蒲公英内生真菌对2种鱼类病原菌抑菌效果研究

试验旨在研究蒲公英内生菌对由嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌引起鱼类疾病的作用效果,分为2部分:体外抑菌试验和攻毒试验.试验所用的嗜水气单胞菌菌液质量浓度为890万CFU/mL,迟缓爱德华氏菌菌液质量浓度为780万CFU/mL.体外抑菌试验结果显示,蒲公英内生菌对体外培养的2种细菌均有显著抑制效果,嗜水气单胞菌的抑菌圈直径为24.50 mm,对迟缓爱德华氏菌的抑菌圈直径为30.53 mm.攻毒试验以黄河鲤鱼为试验鱼,注射量为0.2 mL/尾.攻毒试验设5个处理组,即对照组、注射嗜水气单胞菌攻毒组、嗜水气单胞菌攻毒后投喂蒲公英内生菌饲料组、迟缓爱德华氏菌攻毒组和迟缓爱德华氏菌攻毒后投喂蒲公英内生菌饲料组.攻毒试验显示,迟缓爱德华氏菌攻毒后投喂含有蒲公英内生菌饲料组累积病死率显著高于未注射致病菌的对照组,低于注射致病菌投喂普通饲料的试验组.嗜水气单胞菌攻毒组与嗜水气单胞菌攻毒后投喂蒲公英内生菌饲料组试验鱼累计病死率无显著性差异.     

蛋氨酸对幼建鲤疾病抵抗能力及免疫应答的影响

本试验旨在研究蛋氨酸对幼建鲤疾病抵抗能力及免疫应答的影响.选择体重为(12.34±0.02)g健康建鲤864尾,平均分成6组,每组144尾(每组设3个重复,每个重复48尾),分别饲喂蛋氨酸水平为0.39%、0.70%、1.00%、1.30%、1.60%和1.90%的饲料,饲养60 d后用嗜水气单胞菌攻毒17 d,考察蛋氨酸对幼建鲤免疫功能的影响.结果表明:适宜蛋氨酸水平极显著提高了攻毒前头肾体指数、后肾体指数、脾体指数、血液红、白细胞数量和攻毒后红细胞数量(P<0.01);显著提高了攻毒前白细胞吞噬率和攻毒后成活率、白细胞数量、白细胞吞噬率、血清酸性磷酸酶活力、溶菌酶含量、补体C3含量、凝集素水平和抗嗜水气单胞菌抗体效价(P<0.05).由此得出,蛋氨酸通过增强白细胞吞噬能力和提高特异性抗体效价从而提高幼建鲤的非特异性和特异性免疫力,增强疾病抵抗力.     

免疫多糖在鲫鱼鳃出血防治中的应用

在饲料中添加酵母细胞壁多糖对鲫鱼进行免疫投喂,并测定血清中超氧化物歧化酶和碱性磷酸酶的活性,最后进行攻毒实验。实验结果显示:投喂酵母细胞壁多糖饵料后鲫鱼血清AKP与SOD活力明显升高,非特异性免疫力得到改善与提高,试验组鲫鱼感染率均低于对照组的感染率。实验结果表明,酵母细胞壁多糖可以增强鲫鱼对嗜水气单胞菌的抵抗能力,提高自身免疫力,增强抗病毒能力。     

茶多酚对草鱼免疫力及抗病力的影响

试验旨在探究饲料中添加茶多酚对草鱼免疫性能和抗病力的影响。5组草鱼分别饲喂基础饲料中添加0(对照组)、200、400、600、800 mg/kg茶多酚的试验饲料,连续投喂8周后对草鱼的血清免疫指标进行测定。试验首先测定茶多酚对嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌和荧光假单胞菌鱼类常见病原菌的抑制作用。结果显示,嗜水气单胞菌和荧光假单胞菌的抑菌敏感性显著高于杀鲑气单胞菌(P0.05),筛选嗜水气单胞菌为攻毒试验所用菌种。饲养结束后,用嗜水气单胞菌对各组草鱼进行攻毒试验,对疾病感染情况下草鱼的存活率进行测定。结果显示:与对照组相比,饲料中添加400、600、800 mg/kg茶多酚,能显著提高SOD、CAT、AKP、LYZ的活性(P0.05),饲料中添加400、600、800 mg/kg茶多酚,能显著降低血清中MDA活性(P0.05);添加400、600、800 mg/kg茶多酚添加组的存活率较对照组差异显著(P0.05)。结果表明,饲料中添加茶多酚能促进强化草鱼天然免疫反应和抗病力,饲料中茶多酚的添加量以400 mg/kg为宜。     

鱼用功能性卵黄粉对鳗鲡的免疫保护和生长性能的影响

嗜水气单胞菌对水产动物养殖具有极大的危害。前期研究已制备抗嗜水气单胞菌外膜蛋白(MOMP)的鱼用功能性卵黄粉。本文通过ELISA和Western blot分析该功能性卵黄粉所含抗体的效价和特异性,结合对鳗鲡的免疫攻毒保护和投喂后的生长性能测定,研究其对防控鳗鲡嗜水气单胞菌疾病的影响。结果显示,鱼用功能性卵黄粉中的卵黄抗体能与3株代表菌的MOMP抗原特异结合,ELISA效价检测显示效价均达到1.10 240以上;投喂鱼用功能性卵黄粉13 d后,鳗鲡经嗜水气单胞菌攻毒的存活率较未投喂组提高30.8%。3个养殖场进行的鳗鲡生长性能测定结果显示,饲料中添加0.3%的鱼用功能性卵黄粉后,鳗鲡的增重率较对照组分别提高42.8%、13.6%和8.8%,饲料转化率分别提高4.04%、3.11%和2.55%;死亡率数据统计显示,2个养殖场差别不明显,1个养殖场死亡率下降了38.8%。上述结果说明,鱼用功能性卵黄粉可用于嗜水气单胞菌感染引起的鳗鲡疾病的预防和控制,具有进一步的研究和开发的前景。     

注射β-葡聚糖对黄颡鱼免疫抗氧化指标及抗感染能力的影响

本试验研究注射β-葡聚糖对瓦氏黄颡鱼血清免疫抗氧化相关指标及抗嗜水气单胞菌感染能力的影响.选取初始体重(60.0±5.0)g的健康瓦氏黄颡鱼500尾,随机分为5组,每组4个重复,每个重复25尾,分别腹腔注射生理盐水和5、10、20、40mg/(kg体重)β-葡聚糖悬液100μL/尾.注射后第6d,取样制备血清,检测免疫抗氧化相关指标.注射后第7d,每组随机选取60尾鱼,腹腔注射嗜水气单胞菌进行感染试验,计算48 h内的累计死亡率.结果显示,各组之间黄颡鱼血清白细胞介素-6含量没有显著差异(P＞0.05).注射β-葡聚糖组血清免疫球蛋白M含量均高于对照组,其中10mg/kg组显著高于对照组和其它组.注射β-葡聚糖组血清超氧化物歧化酶活力均显著高于对照组(P＜0.05),其中以10mg/kg组最高.10、20和40 mg/kg注射组血清丙二醛含量与对照组相比显著升高(P＜0.05).与对照组相比,注射β-葡聚糖可以降低黄颡鱼抗嗜水气单胞菌感染48 h时的累计死亡率,其中10mg/kg组显著降低(P＜0.05).综上所述,在本试验条件下,腹腔注射β-葡聚糖可以提高黄颡鱼血清免疫相关指标和抗氧化酶活性,增强抗嗜水气单胞菌感染能力.     

止痢草精油对感染嗜水气单胞菌罗非鱼免疫功能的影响

嗜水气单胞菌是淡水鱼流行性败血症的主要致病菌。在采用添加不同剂量的止痢草精油的饲料投喂3周后,对罗非鱼腹腔注射嗜水气单胞菌,在其攻毒后不同时间取血,通过NBT阳性细胞数量、白细胞数量以及血清溶菌酶活力的变化趋势来研究止痢草精油及病原菌感染对鱼类非特异性免疫功能的相互影响。结果表明,在罗非鱼感染嗜水气单胞菌后72h内,白细胞数量、NBT阳性细胞数量以及血清溶菌酶活力依感染浓度不同,呈现先增加后降低的趋势,而添加了止痢草精油试验组的这3项指标也是先出现增加的趋势,但降低幅度和速度减小,同时到后期恢复到正常水平的速度更快。说明嗜水气单胞菌与罗非鱼非特异性免疫功能之间呈现一定的时间效应,而止痢草精油对罗非鱼的非特异性免疫机能可能有协同增强功效。     

β-葡聚糖对异有银鲫生长性能和非特异性免疫的影响

本试验采用初始体重15 g左右的异育银鲫(Carassius auratus gibelio) 为饲养对象,在饲料中分别添加0、70、210、420 mg/kg的β-葡聚糖,饲养65 d.研究β-葡聚糖对异育银鲫生长和血清、头肾、肝胰脏中溶菌酶、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及经嗜水气单胞茼感染后免疫保护率的影响.结果表明:β-葡聚糖对异育银鲫的生长无显著影响,但可以提高鱼体的溶菌酶、SOD活性和免疫保护率;当饲料中添加210 mg/kg的β-葡聚糖时,可以显著提高异育银鲫的非特异性免疫.     

复方乌梅对鲤鱼非特异性免疫的影响

采用复方乌梅按1.0%饲料配比分阶段地投喂鲤鱼进行为期16 d的药效试验,于试验第9 d用温和气单胞菌进行攻毒,分别测定攻毒后的鲤鱼死亡率和非特异性免疫指标。结果显示:3个试验组鲤鱼死亡率显著低于对照组(P<0.05),其中全程给药组死亡率最低;红细胞数、NBT阳性细胞数、淋巴细胞吞噬活性均表现为试验组显著高于对照组(P<0.05),其中全程给药组与对照组比较差异极显著(P<0.01);免疫器官指数和血红蛋白含量试验组与对照组相比差异不显著(P>0.05)。由此表明复方乌梅能明显增强鲤鱼的非特异性免疫和对温和气单胞菌的抗感染能力,并且全程给药组的免疫效果最佳。     

复方中药添加剂对罗氏沼虾免疫功能的增强作用

将黄芪、党参、大黄、板蓝根等十余味中草药粉碎过筛后制成复方添加剂按1%、2%、3%的比例添加于基础饲料中制成颗粒药饵投喂罗氏沼虾,对该添加剂对罗氏沼虾免疫功能的影响进行了研究。结果表明,罗氏沼虾血细胞吞噬百分比和吞噬指数、血清溶菌酶活力及酚氧化酶活力均显著提高。经嗜水气单胞菌攻毒后,各试验组的免疫保护率也明显提高。在各试验组中以2%组效果最好。试验证明,该添加剂可显著地提高罗氏沼虾的免疫功能,有效地预防嗜水气单胞菌的感染。     

饲料中添加β-葡聚糖对黄颡鱼血清免疫、抗氧化指标及肾细胞因子的影响

试验旨在研究饲料中添加β-葡聚糖对黄颡鱼幼鱼血清免疫、抗氧化指标及肾细胞因子的影响。在基础饲料中分别添加200、600和1 000 mg/kgβ-葡聚糖配制3种试验饲料。选取720尾初始体质量为(1.53±0.04)g的健康黄颡鱼幼鱼,随机分为7组,包括1个投喂基础饲料的对照组(G0)、3个连续投喂β-葡聚糖饲料的连续组(SG200、SG600和SG1000)及3个交替投喂β-葡聚糖饲料和基础饲料各7 d的间隔组(IG200、IG600和IG1000)。养殖42 d后测定血清免疫、抗氧化相关指标及肾白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α浓度。结果显示,与G0相比,各添加组溶菌酶活力均有所降低但差异不显著(P0.05),IG200酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活力分别显著降低(P0.05)和显著升高(P0.05)。G0抗超氧阴离子活力显著高于IG600(P0.05),与其他组间无显著差异(P0.05)。各组间一氧化氮合酶活力、超氧化物歧化酶活力、总抗氧化能力和丙二醛含量均无显著差异(P0.05)。除IG1000外,各添加组肾白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α与G0相比没有显著差异(P0.05)。结果表明,试验条件下,饲料中添加一定水平的β-葡聚糖,不论采用连续或间隔投喂方式,均对黄颡鱼幼鱼血清免疫、抗氧化指标没有明显影响,但间隔投喂1 000 mg/kgβ-葡聚糖能显著升高肾细胞因子水平(P0.05)。     

β-葡聚糖酶对草鱼生长性能和饲料消化率的影响

试验研究了饲料中添加β-葡聚糖酶(500IU/kg)对草鱼(初始体质量约41g)生长性能、饲料消化率和体成分的影响,试验共设2组,每组设3个重复水箱,每箱随机放鱼20尾,每天投喂4次,试验期共饲养56d。结果表明,饲料中添加β-葡聚糖酶,草鱼平均增重率提高16.51%(P<0.05);平均饵料系数降低6.59%(P>0.05);干物质消化率提高7.27%(P<0.05);粗蛋白消化率提高7.32%(P<0.05);粗脂肪消化率提高3.45%(P>0.05);粗纤维消化率提高13.60%(P<0.05);体成分没有显著变化。     

黄芪多糖对杂交鲌的非特异性免疫作用

在饲料中添加定量的黄芪多糖,探讨黄芪多糖对杂交鲌的免疫调节作用。用添加不同含量黄芪多糖的饲料,连续投喂杂交鲌30 d,测定试验鱼的增重、血清凝集抗体效价、溶菌酶的活性、谷丙转氨酶的活性、血清总蛋白含量和白细胞吞噬活性。进行攻毒嗜水气单胞菌活菌的复感染试验,测定相对免疫保护率。结果显示添加黄芪多糖的饲料投喂杂交鲌生长速度较对照组稍快;试验组鱼体的溶菌酶活性和白细胞吞噬活性,比对照组鱼体均有所提高;谷丙转氨酶活性的检测结果表明试验组鱼体的肝功能有所改善;对嗜水气单胞菌的抵抗能力,与空白对照组相比有所增强。说明黄芪多糖对杂交鲌免疫机能具有调节作用。     

饲料中长期添加β-1,3-葡聚糖对凡纳滨对虾生长性能、体成分和生化指标的影响

本研究旨在研究β-1,3-葡聚糖对凡纳滨对虾生长性能、体成分和生化指标的影响.选用640尾初体重为(0.43±0.01)g的凡纳滨对虾幼虾,随机分为4组,每组4个重复,每个重复40尾.Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲料,Ⅱ、Ⅲ,Ⅳ组为试验组,分别饲喂在基础饲料中添加250、500、1 000 mg/kg β-1,3-葡聚糖的饲料,试验期为12周.结果显示,随着β-1,3-葡聚糖添加量的增加,凡纳滨对虾末重、增重率、特定生长率均呈现出先上升后下降的趋势,并均在Ⅱ组达到最高.与对照组相比,Ⅲ组的肝胰腺蛋白酶和脂肪酶活性显著升高(P<0.05);Ⅱ、Ⅲ组的肝胰腺淀粉酶活性显著升高(P<0.05);Ⅱ组的血清总蛋白、胆同醇、甘油三酯和肝胰腺糖原含量显著升高(P<0.05).肝胰腺谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性以及血清葡萄糖、肌肉糖原、胆固醇、甘油三酯含量各组间无显著差异(P>0.05).与对照组相比,Ⅳ组的血清过氧化氧酶和溶菌酶活性显著升高(P<0.05);Ⅲ组血清碱性磷酸酶活性显著升高(P<0.05).血清超氧化物歧化酶和酸性磷酸酶活性在各组间无显著差异(P>0.05).添加β-1,3-葡聚糖对凡纳滨对虾全虾水分、粗蛋白质、粗脂肪和灰分含量没有显著影响(P>0.05).由此得出:1)在饲料中长期添加250 mg/kg β-1,3-葡聚糖能够提高凡纳滨对虾的生长性能,促进营养物质代谢;2)在饲料中长期添加500或1 000 mg/kg β-1,3-葡聚糖能够增强几纳滨对虾的非特异性免疫功能.     

饲料中维生素D_3添加水平对黄鳝生长性能及免疫功能的影响

本试验旨在研究饲料中维生素D3添加水平对黄鳝生长性能及免疫功能的影响。挑选体质健康、平均体重为(21.7±2.1)g的黄鳝540尾,随机分为6组(每组3个重复,每个重复各30尾),分别饲喂在基础饲料中添加0(对照组)、250、500、1 000、2 000和4 000 IU/kg维生素D3的试验饲料,试验期90 d。饲养试验结束后,从每组随机取6尾黄鳝,测定生长性能后尾静脉取血检测外周血相关免疫指标;另从每组随机取20尾黄鳝,注射嗜水气单胞菌菌液进行攻毒试验,观察嗜水气单胞菌攻毒后的累积死亡率。结果表明:与对照组相比,除4 000 IU/kg组外,其余各组增重率和蛋白质效率显著提高(P0.05),饲料系数显著降低(P0.05);500和1 000 IU/kg组血清免疫球蛋白M、补体3、补体4水平,溶菌酶活性,T细胞CD3、CD4、CD8分子数量和CD4/CD8显著升高(P0.05),全血白细胞、中性粒细胞、中值细胞和淋巴细胞数量显著升高(P0.05),且嗜水气单胞菌攻毒后的累积死亡率明显降低。4 000 IU/kg组除血清免疫球蛋白M水平外,其他指标与对照组均无显著差异(P0.05)。由此得出,饲料中添加适宜水平(500和1 000 IU/kg)的维生素D3能增强黄鳝的免疫功能,提高其对病菌的抵御能力;饲料中维生素D3水平过高或缺乏均会导致黄鳝免疫功能低下。     

嗜水气单胞菌微胶囊疫苗对中华绒螯蟹免疫机能的影响

以0(对照组)、1、3、6g/kg的剂量将嗜水气单胞菌海藻酸钠微胶囊冻干疫苗(菌含量为1.5×1012cfu/g)添加于基础饲料中投喂中华绒螯蟹7d,然后投喂对照组饲料。在停喂含疫苗的饲料后第0、1、2、3周,采样测定中华绒螯蟹血细胞呼吸爆发活性、血清超氧化物歧化酶(SOD)、酚氧化酶(PO)和溶菌酶(LSZ)活性,并在停喂含疫苗的饲料后第1周,以每千克体重1.2×107cfu的剂量,体腔注射致病性嗜水气单胞菌CL99920菌株,记录接种7d后中华绒螯蟹的累计死亡率。结果显示:在停喂含疫苗的饲料后第0周和第3周,6g/kg组的血细胞呼吸爆发活性显著增加(P<0.05);在一些采样时段,3个试验组的血清SOD、PO及LSZ活性分别显著上升(P<0.05)。各试验组的蟹对嗜水气单胞菌的抵抗力明显增强。由此说明,投喂试验剂量的嗜水气单胞菌微胶囊疫苗能增强中华绒螯蟹的免疫机能。综合本试验结果并考虑添加成本,建议在生产中使用3g/kg的添加剂量。     

枯草芽孢杆菌对罗非鱼生长及抗病力的影响

以初始体质量为(4.9±0.33)g的罗非鱼鱼苗为试验对象,研究饲料中添加不同水平的枯草芽孢杆菌对罗非鱼生长、饲料系数和部分免疫指标的影响。试验设对照组和3个处理组,每组5个重复。对照组投喂基础饲料,3个处理组分别投喂枯草芽孢杆菌含量为10万、100万和1 000万CFU/g的饲料,投喂持续8周,观察生长效果。生长试验结束后,注射嗜水气单胞菌进行攻毒试验,观察鱼死亡情况,计算成活率。结果表明:枯草芽孢杆菌对罗非鱼生长起到了一定的促进作用,同时可提高鱼体的抗病力,该试验环境下最佳添加水平为100万CFU/g。     

β-葡聚糖对肉仔鸡生产性能及免疫功能的影响

选用1日龄AA肉仔鸡480只(公雏),随机分为5个处理组。每个处理6个重复,对照组饲喂基础日粮,抗生素组饲喂基础日粮 林可霉素,三个β-葡聚糖组,在基础日粮中分别添加25、50、100mg/kgβ-葡聚糖,以研究添加β-葡聚糖对肉鸡生产性能、免疫器官、细胞和体液免疫、血清中溶菌酶含量以及盲肠内乳酸杆菌的影响。结果显示:肉仔鸡日粮中添加50mg/kgβ-葡聚糖,显著提高0～49日龄日增重和饲料转化效率(P<0.05);显著提高21日龄脾脏的相对重量(P<0.05);添加β-葡聚糖有提高非特异性免疫力的趋势。     

不同饲料配方下β-葡聚糖对凡纳滨对虾生长性能、非特异性免疫力的影响及成本分析

研究了3个低鱼粉添加水平(10%;20%;25%)下β-葡聚糖水平(0%,0.1%,0.3%)对凡纳滨对虾生长,非特异性免疫研究,结果表明:①饲料中10%鱼粉添加水平下凡纳滨对虾的生长性能显著低于20%和25%鱼粉添加组,而饲料中20%和25%鱼粉对南美白对虾的生长性能,非特异性免疫没有显著影响;②随着饲料中β-葡聚糖添加水平的增加,虾体血清和肝胰腺一些特异性酶如PO,ACP,SOD酶活都呈现递增的趋势;③合理利用鱼粉与β-葡聚糖的协同作用,可以显著提高饲料效率,降低饲料成本。     

植物乳杆菌对尼罗罗非鱼的肠道黏膜免疫调节及生长性能的影响

探讨植物乳杆菌对尼罗罗非鱼的肠道黏膜免疫、生长性能及抗病力的影响及作用机制。将植物乳杆菌饲喂尼罗罗非鱼后通过测定平均增重、增重率、特定生长率和饵料系数评价生长性能,通过PAS染色反应检测肠道杯状细胞的分泌黏多糖性能,通过荧光定量PCR的方法检测肠道细胞因子IL-1β、NFκB、TNF-α和IL-10的表达量,并用嗜水气单胞菌NJ-1攻毒后计算尼罗罗非鱼的累计死亡率。结果表明,植物乳杆菌组的平均增重、增重率和特定生长率显著高于对照组(P0.05);低浓度嗜水气单胞菌NJ-1攻毒后肠道分泌的中性黏多糖明显减少,而在植物乳杆菌组使杯状细胞分泌的中性黏多糖显著增多;在低浓度攻毒后第1 d,饲喂L.plantarum 08.923组的细胞因子IL-1β的表达量比对照组显著提高(P0.001),但是随着攻毒后时间的延长,植物乳杆菌组的表达量逐渐与对照组接近,而对于TNF-α和IL-10的表达,在攻毒后的第1 d,饲喂L.plantarum 08.923比对照组都显著升高(P0.01),在攻毒后第1 d到第2 d,两组细胞因子NFκB的表达量均显著升高,且两组间差异不明显,但在攻毒后的第3 d,对照组NFκB的表达量急剧回落,而植物乳杆菌组仍保持较高水平,两组间差异显著(P0.01);嗜水气单胞菌腹腔注射攻毒实验中,添加植物乳杆菌后尼罗罗非鱼的累积死亡率显著降低。研究表明,植物乳杆菌08.923对尼罗罗非鱼有显著的黏膜免疫调节能力,在一定程度上能抑制炎症反应,增强机体的免疫应答,因而能显著提高生长性能及抗病力。植物乳杆菌08.923可作为预防水产动物疾病和促进生长的理想选择,本研究结果也为阐明益生菌先天性免疫调节作用机理提供证据。