胶体金核酸适配体比色法检测氨苄西林钠的研究

为了研究检测氨苄西林钠的胶体金核酸适配体比色法,试验采用纳米金为载体,将核酸适配体与其结合后形成胶体金适配体复合物,然后加入靶标分子,由于核酸适配体与靶标的高效特异性结合,核酸适配体与胶体金解离,加入Na Cl后胶体金由红色变为蓝色。结果表明:胶体金比色检测体系中,Na Cl的最佳浓度为1 mol/L,核酸适配体的最佳浓度为2μmol/L。对氨苄西林钠的比色检测限为3.12 ng/mL。说明基于胶体金和核酸适配体的比色法灵敏度较高,可用于氨苄西林钠的快速筛选。     

核酸适配体比色法在抗生素残留快速检测中的应用

传统的抗生素残留快速检测方法主要是以抗体为核心试剂的免疫学方法,免疫学检测方法灵敏度好、操作简单快速.但是,抗体的获得需要多次免疫动物或(和)细胞培养,制备周期一般比较长,实验成本相对也较高.另外,抗体长期储存可能会影响效价.核酸适配体是从随机序列中筛选出来的一段单链寡聚核酸,适配体与靶分子之间的分子识别与抗体极为相似,但适配体比抗体具有更高的特异性,在常温下较稳定,不像抗体那样随着温度的变化容易降解.本文对基于核酸适配体的胶体金比色法在抗生素残留快速检测中的应用做一介绍.     

核酸适配体在病毒检测中的研究进展

核酸适配体指利用SELEX技术筛选出的寡聚核苷酸片段,它可以特异性地识别靶标并与之结合,且该技术具有成本低、亲和力高、特异性强等优点.目前,核酸适配体已广泛地应用于基础研究、临床诊断、疾病治疗等多领域,并且显示出巨大的应用潜力.结合近年来核酸适配体在病毒检测研究领域的最新研究成果,凭借适配体独特的性质在检测方面发挥的重要作用,综述了核酸适配体在人类免疫缺陷病痛毒、肝炎病毒、流感病毒、SARS病毒等病毒检测方面的最新研究进展,展望了核酸适配体在病毒检测领域的发展趋势.     

奶牛结合珠蛋白核酸适配体的筛选及鉴定

核酸适配体作为一种优于单克隆抗体的新型识别分子,具有更高的分辨率,能识别配体间一个基团的细微差别,且所需的结合活性位点更小。本研究利用指数级富集配体进化技术(SELEX)筛选特异性结合于奶牛结合珠蛋白(HP)的DNA适配体,并对筛取的适配体进行特性分析。体外构建全长80bp中间含40bp随机序列的单链DNA(ssDNA)文库,通过对循环次数、退火温度及引物比例的优化,建立了适合的筛选体系;以超滤离心管为介质,HP蛋白为靶标,对随机ssDNA文库进行反复的SELEX筛选,从单链DNA文库中筛选能特异性结合HP蛋白的核酸适配体;利用DNAMAN和RNAstructure软件对获得核酸适配体进行一级结构和二级结构分析。结果表明,经过体外8轮筛选,随机ssDNA文库与HP蛋白的结合率由1.86%上升到31.35%,特异性核酸达到最大富集;经克隆和测序,获得了能与HP蛋白特异性结合的5个家族的DNA适配体,同源性均达70%以上,RNAstructure分析其二级结构主要以茎环结构为主,表明ssDNA形成不同的茎环结构可能是适配体与HP蛋白特异性作用的结构基础。初步建立HP蛋白核酸适配体库,筛选到与HP蛋白特异性结合的核酸适配体,为制备以HP为检测靶标的奶牛隐性乳腺炎检测试剂盒奠定基础。     

伏马毒素B_1适配体的筛选及其快速定量检测方法的建立北大核心CSCD

本研究旨在获得伏马毒素B1特异性适配体并利用其和胶体金的作用建立伏马毒素B1的快速检测方法。通过非固定靶标的指数富集配体系统进化技术筛选获得伏马毒素B1的适配体,并用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测定所获适配体的亲和力和特异性,建立基于适配体的胶体金快速定量检测方法。结果表明:筛选得到的伏马毒素B1适配体F102亲和力解离常数为(42.1±4.0)nmol/L;建立的胶体金检测方法简便、快速、特异性强;样品检测结果与液相色谱结果的相对误差低于15.7%。因此,本研究利用筛选得到的适配体建立了可用于谷物和饲料中伏马毒素B1含量的快速定量检测方法。     

伏马毒素B_1适配体的筛选及其快速定量检测方法的建立

本研究旨在获得伏马毒素B1特异性适配体并利用其和胶体金的作用建立伏马毒素B1的快速检测方法。通过非固定靶标的指数富集配体系统进化技术筛选获得伏马毒素B1的适配体,并用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测定所获适配体的亲和力和特异性,建立基于适配体的胶体金快速定量检测方法。结果表明:筛选得到的伏马毒素B1适配体F102亲和力解离常数为(42.1±4.0)nmol/L;建立的胶体金检测方法简便、快速、特异性强;样品检测结果与液相色谱结果的相对误差低于15.7%。因此,本研究利用筛选得到的适配体建立了可用于谷物和饲料中伏马毒素B1含量的快速定量检测方法。     

基于氧化石墨烯-SELEX技术对氟苯尼考核酸适配体的筛选及其结构分析

氟苯尼考(FFC)具有胚胎毒性,在食用动物组织中残留会严重危害消费者的健康与安全。为建立快速检测动物性食品中FFC残留的方法奠定基础,本研究根据引物设计原则,设计了上下游引物,根据引物序列构建长度为80 bp的随机单链寡核苷酸(ssDNA)文库,其3'端和5'端为固定的20 bp引物结合位点,中间为40 bp的随机序列。通过氧化石墨烯-富集配体系统进化技术(GO-SELEX)筛选,即将经过预处理的ssDNA文库与等摩尔量的FFC及氧化石墨烯(GO)沉淀共孵育。通过GO的π-π共轭键吸附未结合靶标FFC的ssDNA,已结合靶标的ssDNA(FFC-ssDNA)则留在上清液中,通过离心获得FFC-ssDNA复合物。将每一轮筛选的FFC-ssDNA复合物经离心、抽提、醇沉淀回收所得到的ssDNA做为模板进行PCR扩增,通过链霉亲和素将PCR产物的双链DNA(dsDNA)彻底裂解为单链,作为次级ssDNA文库进入下一轮筛选。每一轮的筛选均计算一次回收率,当回收率变化趋于稳定时,引入反筛选物氯霉素(CAP)、甲砜霉素(TAP),以去除与FFC特异性结合较差的ssDNA。当回收率达到饱和,筛选停止。最终,根据回收率的计算结果共进行了12轮核酸适配体的筛选,其中有10轮为正筛选,第7轮和第11轮为反筛选。PCR结果显示,经12轮筛选均得到了所需要的目的 ssDNA片段。对第9轮和第12轮的筛选产物克隆并测序,共得到46条不同的核酸适配体序列。经对46条核苷酸序列的二级结构、自由能(△G)预测和亲缘性分析,最终得到A1、A26、A27、A31、B18、B28、B30、B37共8条候选核酸适配体。通过测定8条候选适配体的解离常数(Kd值)分析其与FFC的亲和性。结果显示,8条候选适配体的Kd值在11.811 nmol/L～54.097 nmol/L;利用相同浓度的FFC、CAP、TAP对其中亲和性较高的A26和B18进行特异性试验,结果表明两条核酸适配体均可以与FFC特异性结合,且B18与FFC的特异性结合作用更强,可作为FFC的特异性核酸适配体。本研究首次对FFC的核酸适配体进行SELEX筛选,为建立快速检测动物性食品中FFC残留方法奠定基础。     

动物卫生风险评估研讨会在青岛召开

正与风险评估创新团队研究建立了牛奶黄曲霉毒素M1(AFM1)的核酸适配体检测新方法。该方法具有灵敏度高、准确度高、操作简便等优点,为快速检测牛奶中的AFM1开辟了新路径。相关研究成果发表在《化学前沿(Frontiers in Chemistry)》上。据团队执行首席郑楠研究员介绍,AFM1是牛奶中最重要的霉菌毒素,目前AFM1常用检测方法有HPLC、LC-MS/MS等,但这些方法对样品预处理要求高,且耗费时间长。为进一步提高样品检测的质量和效率,研究人员经过长期摸索和反复验证,成功建立了利用核酸适配体技术检测牛奶AFM1的新方法。研究表明,在核酸适配体传感检测中,AFM1与反应荧光强度呈线性关系,线性范围为1～100纳克/毫升,AFM1检测限为0.5纳克/毫升,加标回收率可     

纳米金-核酸适配体可视化检测蜂蜜中恩诺沙星的方法研究

目的 建立纳米金-核酸适配体可视化检测畜产品中恩诺沙星的方法。方法 首先利用还原法合成纳米金（gold nanoparticles, AuNPs）颗粒,利用紫外分光光度计对实验原理进行验证,优化了实验条件,建立了恩诺沙星浓度和特定波长下吸光度值之间的关系式。同时也验证了该方法的特异性。结果 所得线性回归方程在低浓度时为y=0.6377x+0.89495,R2=0.99026,方法检出限为0.018 CFU/mL;所得线性回归方程在高浓度时为y=0.04288x+0.95578,R2=0.99812,方法检出限为0.265 CFU/mL。方法除可用来检测恩诺沙星外,还可用于检测盐酸恩诺沙星,具有一定的特异性。对恩诺沙星实际样品测定的回收率为95.5%~97.8%,相对标准偏差小于10%。结论 方法操作方便简便,成本低,检测时间短,可用于畜产品中恩诺沙星快速定量检测。     

乳制品抗生素快检试纸条的研究进展

随着国民对乳制品需求量的增加,乳制品行业成为发展最快的食品产业之一,但随之产生的抗生素残留问题也成为关注的焦点。快检试纸条作为一种简便、快速、低成本的检测手段,在抗生素检测方面发挥关键作用。主要介绍了用于检测乳与乳制品中残留抗生素的快检试纸条,包括胶体金免疫层析试纸条、酶联免疫试纸条、荧光免疫层析试纸条、核酸适配体试纸条和生物膜干涉试纸条。重点介绍了基于新型荧光纳米材料、核酸适配体、生物膜干涉等技术的新型试纸条的研究进展。