羊痘病毒属病毒多重TaqMan MGB荧光定量PCR检测方法的建立

为建立同时快速鉴别检测羊痘病毒属病毒(CaPV)的方法,本研究设计了一对针对CaPV的通用引物和3条特异性的TaqMan MGB探针,并对其反应条件进行优化,建立了单管同时鉴别检测3种病毒的多重TaqMan MGB荧光定量PCR方法。结果显示,该多重荧光定量PCR方法仅对牛结节性皮肤病病毒(LSDV)、山羊痘病毒(GTPV)和绵羊痘病毒(SPPV)有特异性扩增,而对牛痘病毒等其它相关病毒核酸无扩增。在10~2拷贝/μL～107拷贝/μL浓度范围内有良好的线性关系;对LSDV、 GTPV、SPPV的最低检测限分别为14.8拷贝/μL、32.9拷贝/μL、26.7拷贝/μL。标准曲线相关系数(R2)均为0.999。批内及批间变异系数均小于1.5%。应用本研究建立的方法和OIE陆生动物手册推荐普通PCR方法分别对185份临床样品和67份模拟样品进行检测,该方法检出率比普通PCR方法高约1.6%。本研究建立的CaPV多重TaqMan-MGB荧光定量PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便快速等优点,适用于CaPV临床样品的快速鉴别检测。     

应用PCR检测山羊痘病毒

初步建立了用于诊断山羊皮肤组织中山羊痘病毒的PCR方法。试验设计了2对引物，用以分别检测山羊痘病毒的特异性基因和α-微管蛋白基因。克隆到的DNA扩增产物的序列与GenBank中收录的序列同源性达到98％。试验表明，用PCR方法可快速检测样品中的山羊痘病毒。     

绵羊痘病毒PCR检测方法的建立

根据羊痘病毒(CaPV)P32和ITR基因序列,设计合成了2对引物,建立了不同基因片段检测羊痘病毒核酸的PCR方法。结果表明针对2种基因的PCR方法敏感性较高,最小DNA检出量分别为20.15 ng(P32)和25.80 pg(ITR);扩增禽痘疫苗毒株、羊口疮病毒细胞培养物、口蹄疫病毒细胞培养物,结果均为阴性,特异性较强。扩增产物进行序列分析,与GenBank收录的其他株病毒P32核苷酸同源性为99.5%～99.9%,与ITR基因同源性为98.3%～100%。本方法为羊痘的快速诊断提供了可靠、简便的检测技术。     

羊痘病毒PCR快速检测方法研究

针对羊痘病毒(Capripoxvirus,CaPV)的基因组中末端反向重复序列设计、合成1对特异性引物,优化PCR反应体系和扩增条件,建立诊断羊痘病毒的PCR方法。结果表明,山羊痘病毒的PCR产物为289bp,与预期片段大小相符,而羊的健康皮肤扩增物中没有DNA条带。本方法具有快速、灵敏、特异性高的特点,可作为实验室快速诊断羊痘病毒的有效方法。     

羊痘病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立

为建立羊痘病毒(CaPV)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究根据GenBank中羊痘病毒的保守基因序列,设计出针对羊痘病毒的LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪优化得到病毒核酸等温扩增最佳条件是62 ℃恒温反应60 min。在此条件下,病毒核酸的最低检测含量为3.1×10^-2 pg/μL,灵敏度比OIE推荐的PCR方法高10⁴倍。添加钙黄绿素(calcein)建立的目测法,还可实现对上述病原体检测结果肉眼观察。本研究获得的CaPV LAMP仪器法和目测法可特异性地扩增羊痘病毒属的山羊痘病毒、绵羊痘病毒及牛疙瘩皮肤病病毒核酸,具有反应快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、设备要求低等特点。     

羊痘病毒实时荧光定量TaqManPCR检测方法的建立

参照羊痘病毒（CaPV）P32的基因序列，设计合成了2套引物和1条探针，建立了实时荧光定量PCR技术，对细胞培养物、皮肤丘疹、痂皮等组织病料中的GPV进行了特异性检测和敏感性试验。结果显示，用300nmol／L引物浓度和200nmol／L探针浓度，获得的CT值较小，而△Rn最大；可检测到相当于0．1TCID50的病毒DNA；制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽，相关系数为0．9995以上；组内和组间试验重复性的变异系数分别为2．3％和3．4％；与常规的PCR相比较，该方法具有快速、特异、敏感、可定量，可同时检测大量样品等优点。表明，荧光TaqMan PCR是一种检测CaPV的良好方法，可对组织病料中低含量的CaPV或持续带毒宿主进行准确检测。     

羊痘病毒和羊口疮病毒二重PCR鉴别检测方法的建立

针对羊痘病毒（capripoxvirus，CaPV）的A29L基因和羊口疮病毒（orf virus，ORFV）的H3L基因，设计、合成了2对特异性引物以进行二重PCR。结果表明，该方法可以在数小时、在同一反应体系中清晰地区分CaPV和）ORFV，其PCR产物大小分别为413bp和708bp，与预期的片段大小相符，序列分析证实目的基因序列与已发表的序列一致；该检测方法的灵敏度可达1个病毒蚀斑形成单位（PFU）。采用二重PCR对12株CaPV、ORFV和相关病毒、细菌培养物，以及22份田间样品进行检测，与预期结果完全一致，且与相关病毒或健康羊组织样品无交叉反应。结果表明，该方法具有快速、敏感、特异等优点，可作为临床样品中CaPV和ORFV的鉴定和诊断的有效方法。     

鉴别牛结节性皮肤病病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为实现牛结节性皮肤病病毒（LSDV）和羊痘病毒属（CaPV）其他成员的鉴别诊断，针对LSDV 010基因保守区域设计特异性引物及Taq Man探针，与文献报道的CaPV 068基因的通用引物及探针组合，通过优化反应体系和条件，建立了一种可同时鉴别检测LSDV和CaPV其他成员的双重荧光定量PCR检测方法。结果显示：本方法可以特异性扩增LSDV和CaPV其他成员，并且与其他牛、羊病毒无交叉反应，特异性好；对pLSDV-010和pCaPV-068质粒标准品的最低检测限均为15 copies/μL，具有较高的灵敏性；组内和组间变异系数均小于1.75%，重复性良好。应用本试验建立的方法与荧光定量PCR方法同时检测542份临床样品，发现CaPV的样品符合率为98.52%,LSDV为99.63%。本试验建立的方法为CaPV鉴别筛查、LSDV精准防控及流行病学调查提供了快捷有效的技术手段。     

山羊痘病毒PCR/酶切检测方法的建立

为了建立一种快速的山羊痘检测方法,根据山羊痘病毒基因组保守区T3A/T3C基因设计了1对引物,以山羊痘病毒DNA为模板进行PCR扩增并连接到pMD18-T载体进行序列测定,测序结果显示片段长491 bp,与已报道的山羊痘病毒对应序列进行比对,同源性高达98%。特异性和灵敏性试验及PCR产物的酶切位点分析表明,该引物特异性好,敏感性强。本研究建立的山羊痘病毒PCR/酶切检测方法可应用于山羊痘病毒感染的临床诊断。     

应用PCR检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒

设计合成了1对引物，建立用于检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒的PCR方法。结果表明，PCR对羊接触传染性脓疱性皮炎病毒细胞培养毒的检测与细胞培养CPE、电镜检测的结果相一致。经对扩增产物进行序列分析，与已报道NZ—2株的核苷酸序列同源性高达97％。用此PCR方法扩增羊痘病毒、口蹄疫病毒、蓝舌病病毒，结果均为阴性。此方法用于检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒是可行的、特异的。     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

鸡败血支原体垂直传播模式及其阻断方法

以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。     

两种绿头鸭肌肉营养成分分析及评价

本试验旨在研究两种绿头鸭（白羽绿头鸭和绿头鸭）肌肉营养组成和价值,为绿头鸭肉产品的开发利用提供基础数据和理论依据。选择白羽绿头鸭和绿头鸭60只（每个品种各30只,公母各半）,依照国家标准测定胸肌粗蛋白质、粗脂肪、胆固醇含量及氨基酸、脂肪酸、微量元素和维生素的组成和含量,并对胸肌进行氨基酸评价及脂肪酸营养价值评价。结果显示,白羽绿头鸭肌肉粗蛋白质含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;两种绿头鸭肌肉中均检测到17种含量大于0.01%的氨基酸,其中白羽绿头鸭肌肉苏氨酸、组氨酸、丝氨酸和脯氨酸含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,赖氨酸、谷氨酸和精氨酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到13种含量均大于0.01%的脂肪酸,其中白羽绿头鸭硬脂酸和油酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到9种矿物质元素（钠、镁、钾、钙、锰、铁、铜、锌和硒）,两种绿头鸭差异不显著（P>0.05）;检测到8种维生素,白羽绿头鸭肌肉维生素B₁含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,维生素D和维生素E含量显著低于绿头鸭（P<0.05）。两种绿头鸭肌肉氨基酸比例接近世卫组织推荐的理想模式,富含人体所需的矿物质元素和维生素,具有广阔的开发利用前景。     

Analysis and Evaluation of Nutrient Composition of Muscles of Two Kinds of Mallard

This experiment was aimed to study the nutritional content and value of the muscles of two mallards (White feather mallard and mallard),and provide basic data and theoretical basis for the development and utilization of mallard meat products.60 White feathered mallards and mallards (30 for each breed,half of male and female) were chosen,and the composition and content of pectoral muscle crude protein,crude fat,cholesterol,amino acids,fatty acids,trace elements and vitamins were determined according to national standards and the nutritional values of muscle were evaluated.The results showed that the content of crude protein in muscle of White feather mallard was significantly lower than that of mallard (P<0.05).17 kinds of amino acids with contents higher than 0.01% were detected in the muscles of the two kinds of mallards,among which the contents of threonine,histidine,serine and proline in the muscles of the White feather mallard were significantly higher than those of mallard (P<0.05).The contents of lysine,glutamate and arginine were significantly lower than those of mallard (P<0.05).13 kinds of fatty acids with contents higher than 0.01% were detected,and the contents of stearic acid and oleic acid were significantly lower than those of the mallard.9 mineral elements (sodium,magnesium,potassium,calcium,manganese,iron,copper,zinc and selenium) in two kinds of mallards were detected,and there was no significant difference between the two kinds of mallards (P>0.05).8 kinds of vitamins were detected,and the content of vitamin B₁ in muscle of White feather mallard was significantly higher than that of mallard (P<0.05),but the contents of vitamin D and vitamin E were significantly lower than that of mallard (P<0.05).The ratio of amino acids in muscle of two kinds of mallards was close to the ideal model recommended by WHO,which was rich in mineral elements and vitamins for human body,and had a broad prospect of development and utilization.     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。     

三种圈养雉类的行为比较研究

2008年7月23日～8月5日和8月7～13日,采用目标动物取样法分别研究了4只蓝鹇(2♂2♀)、3只白鹇(1♂2♀)和5只白腹锦鸡(2♂3♀)的各种行为的发生频率进行了研究。结果发现3种雉类的各种行为类型都相似,但不同雉类间各种行为发生频次有差异。白腹锦鸡、蓝鹇和白鹇的休息行为分别在8:00、9:00和10:00达到日高峰,分别为12.05次/h、28.39次/h和14次/h。蓝鹇、白鹇、白腹锦鸡运动相关行为分别在7:00、8:00、9:00出现峰值,为19.29次/h、21.76次/h、24.90次/h;10:00蓝鹇、白鹇、白腹锦鸡的运动相关行为发生频次都出现了白昼的第一个谷值,分别为6.71次/h、9.29次/h、15.19次/h。蓝鹇、白鹇、白腹锦鸡的梳理行为9:00出现谷值分别为7.64次/h、8.05次/h、11.67次/h,10:00出现峰值分别为17.25次/h、21.19次/h、21.0次/h。3种雉鸡的采食行为的日节律相似。     

不同类型黑麦草营养价值评估

文章旨在通过体内外试验评估不同类型黑麦草的营养价值。试验选择平均体重为（66.87±2.34）kg的绵羊12头,随机分成3组,每组4个重复,每个重复1头。3组绵羊分别饲喂新鲜、青贮和晒干黑麦草。经过14?d的饲养试验后收集粪便和牧草样品进行后续分析。结果：晒干黑麦草的干物质、有机物和无氮浸出物含量均表现最高（P＜0.05）。新鲜黑麦草粗蛋白质和半纤维素含量较青贮黑麦草分别显著提高42.10%和10.82%（P＜0.05）。青贮黑麦草粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量显著高于其他两种类型的黑麦草（P＜0.05）。新鲜、青贮和晒干黑麦草的粗蛋白质、粗脂肪和粗纤维表观消化率无显著差异（P＞0.05）。晒干黑麦草干物质表观消化率较新鲜和青贮黑麦草显著提高6.34%和6.21%（P＜0.05）,同时晒干黑麦草有机物表观消化率较新鲜黑麦草显著提高6.65%（P＜0.05）,无氮浸出物表观消化率较青贮黑麦草显著提高15.44%（P＜0.05）。当体外代谢能值以MJ/kg有机物表示时,新鲜和青贮黑麦草代谢能值较晒干黑麦草分别显著提高21.34%和22.41%（P＜0.05）,而当体外代谢能值以MJ/kg干物质表示时,新鲜黑麦草能值最高,青贮黑麦草能值次之,晒干黑麦草能值最低（P＜0.05）。结论：新鲜、晒干和青贮黑麦草在不同营养成分上各有优势,但3种牧草主要营养物质的表观消化率和代谢能值无显著差异。因此,无论是新鲜、晒干还是青贮黑麦草都可以作为反刍动物粗饲料的良好来源。 [关键词]黑麦草;青贮;营养价值;消化     

商会自治的基石——商会自治规范研究

在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。     

Comparison of four techniques of arthrocentesis of the lateral compartment of the femorotibial joint of the horse

Reasons for performing study: Clinical experiences indicate that centesis of the lateral compartment of the femorotibial joint is often unsuccessful. Objective: To determine the accuracy of 2 published and 2 unpublished techniques of centesis of the lateral compartment of the femorotibial joint. Hypothesis: It was hypothesised that a drug can be administered into the lateral compartment of the femorotibial joint via a diverticulum of this joint that surrounds the medial aspect of the long digital extensor tendon and that this technique is more accurate than described techniques of centesis of this compartment. Methods: Twenty‐four stifles of 12 horses were divided equally into 4 groups and a radiocontrast medium injected into the lateral compartment of the femorotibial joint of each group using a hypodermic needle inserted: 1) caudal to the lateral patellar ligament and proximal to the tibial plateau, 2) caudal to the long digital extensor tendon and proximal to the tibial plateau, 3) between the long digital extensor tendon and bone of the extensor groove of the tibia or 4) directly through the long digital extensor tendon until it contacted bone. Twelve veterinary students who had no experience using any of these techniques performed the injections. Accuracy of each technique was determined by examining radiographs obtained after injecting the contrast medium. Results: The most successful technique for arthrocentesis was by inserting a needle through the long digital extensor tendon. This approach was successful in all attempted cases, whilst other techniques had lower rates of success. Conclusions: The lateral compartment of the femorotibial joint can be accessed accurately by inserting a needle through the long digital extensor tendon as it lies within the extensor groove. Other techniques may not be as accurate for clinicians inexperienced in arthrocentesis of the lateral compartment of the femorotibial joint.