鸡传染性支气管炎病毒对新城疫病毒的干扰作用观察

为观察鸡传染性支气管炎病毒（IBV）HN99株对新城疫病毒（NDV）增殖的干扰作用,该试验采用不同浓度的IBV标准株M41和地方株HN99与鸡新城疫病毒（NDV）分别按不同接种顺序同胚增殖,利用病毒血凝试验（HA）测定NDV的效价,观察IBV对NDV的干扰作用,从而为检测IBV地方株HN99提供方法,也为同胚增殖两种病毒提供一系列的数据参考。试验结果表明,鸡传染性支气管炎病毒地方株HN99对NDV的干扰作用与其浓度和接种顺序有关。     

环糊精包合碘对鸡新城疫与传染性支气管炎病毒消毒效果分析

鸡新城疫病毒(NDV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)均是危害养鸡生产的因素之一,本研究分别以SPF鸡胚发育情况和抗体滴度评价环糊精包合碘杀灭NDV和IBV的效果。以聚维酮碘(1∶626)作为对照药物,环糊精包合碘设计1∶500、1∶1 000、1∶1 500 3个试验浓度,以NDV和IBV攻毒鸡胚作为负对照。结果表明,NDV病毒对照组平均抗体滴度为8.4,试验组均为0;IBV病毒对照组均出现侏儒胚现象,试验组均未出现侏儒胚;随环糊精包合碘浓度的增大,鸡胚重量有降低的趋势。本研究表明环糊精包合碘能够完全杀灭NDV和IBV,其对鸡胚的刺激性低于聚维酮碘。     

黄芩苷体外抗IBV QX株的作用研究

为研究黄芩苷体外抗禽传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus, IBV)QX株的效果，试验对IBV进行复壮与扩繁，制备原代鸡胚肾(CEK)细胞，并测定IBV对CEK细胞的TCID₅₀和黄芩苷对CEK细胞的最大无毒浓度(MNTC);在MNTC基础上采用CCK法测定不同浓度黄芩苷对IBV的有效抑制率，观察不同浓度黄芩苷对IBV导致的CEK细胞的细胞病变效应(CPE)的抑制情况，并采用qPCR法测定不同浓度黄芩苷对IBV N基因相对表达量的影响。结果表明：成功复壮并扩繁了IBV,其未被其他病毒污染，对CEK细胞的TCID₅₀为1×10^-4.75/0.1 mL;黄芩苷对CEK细胞的MNTC为9.75 mg/L;该浓度黄芩苷对IBV的有效抑制率最高，为64.03%,能有效减轻IBV对CEK细胞的CPE;各浓度黄芩苷均可以极显著降低CEK细胞中IBV N基因相对表达量(P<0.01)。说明黄芩苷对CEK细胞的MNTC为9.75 mg/L,该浓度黄芩苷具有较好的体外抗IBV QX株的...     

十种单味中药汤剂抗贵州鸭源N6亚型禽流感病毒的筛选

为了筛选出抗N6亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)效果较好的中药,试验用鸡胚培养方法确定桂枝、黄芩、防风、金银花等10种中药汤剂的安全性;用RT-PCR扩增方法检测鸡胚试验扩增病毒是否成功;用鸡胚培养试验和RT-PCR方法确定N6亚型AIV的鸡胚半数感染量(EID_(50));中药汤剂与AIV等量混合后进行鸡胚尿囊腔接种培养试验,培养72 h后收集尿囊液,再对收集的尿囊液进行血凝素(HA)效价测定。结果表明:0.2 mL浓度为250 mg/mL的中药汤剂为安全剂量。贵州鸭源N6亚型AIV EID_(50)为1×10~(-7.66)/0.2 mL。中药汤剂与100EID_(50)等量混合后进行鸡胚尿囊腔接种,黄芩组、防风组、金银花组、荆芥组、鱼腥草组、大青叶组、川芎组、桂枝组、苍术组、地黄组的HA效价分别为2.83,3.58,4.43,4.50,5.00,5.00,5.17,6.20,6.40,6.80 lb。说明在试验选用的十味中药中,单味黄芩汤剂在鸡胚中抗贵州鸭源N6亚型AIV效果最佳,地黄效果最差。     

鸡传染性支气管炎病毒与新城疫病毒增殖作用及免疫干扰的研究

试验旨在观察鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）和鸡新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）之间的增殖干扰现象,分析在免疫过程中两种疫苗存在的免疫干扰,为确定疫苗的免疫程序提供依据。采用完全随机试验设计,选取10日龄鸡胚尿囊腔接种不同浓度的IBV、NDV以及不同浓度混合的IBV和NDV,收集尿囊液测定其血凝效价（HA）;用不同浓度的IBV、NDV以及不同浓度混合的IBV和NDV分别免疫BALB/c小鼠及SPF雏鸡,收集血清,间接酶联免疫吸附法（ELISA）和血凝抑制（HI）试验测定IBV和NDV的抗体效价及抑制效价。结果表明,同胚培养时,无论先接种IBV后接种NDV还是先接种NDV后接种IBV或IBV和NDV同时接种,IBV对NDV均有干扰作用,而NDV对IBV没有干扰作用;接种IBV和NDV的小鼠,其产生IBV和NDV的抗体效价均低于单独免疫组,免疫的次序及免疫间隔时间对IBV和NDV的抗体效价均有影响,IBV对NDV的免疫效果具有较大的干扰作用。不同针混合免疫方式能提高IBV和NDV的抗体效价;接种IBV和NDV的雏鸡,免疫次序及免疫相隔时间对IBV和NDV的抗体效价均有影响,IBV对NDV的免疫效果具有较大的干扰作用;雏鸡和小鼠免疫血清HI试验数据表明,免疫次序及免疫间隔时间对IBV和NDV抗体的产生均有影响,但对NDV抗体的产生影响更明显,随着免疫间隔时间的增加,IBV和NDV的抗体水平呈增加趋势,雏鸡比小鼠更能敏感地反映出IBV对NDV的免疫干扰作用。混合注射时IBV和NDV的抗体水平均降低,IBV对NDV的免疫效果有干扰作用。因此,在同胚培养、小鼠及雏鸡的免疫中,IBV对NDV有干扰作用,而NDV对IBV无干扰作用。混合接种时IBV和NDV抗体效价均下降,IBV对NDV的免疫效果有干扰作用。免疫次序及免疫间隔时间对IBV和NDV抗体的产生均有影响,但随着免疫间隔的增加,IBV和NDV的抗体水平呈增加趋势。     

禽流感病毒单克隆抗体的研制

用低致病性禽流感病毒H9N2亚型(Mildly Pathogenic Avian Influenza Virus,MPAIV)F株全病毒作为抗原,制备能够用于建立ELISA检测AIV的特异性单抗;以间接ELISA和HI试验筛选出阳性克隆,并经有限稀释法三次亚克隆之后,共获得三株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,在Dot-ELISA试验中三株单抗中的两株与13个AIV H9N2国内分离株、4个AIV H5N1国内分离株都反应,而与10个NDV国内分离株,IBV、IBDV、EDSV-76、SPF鸡胚尿囊液不反应.一株与13个AIV H9N2国内分离株反应,与4个AIV H5N1分离株、NDV、IBV、IBDV、EDSV-76、SPF鸡胚尿囊液不反应.     

鸡传染性支气管炎病毒上海株的分离与鉴定

本研究对分离自上海某养鸡场的疑似鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)进行了分离和鉴定.所采用的方法有:鸡胚致病性试验、对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的干扰试验、动物回归试验以及RT-PCR鉴定等.试验结果表明,该病原接种鸡胚后,48 h可引起鸡胚死亡,胚体呈侏儒样变化,对NDV感染有明显干扰作用;用分离的病毒接种SPF雏鸡可产生明显呼吸道症状,肾脏表现肿大和大量尿酸盐沉积等病理变化;用IBV特异性引物可以从分离物中扩增出IBV的N基因序列,测序结果表明,该毒株属于肾型IBV.综上所述,本研究在上海流行区域成功分离到一株IBV,将其命名为SH11株.     

中药制剂"瘟毒杀"对IBDV、NDV和AIV的抑制试验

选10日龄SPF鸡胚,进行了瘟毒杀煎液对鸡胚人工感染NDV、IBDV和AIV抑制试验.结果显示,瘟毒杀药液(1g/ml)2倍、4倍和6倍稀释,对感染NDV强毒的鸡胚保护率达到100%、75%和62.5%,比NDV强毒对照组分别提高87.5、62.5和50个百分点;对感染AIV强毒的鸡胚保护率达到87.5%、62.5%和50%,比AIV强毒对照组分别提高75、50和37.5个百分点;对感染IBDV强毒的鸡胚保护率达到100%、87.5%和62.5%.比IBDV强毒对照组分别提高75、62.5和37.5个百分点.NDV强毒接种组鸡胚尿囊液NDV血凝效价极显著高于NDV强毒+瘟毒杀药液组尿囊液NDV血凝效价;AIV强毒接种组鸡胚尿囊液AIV血凝效价极显著高于AIV强毒+瘟毒杀药液组尿囊液AIV血凝效价.结果表明,瘟毒杀对NDV、AIV和IBDV有较强的抑制作用.     

板蓝根和黄芪提取液与IBV感作后对鸡胚EE值和EE指数的影响

为研究板蓝根和黄芪复方提取液对鸡传染性支气管炎病毒（IBV）致鸡胚矮小化的影响,将IBV分别与不同浓度提取液感作后接种于9日龄鸡胚,孵育,分别测定接种病毒、药液和病毒与药液混合液后48h、72h、96h、120h、144h和168h鸡胚的体重与卵重的比值（EE值）和试验组EE值与空白对照组平均EE值的比值（EE指数）的变化。结果表明,浓度为1．00g／ml、0．50g／ml的板蓝根和黄芪提取液对IBV致鸡胚矮小化具有显著的抑制作用。     

鸡新城疫、传染性支气管炎病毒同胚接种试验

通过对五个批次的无特定病原体(SPF)鸡胚进行鸡新城疫病毒（NDV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）同胚接种,收获72～120 h死胚及120 h活胚尿囊液,分别测定NDV和IBV的病毒含量,结果表明NDV病毒含量达到了108.3～108.7EID50/0.1mL, IBV的病毒含量达到了106.3～106.5EID50/0.1mL。两种病毒含量均达到《中华人民共和国兽用生物制品制造及检验规程》（2000版）中鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗病毒含量要求的标准。表明该方法即可降低成本,又简化了生产工艺。     

板蓝根和黄芪提取液与IBV感作后对鸡胚EE值和EE指数的影响

为研究板蓝根和黄芪复方提取液对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)致鸡胚矮小化的影响,将IBV分别与不同浓度提取液感作后接种于9日龄鸡胚,孵育,分别测定接种病毒、药液和病毒与药液混合液后48h、72 h、96 h、120 h、144 h和168 h鸡胚的体重与卵重的比值(EE值)和试验组EE值与空白对照组平均EE值的比值(EE指数)的变化.结果表明,浓度为1.00 g/ml、0.50 g/ml的板蓝根和黄芪提取液对IBV致鸡胚矮小化具有显著的抑制作用.     

鸡新城疫病毒与传染性支气管炎病毒同胚培养的试验研究

将鸡新城疫病毒（NDV）和鸡传染性支气管炎病毒（IBV）按一定的稀释比例等量混合接种9~10日龄SPF鸡胚,让其在同一鸡胚中增殖（简称同胚培养）。试验结果表明,用5倍稀释的ND-Lasota病毒液与 5000倍稀释的IBH₁₂₀病毒液等体积混合后尿囊腔接种鸡胚,能在同一鸡胚中正常增殖,接种后96 h收毒,用红细胞凝集试验（HA）测得NDV、IBV两种病毒的血凝价分别为11 log2和12 log2,不低于各自病毒单独增殖的HA滴度,病毒的增殖基本趋于平衡。同时也证实了在合适的培养条件下,IBV对NDV的复制不会产生干扰。     

通过鸡新城疫La Sota株的干扰作用鉴定传染性支气管炎病毒

传染性支气管炎病毒(IBV)干扰鸡新城疫病毒(NDV)在鸡胚上的生长现象已被作为一种诊断传染性支气管炎的方法。用IBV—NDV干扰试验对十五株来自疑为传染性支气管炎鸡群的病毒进行分析:接种IBV10小时后再接种NDV La Sota毒株,后通过血凝(HA)试验测定,有八株能干扰La Sota在鸡胚上的生长。 IBV这种干扰作用具有特异性,因为它可被相应的IBV抗血清所抑制。此种方法证明干扰作用是敏感的。在一些IBV继代代数少的情况下、虽然IBV不引起鸡胚产生病变,但可干扰NDV的HA活性。此外,血清学反应IBV阴性的样品不能干扰NDV在鸡胚上的生长。从以上情况看,对于分离IBV野毒来说,IBV—NDV干扰试验显然是一种改进的诊断方法。     

禽流感病毒H9亚型灭活油乳剂疫苗的免疫试验

以低致病性禽流感病毒（AIV）H9N2亚型株的鸡胚适应毒经尿囊腔接种10日龄鸡胚，从24h后死亡胚及96h后4℃致冷死亡胚收集尿囊液，尿囊液的血凝价约7log2，每毫长约含10^8.6个ELD50的病毒。将尿囊液经0.1%福马林灭活后，用超滤器将尿囊液浓缩5倍后分别制成双联灭活疫苗。对4周龄SPF鸡肌肉注射0.5ml或0.3ml单联H9亚型AIV灭活苗，在接种后2、3、4、5周后，血清中对H9亚型AIV的血凝抑制（HI）抗体效价分别是5.1、7.2、8.3、10log2或3.8、6.5、6.3、8.31log2。注射0.5ml的H9亚型AIV和NDV二联油乳苗的鸡，在接种后2、3、4、5周对H9亚型AIV及Lasota株NDV的HI滴度分别是4.6、5.6、6.7、8log2及7、7.6、6.7、7log2。显然，二联苗对H9亚型AIV及NDV均产生了理想的免疫效果。     

鸡新城疫、传染性支气管炎二联油乳剂灭活疫苗试验研究报告(Ⅰ报)——NDV、IBV同胚培养繁毒效果试验

本研究根据NDV、IBV二种病毒能在鸡胚中繁殖的特点,通过筛选上述二种病毒的最适稀释比例,将混合毒种接种9~10日龄鸡胚尿囊腔内(筒称同胚培养),使接种鸡胚尿囊液96h二种病毒毒价同时达到高峰,每0.1ml尿囊液含NDV≥10~8EID_(50)、IBV≥10~7EID_(50).本试验用兔抗NDV、IBV血清抗体封闭相应病毒测定混合毒获得成功.本研究目的在于为制备鸡二联油乳剂灭活苗时改进繁毒方法,降低疫苗成本.     

黄芩抑制鸡传染性支气管炎病毒增殖的作用机制研究

为研究黄芩乙醇提取物对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的体外抑制作用及对IBV感染细胞内抗病毒基因表达的影响,进行以下试验:①以人肺癌H1299细胞为供试细胞,在IBV感染过程中在细胞培养体系中加入一定量的黄芩乙醇提取物,24 h后检测病毒增殖量;②将黄芩乙醇提取物稀释成4个不同浓度,观察不同浓度的提取物对IBV的抑制作用;③用RT-PCR检测黄芩乙醇提取物对IBV感染细胞内抗病毒基因OASL、IFI27、STAT1表达的影响。结果显示:黄芩乙醇提取物对IBV具有明显的抑制作用,且药物浓度越高抑制作用越明显;此外,黄芩乙醇提取物可增加IBV感染细胞内抗病毒基因的表达量。     

抗IBV中药的筛选

采用气管环组织培养法通过3种加药方式对贯众、黄芩等10种中药及复方组合进行了抗鸡传染性支气管炎病毒的筛选试验,并采用滴鼻法对SPF鸡攻毒建立鸡传染性支气管炎感染模型,应用筛选出的中药复方制剂对其进行预防和治疗试验,并进行病毒毒力测定.不同给药方式显示:将中药与病毒体外作用后接种TOC,除黄芪外,各单味中药和复方组合对IBV均具有不同程度的直接灭活作用,最小有效浓度均达到1/128以上,其中贯众达到1/4 096;在接种IBV前2 h以及接种IBV后2 h给药,黄芩、贯众、板蓝根、鱼腥草及复方中药均能明显抑制IBV的繁殖,最小有效浓度均达到1/256以上,其中贯众效果显著,达到1/2 048.人工感染防治试验显示:治疗组和预防组所分离到的病毒毒力均低于感染组,复方中药对感染传染性支气管炎病毒鸡的保护率为93.33%,治愈率为75%.表明该复方中药对鸡传染性支气管炎具有良好的预防作用和治疗作用,且预防效果强于治疗效果.     

中药黄芩苷对鸡胚成纤维细胞的安全浓度和生长的影响

为了研究中药黄芩中有效成分黄芩苷对鸡胚成纤维细胞(CEF)生长的影响,应用细胞病变观察法(CPE)观察黄芩苷对CEF细胞生长的影响,并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定黄芩苷对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度。黄芩苷浓度在312.5μg/m L时为最大安全浓度,低于此浓度时黄芩苷能促进CEF的贴壁及生长,细胞生长良好,呈梭形,折光性强。结果表明,黄芩苷在中、低浓度能促进CEF细胞的贴壁和生长且对CEF细胞的作用都具有时效性,应用细胞病变观察法与MTT法,最终得出黄芩苷对CEF的最大安全浓度为312.5μg/m L。     

不同鸡传染性支气管炎疫苗毒株对新城疫La Sota株的增殖干扰试验

为观察IBV不同疫苗毒株H120、H52、4/91、28/86、Ma5及W93株对NDV增殖的干扰作用,采用不同浓度的IBV疫苗毒株与NDV La Sot a毒株分别按不同顺序接种,同胚增殖。利用血凝试验(HA)测定NDV效价,以判断IBV对NDV的干扰作用,为同胚增殖两种病毒提供参考数据。试验结果表明,IBV不同疫苗毒株能干扰NDV La Sot a增殖,干扰作用与其接种顺序、接种浓度及收毒时间有关。     

鸡传染性支气管炎病毒与新城疫病毒在鸡体中的干扰

据Beara和Raggi Piguattelli(1975)报道,鸡传染性支气管炎病毒(IBV)与新城疫病毒(NDV)两种病毒在细胞培养物上和鸡胚中均出现干扰现象.我们的