染的分子机制。     

The glycoproteins of the human herpesviruses.

The herpesvirus family contains several important human pathogens. Human herpesviruses include herpes simplex virus type 1 and 2, varicella-zoster virus, human cytomegalovirus, Epstein-Barr virus and human T-cell lymphotropic virus. The general property of herpesviruses is their ability to establish latency and to be periodically reactivated. All human herpesviruses contain a subset of genes encoding viral glycoproteins that are clearly homologous, and their similarity is significantly greater among members of the same subfamily. Membrane glycoproteins specified by human herpesviruses are important determinants of viral pathogenicity. They are exposed on the viral envelope and on the surface of infected cells. They mediate entry of the virus into cells and cell-to-cell spread of infection and also influence tissue tropism and host range. Viral membrane glycoproteins are also the most important elicitors of protective immune response and are therefore the best candidates for subunit vaccines.     

布鲁氏菌分泌蛋白BPE005的亚细胞定位及与宿主细胞互作蛋白的筛选

【目的】 分析布鲁氏菌分泌蛋白BPE005的蛋白结构及细胞定位,筛选宿主细胞内与其存在相互作用的靶蛋白,为后续研究BPE005的生物学功能奠定基础。【方法】 通过生物信息学软件对BPE0005的蛋白结构进行初步分析;构建PDRRED2-C1-BPE005重组荧光定位载体,转染人胚肾上皮细胞293T,通过扫描激光共聚焦显微镜观察BPE005的细胞定位;构建PGBKT7-BPE005诱饵载体,验证诱饵载体是否有细胞毒性和自激活现象;以小鼠巨噬细胞RAW264.7 mRNA的cDNA文库为AD文库菌液,检测文库滴度,通过酵母双杂交系统筛选宿主细胞内与BPE005相互作用的靶蛋白。【结果】 布鲁氏菌分泌蛋白BPE005属于疏水性蛋白,内含有大量的无规则卷曲、α-螺旋和延伸链。成功构建PDRRED2-C1-BPE005荧光定位载体和PGBKT7-BPE005诱饵蛋白载体,BPE005定位于宿主细胞核。PGBKT7-BPE005诱饵蛋白载体无酵母细胞毒性和自激活现象,AD文库菌液滴度>2×10⁷/mL,筛选出4个宿主细胞内与BPE0005存在相互作用的蛋白:RNA聚合酶Ⅱ多肽G、补体因子H、鸟苷酸环化酶2G及颗粒蛋白。经复筛、测序、BLAST比对、一对一验证后,最终筛选出1个在宿主细胞内与BPE005具有较强相互作用的靶蛋白(RNA聚合酶Ⅱ多肽G)。对该蛋白的作用网络分析表明,RNA聚合酶Ⅱ多肽G对宿主细胞内mRNA的转录和合成具有重大影响。【结论】 布鲁氏菌分泌蛋白BPE005定位于宿主细胞核,在宿主细胞内可与RNA聚合酶Ⅱ多肽G产生较强相互作用,对进一步阐明布鲁氏菌感染过程中关键效应分子的作用机制具有指导意义。     

microRNA与病毒关系研究进展

microRNA是一类广泛存在于真核生物细胞内的含20~22个核苷酸的非编码小RNA,它通过与目的mRNA 3'端非编码区的完全或不完全互补使得靶基因降解或翻译受阻。microRNA参与了众多基因的表达,涉及细胞的分化、发育、凋亡,病毒感染,免疫,机体代谢,肿瘤的发生等众多生命过程。microRNA和病毒的关系错综复杂,宿主细胞编码的microRNA可以对自身或病毒基因产生调控从而影响病毒感染,病毒编码的microRNA也可以对自身或宿主基因产生调控从而影响病毒感染,病毒也可以反过来影响宿主microRNA产生和作用。理清这两者之间的关系有助于科研人员发掘新的思路,更好地开展相关科研工作,为科学研究提供理论上的支持。因此,作者综述了microRNA的发现和命名、生成、作用机制,以及当前对于microRNA和病毒相互关系的新观点。