金银花内生真菌对鲤鱼肠道菌群的影响研究

通过将金银花内生真菌发酵液饲喂注射嗜水气单胞菌的鲤鱼,研究金银花内生真菌对鲤鱼肠道菌群的影响.通过分离培养健康空白组、攻毒组和内生真菌组的鲤鱼后肠细菌、革兰染色和显微镜观察,表明:对鲤鱼注射嗜水气单胞菌后,其后肠优势菌群发生了改变.空白组的优势菌为G+短杆菌(JYK-1)和G+球菌(JYK-2);攻毒组的优势菌为Gˉ长杆菌(JYG-1和JYG-2).对注射嗜水气单胞菌的鲤鱼饲喂含金银花内生真菌发酵液的饲料后,其优势菌为G+短杆菌(JYN-1)和G+球菌(JYN-2),并且JYN-1和JYK-1的形态和染色特征相同,JYK-2和JYN-2的形态和染色特征相同.研究表明:给攻毒后的鲤鱼饲喂金银花内生真菌可以调节其肠道菌群,使致病菌降低,有益菌增加.说明饲喂金银花内生真菌后肠道优势菌JYN-1和JYN-2可以作为潜在的益生菌进行下一步的研究.     

长时间连续投喂β-葡聚糖对鲤生长性能及非特异性免疫功能的影响

本研究旨在探讨长时间连续投喂β-葡聚糖对鲤生长性能及非特异性免疫功能的影响及嗜水气单胞菌攻毒后的抵抗能力.试验采用初始体重为(61.53±0.34)g的健康鲤(Cyprinus carpio)为研究对象,在饲料中分别添加0、0.15%和0.50%的β-葡聚塘,饲养60 d.结果显示:投喂β-葡聚糖对鲤增重率和饲料系数均没有显著影响(P>0.05);肝胰脏中溶菌酶和酸性磷酸酶活力显著降低于对照组(P<0.05),髓过氧化物酶活力各组之间没有显著差异(P>0.05);攻毒试验结果显示:注射嗜水气单胞菌148 h后试验组鲤存活率明显低于对照组.由此可知,长期投喂β-葡聚糖不影响鲤生长性能,但会降低其非特异性免疫功能及对嗜水气单胞菌攻毒的免疫保护力.     

杜仲叶提取物对鲫鱼出血性病原菌抑菌试验的研究

试验测定了杜仲叶主要提取物绿原酸对水产养殖中常见病原菌的最小抑菌浓度及其对嗜水气单胞菌体内和体外抑菌效果。结果显示,绿原酸对水产养殖中的常见病原菌嗜水气单胞菌最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)均为250mg/l,哈维氏弧菌、苏伯利产气单胞菌的MIC与MBC均为500mg/l,肠型点状产气单胞菌的MIC与MBC分别为500、1000mg/l。药敏试验结果发现,绿原酸对嗜水气单胞菌抑菌圈的直径为(19.4±1.2)mm,氟哌酸的抑菌圈直径为(30.3±1.3)mm,土霉素为(28.5±2.5)mm。攻毒试验结果显示,在攻毒7d后,对照组死亡率为45%,饲料中添加0.5%绿原酸的试验组死亡率为10%,添加4%的试验组的死亡率为20%,添加1%和2%的试验组没有鱼死亡,表明饲料中添加1%的绿原酸能有效增强鱼体对嗜水气单胞菌的抵抗能力。试验结果说明,绿原酸对水产养殖中常见的病原菌具有良好的抑菌效果,对嗜水气单胞菌的抑菌效果与抗生素类抗菌药物相当,能够增强机体免疫力,对细菌性疾病具有较强的预防作用。     

茶多酚对草鱼免疫力及抗病力的影响

试验旨在探究饲料中添加茶多酚对草鱼免疫性能和抗病力的影响。5组草鱼分别饲喂基础饲料中添加0(对照组)、200、400、600、800 mg/kg茶多酚的试验饲料,连续投喂8周后对草鱼的血清免疫指标进行测定。试验首先测定茶多酚对嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌和荧光假单胞菌鱼类常见病原菌的抑制作用。结果显示,嗜水气单胞菌和荧光假单胞菌的抑菌敏感性显著高于杀鲑气单胞菌(P0.05),筛选嗜水气单胞菌为攻毒试验所用菌种。饲养结束后,用嗜水气单胞菌对各组草鱼进行攻毒试验,对疾病感染情况下草鱼的存活率进行测定。结果显示:与对照组相比,饲料中添加400、600、800 mg/kg茶多酚,能显著提高SOD、CAT、AKP、LYZ的活性(P0.05),饲料中添加400、600、800 mg/kg茶多酚,能显著降低血清中MDA活性(P0.05);添加400、600、800 mg/kg茶多酚添加组的存活率较对照组差异显著(P0.05)。结果表明,饲料中添加茶多酚能促进强化草鱼天然免疫反应和抗病力,饲料中茶多酚的添加量以400 mg/kg为宜。     

枯草芽孢杆菌对罗非鱼生长及抗病力的影响

以初始体质量为(4.9±0.33)g的罗非鱼鱼苗为试验对象,研究饲料中添加不同水平的枯草芽孢杆菌对罗非鱼生长、饲料系数和部分免疫指标的影响。试验设对照组和3个处理组,每组5个重复。对照组投喂基础饲料,3个处理组分别投喂枯草芽孢杆菌含量为10万、100万和1 000万CFU/g的饲料,投喂持续8周,观察生长效果。生长试验结束后,注射嗜水气单胞菌进行攻毒试验,观察鱼死亡情况,计算成活率。结果表明:枯草芽孢杆菌对罗非鱼生长起到了一定的促进作用,同时可提高鱼体的抗病力,该试验环境下最佳添加水平为100万CFU/g。     

抗嗜水气单胞菌大黄内生真菌的分离鉴定和初步应用

为从大黄根部分离出对嗜水气单胞菌具有抗性的内生真菌,用75%乙醇和0.1%升汞组合对大黄根部进行表面消毒后,分离并纯化获得大黄内生真菌。以嗜水气单胞菌为指示菌做抑菌试验,筛选出抗嗜水气单胞菌的大黄内生真菌。试验结果:从大黄根部组织共获得28株大黄内生真菌,筛选出4株对嗜水气单胞菌有抑制效果的大黄内生真菌,经形态学初步鉴定3株属于链格孢霉属,1株属于半知菌属,体内攻毒试验证实:9号内生真菌发酵液能提高试验鱼的成活率,通过提高酸性磷酸酶水平达到保护试验鱼抵抗嗜水气单胞菌攻击的作用。     

五倍子对鳗鲡4株常见病原菌的体外抗菌后效应

采用试管液体二倍稀释法测定中药五倍子对鳗鲡养殖中常见主要致病菌(肠杆菌B01、迟缓爱德华氏菌B09、豚鼠气单胞菌B18和嗜水气单胞菌B27)的最小抑菌浓度(MIC).然后再采用菌落计数法分别测定五倍子在0.25、0.5、1、2、4倍于各菌MIC时对鳗鲡病原菌株B01、B09、B18、B27的体外抗菌后效应(PAE).结...     

25种中草药对3种鱼源嗜水气单胞菌的抑杀效果比较

为了研究25种中草药对鲤鱼、青鱼和草鱼源嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的体外抑菌效果,并筛选出具有较好抑菌作用的单味中草药,试验采用水提法提取中草药的有效成分,通过牛津杯打孔法和微量二倍稀释法分别测定了25种中草药对3种不同来源嗜水气单胞菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:黄柏、丁香、艾叶等9种中草药对鲤鱼源嗜水气单胞菌有抑菌作用,抑菌圈直径为10~22 mm,MIC为3. 2~12. 5 mg/mL,MBC为6. 3~25 mg/mL;赤芍、大青叶、茵陈等12种中草药对青鱼源嗜水气单胞菌有抑菌效果,抑菌圈直径为10~22 mm,MIC为3. 2~12. 5 mg/mL,MBC为6. 3~25 mg/mL;赤芍、丁香、黄柏等12种中草药对草鱼源嗜水气单胞菌有抑菌效果,抑菌圈直径为12~28 mm,MIC为3. 2~12. 5 mg/mL,MBC为6. 3~25 mg/mL。说明不同来源的嗜水气单胞菌对不同中草药的敏感性不同。     

3种抗生素对3种常见鱼类病原菌的抑菌活性研究

为研究盐酸恩诺沙星、乳酸恩诺沙星和乳酸诺氟沙星对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)的体外抑菌活性,本实验通过测定抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)和杀菌曲线,研究3种常用喹诺酮类抗生素药物对3种水产病原菌的体外药效学特性.结果表明:乳酸诺氟沙星对嗜水气单胞菌和哈维氏弧菌抑菌效果最好,MIC分别为0.244μg/mL和1.954μg/mL:盐酸恩诺沙星对鳗弧菌抑菌效果最好,MIC为0.122μg/mL;8 MIC的乳酸诺氟沙星药液在12 h内完全杀灭嗜水气单胞菌,在24 h内也能全部杀灭哈维氏弧菌,8 MIC的盐酸恩诺沙星药液在24 h内全部杀灭鳗弧菌.本研究为3种抗生素在水产养殖中的应用提供实验依据.     

鱼用功能性卵黄粉对鳗鲡的免疫保护和生长性能的影响

嗜水气单胞菌对水产动物养殖具有极大的危害。前期研究已制备抗嗜水气单胞菌外膜蛋白(MOMP)的鱼用功能性卵黄粉。本文通过ELISA和Western blot分析该功能性卵黄粉所含抗体的效价和特异性,结合对鳗鲡的免疫攻毒保护和投喂后的生长性能测定,研究其对防控鳗鲡嗜水气单胞菌疾病的影响。结果显示,鱼用功能性卵黄粉中的卵黄抗体能与3株代表菌的MOMP抗原特异结合,ELISA效价检测显示效价均达到1.10 240以上;投喂鱼用功能性卵黄粉13 d后,鳗鲡经嗜水气单胞菌攻毒的存活率较未投喂组提高30.8%。3个养殖场进行的鳗鲡生长性能测定结果显示,饲料中添加0.3%的鱼用功能性卵黄粉后,鳗鲡的增重率较对照组分别提高42.8%、13.6%和8.8%,饲料转化率分别提高4.04%、3.11%和2.55%;死亡率数据统计显示,2个养殖场差别不明显,1个养殖场死亡率下降了38.8%。上述结果说明,鱼用功能性卵黄粉可用于嗜水气单胞菌感染引起的鳗鲡疾病的预防和控制,具有进一步的研究和开发的前景。     

黄芪多糖对杂交鲌的非特异性免疫作用

在饲料中添加定量的黄芪多糖,探讨黄芪多糖对杂交鲌的免疫调节作用。用添加不同含量黄芪多糖的饲料,连续投喂杂交鲌30 d,测定试验鱼的增重、血清凝集抗体效价、溶菌酶的活性、谷丙转氨酶的活性、血清总蛋白含量和白细胞吞噬活性。进行攻毒嗜水气单胞菌活菌的复感染试验,测定相对免疫保护率。结果显示添加黄芪多糖的饲料投喂杂交鲌生长速度较对照组稍快;试验组鱼体的溶菌酶活性和白细胞吞噬活性,比对照组鱼体均有所提高;谷丙转氨酶活性的检测结果表明试验组鱼体的肝功能有所改善;对嗜水气单胞菌的抵抗能力,与空白对照组相比有所增强。说明黄芪多糖对杂交鲌免疫机能具有调节作用。     

中药单味药及复方对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用

本试验用煎煮法提取中药有效成分,采用琼脂平板扩散法探讨了黄连、五倍子、大黄、诃子等中药单味药及中药复方对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的体外抑菌作用,测定了抑菌圈大小.采用双倍试管稀释法测得了最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).试验结果表明,16种中药提取物对嗜水气单胞菌有不同程度的抑制作用,其中五倍子、黄连、诃子、大黄的水提物的抑菌效果最好,MIC值分别为7.81 mg/mL、15,63 mg/mL、31.25 mg/mL、62.50 mg/mL.五倍子作为主药,分别与诃子、黄连、大黄接一定比例组成的复方的MIC分别为3.906 mg/mL、7.813 mg/mL、15.625 mg/mL.通过对筛选的复方与市场上销售的3种成品复方的体外抑菌活性的比较,发现本实验室筛选的复方对嗜水气单胞菌的体外抑菌活性更强.     

解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其对嗜水气单胞菌抑制作用研究

本试验从鲫鱼肠道中分离到1株芽孢杆菌,经生物学特性测定及16S rRNA测序分析,鉴定该分离菌株为高产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌(命名为JX001).对该分离菌进行嗜水气单胞菌体外抑菌试验,结果发现有明显的抑菌圈和抑菌带,说明该分离菌对嗜水气单胞菌具有较强的抑制作用,在养殖水中加入分离菌JX001可防止嗜水气单胞菌的暴发;同时分离菌JX001在生长代谢过程中产生大量的蛋白酶,可有效地促进蛋白质水解,用于蛋白质饲料的降解.     

库拉索芦荟提取物对两种气单胞菌的抑菌作用

为探究库拉索芦荟提取物对嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌的抑菌作用,采用醇提法提取库拉索芦荟得到芦荟提取物,使用二倍稀释法和K-B法测定库拉索芦荟提取物对两种气单胞菌的抑菌作用,再用嗜水气单胞菌回感鲫鱼,并用库拉索芦荟提取物对患病鲫鱼进行治疗。结果显示:库拉索芦荟提取物对嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)为95 mg/mL,最小灭菌浓度(MBC)为105 mg/mL;对维氏气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)为62 mg/mL,最小灭菌浓度(MBC)为65 mg/mL。库拉索芦荟提取物对维氏气单胞菌的抑菌效力与强力霉素、红霉素、奥复星相当,抑菌环直径均为16 mm。嗜水气单胞菌攻毒试验中,对照组鲫鱼死亡率高达100%,而库拉索芦荟治疗组的鲫鱼死亡率降低至20%。库拉索芦荟提取物对嗜水气单胞菌与维氏气单胞菌有良好的抑菌效果。     

常用中草药对水产动物致病菌体外抑菌效果研究

试验旨在探讨黄柏、诃子、知母、苏木等常用中草药对水产动物致病菌的体外抑菌效果,为今后水产养殖细菌性疾病的防控提供参考。以美人鱼发光杆菌、嗜水气单胞菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌临床分离株为试验菌株,以抑菌圈直径、最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）及联合抑菌指数（FICI）作为检测指标,研究常用中草药对水产病原菌的抑菌活性。采用水提法提取中草药有效成分,并通过琼脂平板打孔法测定中草药对水产致病菌抑菌圈,微量肉汤稀释法测定中草药MIC和MBC及微量肉汤棋盘稀释法测定联合抑菌指数（FICI）。结果显示,16种中草药对水产致病菌具有不同程度的抑菌作用。药敏试验结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种水产致病菌均具有抑菌效果,抑菌圈直径在10.5~29.0 mm之间,而4种病原菌对马齿苋均表现为耐药;MIC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MIC值为7.81~250.00 mg/mL;MBC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MBC值为7.81~500.00 mg/mL;联合抑菌试验结果显示,苏木与夏枯草、女贞子及青皮联用仅对美人鱼发光杆菌起到协同抑菌作用,对嗜水气单胞菌、创伤弧菌及哈维氏弧菌均无抑菌作用,女贞子和青皮组合仅对哈维氏弧菌抑菌作用为相加作用,该组合在抑菌效果上对其他病原菌表现为无关或颉颃作用,其他药物组合在抑菌效果上对4种病原菌则表现为无关或颉颃作用;联合抑菌圈测定结果表明,中草药联合使用对4种病原菌抑菌作用不一。本试验结果表明常用中草药对水产动物致病菌具有一定程度的抑菌作用。     

常用中草药对水产动物致病菌体外抑菌效果研究

试验旨在探讨黄柏、诃子、知母、苏木等常用中草药对水产动物致病菌的体外抑菌效果,为今后水产养殖细菌性疾病的防控提供参考。以美人鱼发光杆菌、嗜水气单胞菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌临床分离株为试验菌株,以抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)及联合抑菌指数(FICI)作为检测指标,研究常用中草药对水产病原菌的抑菌活性。采用水提法提取中草药有效成分,并通过琼脂平板打孔法测定中草药对水产致病菌抑菌圈,微量肉汤稀释法测定中草药MIC和MBC及微量肉汤棋盘稀释法测定联合抑菌指数(FICI)。结果显示,16种中草药对水产致病菌具有不同程度的抑菌作用。药敏试验结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种水产致病菌均具有抑菌效果,抑菌圈直径在10.5~29.0mm之间,而4种病原菌对马齿苋均表现为耐药;MIC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MIC值为7.81~250.00mg/mL;MBC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MBC值为7.81~500.00mg/mL;联合抑菌试验结果显示,苏木与夏枯草、女贞子及青皮联用仅对美人鱼发光杆菌起到协同抑菌作用,对嗜水气单胞菌、创伤弧菌及哈维氏弧菌均无抑菌作用,女贞子和青皮组合仅对哈维氏弧菌抑菌作用为相加作用,该组合在抑菌效果上对其他病原菌表现为无关或颉颃作用,其他药物组合在抑菌效果上对4种病原菌则表现为无关或颉颃作用;联合抑菌圈测定结果表明,中草药联合使用对4种病原菌抑菌作用不一。本试验结果表明常用中草药对水产动物致病菌具有一定程度的抑菌作用。     

应用间接荧光抗体法检测鱼类嗜水气单胞菌的试验研究

作者制备了鱼类嗜水气单胞菌（AH）－77株兔抗血清,建立了应用间接荧光抗体试验（IFA）检测鱼类嗜水气单胞菌病原的方法。该法能有效地检测人工感染鳟鱼体内的嗜水气单胞菌病原体,对杀鲑气单胞菌、荧光假单胞菌、爱德华氏菌不发生交叉反应。整个过程可在2．5h内完成,是一种有前途的鱼类嗜水气单胞菌快速诊断方法。     

止痢草精油对感染嗜水气单胞菌罗非鱼免疫功能的影响

嗜水气单胞菌是淡水鱼流行性败血症的主要致病菌。在采用添加不同剂量的止痢草精油的饲料投喂3周后,对罗非鱼腹腔注射嗜水气单胞菌,在其攻毒后不同时间取血,通过NBT阳性细胞数量、白细胞数量以及血清溶菌酶活力的变化趋势来研究止痢草精油及病原菌感染对鱼类非特异性免疫功能的相互影响。结果表明,在罗非鱼感染嗜水气单胞菌后72h内,白细胞数量、NBT阳性细胞数量以及血清溶菌酶活力依感染浓度不同,呈现先增加后降低的趋势,而添加了止痢草精油试验组的这3项指标也是先出现增加的趋势,但降低幅度和速度减小,同时到后期恢复到正常水平的速度更快。说明嗜水气单胞菌与罗非鱼非特异性免疫功能之间呈现一定的时间效应,而止痢草精油对罗非鱼的非特异性免疫机能可能有协同增强功效。     

DIGFA检测牙鲆腹水病病原的初步研究

旨在建立一种快速检测迟钝爱德华氏菌的斑点免疫金渗滤诊断方法.试验选用硝酸纤维素膜作固相栽体,以胶体金标记羊抗兔IgG,确定迟钝爱德华氏茵免疫血清和金标抗体最佳工作浓度,以出现明显清晰斑点者判定为阳性.结果表明,用该方法检测时,迟钝爱德华氏茵呈阳性,温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、河流弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、腐败希瓦氏菌、产碱普罗威斯登菌、阪崎肠杆菌和大肠杆菌均呈阴性.试验表明,DIGFA方法简便、特异、快速、结果直观,便于在基层推广使用.     

5种中药和28种抗生素对养殖鳗鲡致病菌的抑制作用

采用琼脂稀释法和纸片扩散法分别测定了5种中药（五倍子、虎杖、黄芩、大黄、石榴皮）和28种抗生素对养殖病鳗中分离到的5株病原菌（创伤弧菌、嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌）的体外抑菌作用。结果表明,5种中药对5株致病菌均具有较好的抑菌效果,MIC范围为0.125-1.500 mg/mL,平均抑菌作用依次为五倍子〉虎杖〉黄芩〉大黄〉石榴皮,其中五倍子抑菌作用最强,平均MIC为0.200 mg/mL。28种抗生素药物敏感试验结果表明,5株致病菌均对利福平、链霉素、庆大霉素、哌拉西林、青霉素G、强力霉素、头孢曲松、头孢克洛、头孢噻吩、头孢唑啉10种抗生素药物敏感,对奥格门丁、阿奇霉素耐药。